组胺H4受体在口腔上皮异常增生和口腔舌鳞状细胞癌中的表达

组胺(Histamine)及组胺H4受体H4R (Histamine H4 receptor)在癌症发生发展中具有重要作用。目前,H4R在口腔上皮异常增生(oral epithelial dysplasia, OED)和口腔舌鳞状细胞癌(oral tongue squamous cell carcinoma, OTSCC)中的作用尚不清楚。本研究采用免疫组化法检测OED、OTSCC和健康口腔粘膜组织中H4R的表达情况。并分析人口腔角质细胞系(HOK)和人舌鳞状细胞癌HSC-3细胞系(HSC-3)中H4R及其合成酶L-组氨酸脱羧酶(L-histidine decarboxylase, HDC)的表达。应用肥大细胞释放物(MCR)刺激HOK细胞。研究发现,H4R在OED和OTSCC组织中显著下调(p0.05);H4R和HDC的m RNA表达在HSC-3细胞中下调(p0.05);肥大细胞释放物(MCR)刺激可下调HOK细胞中H4R和HDC的表达(p0.05)。本研究得出初步结论,H4R与口腔癌发生发展密切相关,癌症严重程度越高,H4R表达水平越低。口腔癌症组织中H4R的低表达可能通过肥大细胞释放物进行调节。     

850 nm波长微激光对肥大细胞脱颗粒及释放组胺的影响

目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞(RBL-2H3 (Rat basophilic leukemia))照射后组胺释放的影响.方法:肥大细胞铺于96板上,密度为5×104/孔,12 h后细胞经D-Hank's缓冲液清洗3次用于实验.肥大细胞经微激光照射15 min后,轻轻吸取细胞上清液,加入等量0.1 mmol/L的邻苯二甲醛,充分混匀,室温下反应20 min后,于荧光酶标仪上测量混合物的荧光光谱.结果:微激光照射之后的肥大细胞上清液,能发出440 nm左右的荧光,说明850 nm微激光能使肥大细胞脱颗粒,从而判断850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源.     

肥大细胞在脂肪组织中的作用

肥大细胞(mast cells)起源于骨髓造血干细胞，定植到机体各个外周组织后继续发育成熟，在过敏性反应和预防微生物感染等方面发挥重要作用。近来研究发现，肥胖患者的脂肪组织含有大量肥大细胞，引发人们对脂肪组织中肥大细胞作用的关注。肥大细胞可释放出多种生物活性介质，作用于脂肪组织，影响脂肪组织中细胞外基质的重塑和各种炎性细胞的活动。更多研究还表明肥大细胞可能参与到肥胖、糖尿病等代谢性疾病的发病机理，影响疾病的进展。本文总结近年来对脂肪组织中肥大细胞研究的一系列成果，对肥大细胞在脂肪组织中的生物学作用进行综述。     

免疫荧光染色检测克隆牛X染色体组蛋白H3 Lys 4 二甲基化修饰

利用免疫荧光染色, 检测胎儿成纤维细胞(FFB)和输卵管上皮细胞(FOV)来源的克隆牛X中期染色体组蛋白H3 K4m2修饰状况。结果发现, 这两种细胞系来源的克隆牛耳组织细胞系X染色体H3 K4m2修饰与供体核FFB细胞系和常规繁殖牛耳组织细胞系的修饰基本一致, 而与供体核FOV细胞系有较大差异。     

山茱萸抗过敏活性组分的筛选及其对RBL-2H3细胞脱颗粒的作用CSCD

为研究山茱萸中抗过敏活性成分,采用透明质酸酶抑制实验对山茱萸中活性组分进行初步筛选;采用细胞脱颗粒抑制实验对透明质酸酶抑制活性较高的组分进一步评估;采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行成分分析。结果表明山茱萸石油醚部位(petroleum ether extract of Corni Fructus,COPE)具有显著透明质酸酶抑制活性,其IC50值为3.11 mg/mL;经硅胶柱层析分离得到4个透明质酸酶抑制活性更高的组分,其中组分COPE-8对RBL-2H3细胞脱颗粒抑制作用更显著,呈剂量依赖形式且具低细胞毒性。经20μg/mL COPE-8处理后,RBL-2H3细胞脱颗粒释放的组胺和β-氨基己糖苷酶分别减少46%和39%;经GC-MS分析,COPE-8中主要活性物质为萜类物质,包括α-香树脂醇、β-香树脂醇和香紫苏醇。结果表明COPE-8具有显著的抗过敏活性,在抗过敏活性物开发方面具有一定的应用价值。     

流感病毒在Vero细胞系与MDCK细胞系增殖条件的比较

目的研究流感病毒H1N1及其他亚型在Vero细胞系和MDCK细胞系高效增殖的最适条件,比较两种细胞系对流感病毒的敏感性差异及影响敏感性差异的条件。方法在培养好的Vero细胞系与MDCK细胞系用不同的病毒感染复数(M.O.I)、胰酶浓度、病毒吸附时间、病毒维持液血清质量浓度等条件进行流感病毒在细胞上的增殖。结果在M.O.I为0.01接种流感病毒,吸附时间为1 h,胰酶质量浓度2μg/mL,血清质量浓度为8%时,流感病毒血凝素在MDCK细胞系可获得较高的滴度。结论 MDCK细胞系是适于流感病毒培养的细胞,它作为生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质需要进一步的研究。     

H9c2细胞对B组柯萨奇病毒3型重组株的易感性

H9c2细胞是来源于大鼠胚胎心脏组织的成肌细胞系,B组柯萨奇病毒(group B Coxsackievirus,CVB)是心肌炎和扩张型心肌病的主要病原.本研究观察了CVB3在H9c2细胞中的感染性,探讨H9c2细胞是否可用于CVB致心肌疾病的实验研究.用整合了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或海肾荧光素酶(RLuc)的...     

线粒体遗传疾病细胞模型的构建:永生淋巴细胞系和转线粒体细胞系

线粒体基因组突变会引发多种线粒体遗传疾病。永生淋巴细胞系和转线粒体细胞系是线粒体遗传疾病研究的重要工具之一。永生淋巴细胞系使特殊遗传信息在细胞水平得以永久保存。转线粒体细胞系技术的发展为线粒体遗传疾病的分子机制研究提供了体外细胞平台。早期转线粒体细胞系的胞质供体直接来源于未进行永生化的患者各组织细胞或血小板。本文结合永生化手段,以线粒体4401AG为例,详细介绍了从冻存全血构建永生化淋巴细胞,然后再与ρ0 206一起构建转线粒体细胞系的原理、方法和技术路线,并将两种细胞模型的构建归纳为4个步骤:(1)永生淋巴细胞构建;(2)转化;(3)筛选;(4)鉴定。为真实反应线粒体突变的功能,本文对构建的永生淋巴系和转线粒体细胞系的线粒体突变位点、拷贝数以及转线粒体细胞系的细胞核型进行了分析与鉴定,选取了各参数一致的细胞系用于贮存与分析,以减少实验误差对后续突变位点功能研究的影响。两种细胞模型在细胞水平上为诠释线粒体遗传疾病的分子机制发挥了重要作用,但在具体应用中需注意它们的局限性,尤其是组织特异性的线粒体疾病。     

组蛋白修饰对胚胎干细胞分化过程[]的调控机制

选用人类胚胎干细胞系和由人类胚胎干细胞系分化来的神经干细胞系为研究对象,分析组蛋白修饰对胚胎干细胞分化过程的调控作用。得到了两种细胞系差异表达基因转录起始位点侧翼区域内八种组蛋白修饰的分布模式,以及组蛋白修饰功能簇。研究表明在两类细胞系中,八种组蛋白修饰谱分布模式一致,且呈现两种分布类型; H3K27ac,H3K4me3和H3K9ac组成的功能簇是保守的;H3K27me3,H3K36me3和H3K79me1组成的功能簇以及H3K9me3和H3K27me3组成的功能簇在胚胎干细胞向神经干细胞分化的过程中消失。结果揭示了组蛋白修饰对胚胎干细胞系向神经干细胞系分化过程的部分调控机制,为该分化过程分子调控机制的研究提供部分重要的理论基础。     

Cytohesins介导EGFR 通路在结直肠癌细胞增殖中的作用

目的:研究Cytohesins介导EGFR通路在结直肠癌细胞增殖中的作用。方法:选择人结直肠癌细胞系HT-29作为研究细胞,采用免疫荧光检测结直肠癌细胞系HT29中EGFR表达情况,Secin H3阻断结直肠癌细胞系HT29细胞内cytohensins观察细胞内EGFR通路激活情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果:EGF+Secin H3组细胞内p-EGFR水平显著低于EGF组(P0.05)。第3、5天,各组细胞增殖情况存在显著差异(F=38.072,P0.05),其中EGF组显著高于Secin H3阻断组(P0.05)和对照组(P0.05),对照组吸光度值显著高于Secin H3阻断组(P0.05)。结论:EGF与结直肠癌细胞的增殖密切相关,通过阻断Cytohesins介导EGFR通路能够显著抑制结直肠癌细胞的增殖。     

肥大细胞激活相关受体及其功能研究进展

肥大细胞广泛分布于机体各个部位,常见于机体与外部环境之间的粘膜表面,是重要的免疫细胞之一,在固有免疫、适应性免疫及免疫调节中发挥着重要的作用。研究表明,肥大细胞的过度激活与哮喘、过敏性鼻炎、食物过敏、急慢性瘙痒等过敏性及炎性疾病的发生、发展密切相关,主要表现为肥大细胞向炎症部位浸润并释放多种过敏介质。阻断肥大细胞激活可作为有效治疗过敏性及炎性疾病的手段之一,因此与肥大细胞激活相关的受体是临床药物开发的有效靶点。激活肥大细胞的相关受体种类较多,并且不同的受体所介导产生的效应也不尽相同,新的肥大细胞受体不断被发现,然而,对这些研究的梳理比较少。本综述总结了参与肥大细胞激活的相关受体,依据不同效应对受体进行分类,并对其下游信号通路及应用进行阐述。     

H_2O_2诱导小鼠肌原细胞系C2C12 UII/UT系统的高表达

目的:观察外源给予H2O2对C2C12细胞中UII/UT系统表达的影响。方法:培养小鼠肌原细胞系C2C12细胞株,应用胎盘蓝染色和测定细胞培养液中LDH的含量检测H2O2对细胞损伤的影响,应用放射免疫的方法检测细胞培养液和裂解液中UII的含量,应用RT-PCR法测定C2C12中UT mRNA的表达,应用Western Blot检测不同浓度H2O2对肌原细胞系C2C12中UT蛋白表达的影响。结果:外源给予不同浓度的H2O2,C2C12细胞裂解液中UII的含量各组间无明显差异,但增加了细胞孵育液中UII的含量,10-4 M和10-3 M时分别增加了83.1%(p0.01)和94.5%(P0.01)。低浓度H2O2(0.5×10-6 M,10-6 M,10-5 M,10-4 M)刺激明显增加了UT m RNA的表达,而高浓度的H2O2(10-3M)刺激反而使UT mRNA的表达降低。高浓度的H2O2(10-6 M,10-5M,10-4 M,10-3M)刺激使UT蛋白表达分别增加了200.1%、255.6%、111.1%和100.1%(均p0.05)。结论:H2O2作为T2DM发病因素之一的活性氧族,可能是T2DM时骨骼肌组织中UII/UT系统表达增加的一个因素。     

肥大细胞在动脉粥样硬化形成中的作用

动脉粥样硬化,是冠心病的病理基础,被认为是一种慢性炎症性疾病,涉及如巨噬细胞和T淋巴细胞等许多炎性细胞。肥大细胞是一种重要的免疫细胞,其功能主要是在超敏反应方面的作用。有病理学研究表明：肥大细胞在动脉粥样硬化斑块周围表达增加,这表明肥大细胞可能与疾病的进展有关。最近的研究表明,肥大细胞在动脉粥样硬化中确实起着重要的作用。本文通过总结肥大细胞在动脉粥样硬化形成中的作用,为在疾病进程中,通过调节肥大细胞功能来改善动脉粥样硬化的这种治疗方式的可能性提供依据。     

肥大细胞在动脉粥样硬化形成中的作用

动脉粥样硬化,是冠心病的病理基础,被认为是一种慢性炎症性疾病,涉及如巨噬细胞和T淋巴细胞等许多炎性细胞。肥大细胞是一种重要的免疫细胞,其功能主要是在超敏反应方面的作用。有病理学研究表明:肥大细胞在动脉粥样硬化斑块周围表达增加,这表明肥大细胞可能与疾病的进展有关。最近的研究表明,肥大细胞在动脉粥样硬化中确实起着重要的作用。本文通过总结肥大细胞在动脉粥样硬化形成中的作用,为在疾病进程中,通过调节肥大细胞功能来改善动脉粥样硬化的这种治疗方式的可能性提供依据。     

应用慢病毒shRNA文库结合二代测序筛选白血病细胞系增殖相关lncRNA北大核心CSCD

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是包括细胞增殖在内的许多细胞过程的重要调节因子。虽然已有研究表明多种lncRNA在造血系统恶性肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,但是缺少一个更全面和无偏倚的方法同时研究多个lncRNA中对白血病细胞系产生功能性影响的lncRNA。在此,我们利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)文库结合高通量测序的方法,筛选对白血病细胞系增殖有影响的lncRNA,确定了74个候选lncRNAs。从中选取lncRNA C20orf204-203作为验证研究对象,发现C20orf204-203在K562和THP-1细胞系中均定位于胞质,敲降C20orf204-203的K562和THP-1细胞系增殖能力降低,早期凋亡细胞增加,BAD基因在mRNA水平上表达量增加,TP53、BCL2蛋白表达量下降,在THP-1细胞系中Caspase 3蛋白表达量减少,激活型Caspase 3蛋白表达量上升,但是二者变化在两种细胞系中不一致。结果表明,在白血病细胞系中敲降lncRNA C20orf204-203会使细胞增殖能力降低。但其在不同细胞系作用途径和机制可能存在差异。这一研究表明了利用shRNA文库结合高通量测序大规模研究lncRNA在白血病细胞系中发挥作用的可行性。     

肝癌细胞系（HepG2）感染HCV RNA的研究

为建立丙型肝炎病毒（HCV）体外感染和细胞培养系统,用定量的HCV RNA阳性血清感染人肝癌细胞系（HepG2细胞系）,应用地高辛标记HCV RNA探针原位杂交技术和RT－PCR方法对感染后的细胞和上清液听 HCV RNA进行了检测。在感染后的第一代至第七代的细胞中出现特异性杂交阳性信号,第一代、第二代和第六代检测出HCV RNA正链,并在感染后第一、二代检测出HCV RNA负链。显示HCV不仅能在体外感染HepG2细胞系,而且在基因的复制,证明HepG2细胞能作为HCV的体外细胞培育系。     

肥大细胞在病毒感染中的作用

自从Paul Ehrlich于1878年首次发现肥大细胞以来,肥大细胞作为过敏反应中非常重要的效应细胞之一被广泛研究。直到近20年,人们才逐渐认识到肥大细胞参与多种病理、生理过程,尤其是在机体抗感染、免疫与免疫病理损伤中也发挥着重要作用。随着人们对肥大细胞在细菌和寄生虫的抗感染、免疫中作用的理解不断深入,肥大细胞在病毒感染及病毒引起的相关疾病中的作用逐渐成为备受关注的研究热点,现就肥大细胞在不同病毒感染中的作用作一综述。     

Palmin诱导烟草氧化猝发的机制

为探讨植物对病原微生物的防御机制和激发子启动植物体内的信号转导应答过程 ,本文研究了Phytoph thorapalmi激发子palmin诱导其非寄主亲和性烟草的叶片和悬浮细胞系产生氧化猝发的分子机理。利用生化分析和激光共聚焦显微扫描技术动态观察palmin诱导烟草过敏反应中O·- 2 和H2 O2 的形成、胞间转移及引起细胞死亡的特性。结果表明 :palmin诱导激活了烟草细胞内NADPH氧化酶 ,产生大量的O·- 2 ;O·- 2 在SOD催化下迅速转变成H2 O2 ,并且H2 O2 在一定范围的细胞间转移和积累 ,最后诱发烟草细胞的过敏性坏死反应。palmin诱导氧化猝发过程还有Ca2 和蛋白激酶的参与。     

IgE介导的肥大细胞脱颗粒信号转导途径的研究进展

肥大细胞(mast cell,MC)是过敏性疾病的关键细胞之一.机体的过敏反应很大程度依赖于肥大细胞膜上的特异性受体FcεRI.肥大细胞膜上交联的FcεRI引发了下游的一系列信号事件并导致脱颗粒,包括细胞因子及趋化因子产生以及白三烯的释放.由于IgE在过敏反应中的重要作用,现在的研究主要集中在FcεRI下游的信号事件.其脱颗粒的分子机制是一个由多种蛋白质分子介导的,各个环节受到精确调控的复杂过程.对肥大细胞脱颗粒分子机制的深入研究将给过敏性疾病提供一个新的治疗方案.