硫酸软骨素蛋白聚糖在脑发育中的作用

蛋白聚糖 (ＰＧ)是一种或多种糖胺聚糖链 (ＧＡＧ)和核心蛋白共价结合形成的复合物 ,硫酸软骨素蛋白聚糖 (ＣＳＰＧ)即核心蛋白与硫酸软骨素 (ＣＳ)链共价交连的一类蛋白聚糖 ,不同的核心蛋白与ＣＳ链相连形成不同的ＣＳＰＧ。聚集蛋白聚糖家族 (ａｇｇｒｅｃａｎｆａｍｉ ｌｙ) ,磷酸蛋白聚糖 (ｐｈｏｓｐｈａｃａｎ) ,神经蛋白聚糖Ｃ(ｎｅｕｒｏｇｌｙＣ)是哺乳动物脑发育中的 3种经典的ＣＳＰＧ。其它如星形软骨素蛋白聚糖(ａｓｔｒｏｃｈｏｎｄｒｉｎ) ,饰胶蛋白聚糖 (ｄｅｃｏｒｉｎ) ,睾丸蛋白聚糖 (ｔｅｓｔｉｃａｎ) ,细胞蛋白聚糖 …     

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能机制研究进展

硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是由核心蛋白和与之相连的硫酸乙酰肝素糖链组成,广泛分布于细胞膜与细胞外基质中。其中多配体蛋白聚糖（syndecan）和糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白聚糖（glypican）存在与细胞膜上,而串珠蛋白聚糖（perlecan）和组合蛋白聚糖（agrin）表达在细胞外基质中。该类蛋白在生理与病理历程中,如发育、伤口愈合、肿瘤发生发展、感染、免疫应答等过程中担任重要作用,这些功能是其核心蛋白和糖链共同作用的结果。概述硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的功能及其机制研究进展,同时强调其在作为药物靶标和临床诊断研究中的应用。     

活性氧及过渡金属对关节软骨蛋白聚糖降解的影响

在温育的小牛关节软骨切片介质中加入黄嘌呤氧化酶/次黄嘌呤活性氧产生系统,可使关节软骨蛋白聚糖的降解显著增高。这种作用不能被超氧化物歧化酶或铁络合剂二乙三胺戊乙酸抑制,但可被过氧化氢酶抑制。在温育的介质中加入H_2O_2,也可使关节软骨蛋白聚糖降解增高,Cu~(2+)或Co~(2+)对此有显著促进作用,其它过渡金属则作用不明显。应用Sepharose 6B柱层析,分析软骨蛋白聚糖降解产物,多数实验组只在kD=0处有一个大分子的洗脱峰,但Cu~(2+)+H_2O_2组则在kD=0及0.57处出现两个洗脱峰(分别称为峰Ⅰ及峰Ⅱ)。醋酸纤维素薄膜双向电泳证实峰Ⅱ为硫酸软骨素,提示Cu~(2+)与H_2O_2复合物可导致蛋白聚糖分子的断裂。本研究结果可能有助于阐明某些变性型骨关节疾病的发病机理,例如因缺硒所致的大骨节病等。     

人动脉壁蛋白聚糖与血清脂蛋白形成的不溶性复合物

本文报道了人主动脉壁中正常及异常(脂纹,FS)区的三种蛋白聚糖(PG)即:硫酸软骨素PG(CSPG)、硫酸皮肤素—硫酸软骨素PG(DSCSPG)及硫酸乙酰肝素PG(HSPG)与血清极低密度脂蛋白(VLDL)及低密度脂蛋白(LDL)所形成的不溶性复合物。在30mmol/L Ca~(2+)对,三种PG都能与这两种脂蛋白形成不溶性复合物,随放置时间的增加,形成的复合物都发生解离,但其复合物形成的曲线及解离程度明显不同。DSCSPG与CSPG比较,前者与两种脂蛋白更易形成不溶性复合物且不易解离。HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物所需时间远大于CSPG及DSCSPG。FS区及正常区三种PG形成复合物曲线类型相似,异常区CSPG、DSCSPG与VLDL形成的复合物量低于正常区的相应PG,而与VLDL则高于正常区的相应PG。异常区的HSPG与两种脂蛋白形成不溶性复合物的量均高于正常区。     

斑马鱼蛋白酪氨酸硫酸化修饰的检测方法研究

蛋白酪氨酸硫酸化(protein tyrosine sulfation, PTS)是一种重要的翻译后修饰,调控生命活动中多种生理和病理过程,但由于PTS状态不稳定且目前缺乏有效的富集方法,因此在生物样品中难以进行有效地检测。本研究以模式动物斑马鱼(Danio rerio)为研究材料,利用Orbitrap Exploris 480高分辨质谱仪检测了斑马鱼胚胎发育早期总蛋白的酪氨酸硫酸化修饰水平,通过该方法共计检测到26种蛋白(包括膜蛋白、分泌蛋白、胞质蛋白和核蛋白等)存在潜在的29个酪氨酸硫酸化修饰位点。本研究建立了斑马鱼胚胎发育早期蛋白酪氨酸硫酸化修饰的检测方法,为探索生物体蛋白硫酸化修饰的作用机制奠定了技术基础。     

糖枣多糖经硫酸化修饰前后对酪氨酸酶抑制作用分析

为促进湖南地区枣果资源的开发与利用,探索糖枣多糖对酪氨酸酶活性的影响。以三年生糖枣为试材,将其水提多糖依次采用DEAE-52纤维素和Sephadex G-100葡聚糖柱层析,分离出多糖组分;分别测定各组分多糖经硫酸化修饰前后对酪氨酸酶的抑制作用,并对抑制活性最强的部分进行动力学研究。结果表明:DT_(B3)的酶活性抑制率最高,达到77.94%,DT_C的酶活性抑制率次之为69.93%,其余组分对酶活性抑制率均小于50%;经硫酸化修饰后,多糖组分DT_(B3)和DT_C对酪氨酸酶抑制率变化较小,DT_A、DT_(B1)、DT_(B2)对酪氨酸酶抑制率在原有的基础上都有较大的提高,分别提高了60.19%、41.66%、29.55%,其抑制率分别达到了56.54%、58.53%、61.60%,但都远低于70%。同时DT_(B3)能在短时间内与酶快速的结合,并显示出较强的活性抑制能力,且呈现非竞争性抑制类型。由上可知,各组分多糖对酪氨酸酶活性抑制率的大小存在一定的差异,多糖经硫酸化修饰后对酪氨酸酶的抑制率具有一定的影响,糖枣多糖中DT_(B3)对酪氨酸酶具有较高的抑制作用,存在一定的开发利用价值。     

多糖硫酸化修饰和多糖硫酸酯的研究进展

硫酸多糖是一类糖羟基上带有硫酸根的多糖,包括从植物中提取的各种硫酸多糖、肝素、天然多糖的硫酸衍生物及人工合成的各种硫酸多糖。硫酸多糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗凝血和增强免疫等生物活性,为提高中药多糖的生物活性,可通过硫酸化修饰的方法进行结构改造,获取多糖硫酸酯。本文就多糖的硫酸化修饰方法、多糖硫酸酯的生物学活性及其影响因素、作用机制和临床应用进行了综述。     

人血清脂蛋白与糖胺聚糖及人主动脉蛋白聚糖的相互作用

本文报道了在[Ca~(2+)]=30mmol/L时,人血清或人血清脂蛋白与各种糖胺聚糖(GAG)及人主动脉两种蛋白聚糖(PG)的相互作用。GAG与血清的作用能力为6—硫酸软骨素(C6—S)>肝素(Hep)>4—硫酸软骨素(C4—S)>透明质酸(HA)>硫酸皮肤素(DS)。极低密度脂蛋白(VLDL)及低密度脂蛋白(LDL)可与肝素作用形成不溶性复合物,而高密度脂蛋白(HDL)则不能。人主动脉硫酸软骨素—PG(CS—PG)、硫酸皮肤素—硫酸软骨素—PG(DS—CS—PG)与血清形成不溶性复合物的曲线类型不同,后者的类型似有利于DS—CS—PG与血清脂蛋白结合从而使之在动脉壁沉积。     

不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的合成及理化性质初步研究

目的:对昆布多糖进行不同硫取代度的硫酸酯化修饰,并对其产物的硫酸基含量、糖含量与分子量进行检测,为研究不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的生物活性奠定物质基础。方法:采用氯磺酸-吡啶法对昆布多糖进行硫酸化修饰,通过改变硫酸化修饰条件,来制取不同硫酸基取代度的昆布多糖硫酸酯;利用盐酸水解-硫酸钡比浊法测定昆布多糖硫酸酯的硫酸基含量,并通过公式求得其硫取代度;用苯酚-硫酸法测定昆布多糖硫酸酯的多糖含量,并使用HPGPC法测定其分子量。结果:两种不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的硫酸基含量分别为37.8%、45.92%,取代度分别为1.07、1.51,糖含量分别为44.52%、37.19%,分子量分别为13000、16000。结论:利用氯磺酸-吡啶法对昆布多糖进行硫酸酯化修饰,该方法可以获取不同取代度产物,酯化率高。     

RIP1泛素化修饰调控程序性坏死的研究进展

在过去的二十年中,随着对程序性坏死(necroptosis)研究的不断深入,学者们发现多种死亡受体激活可引起程序性坏死,其中研究最为透彻的是肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)。在TNFR1激活引起细胞发生程序性坏死的信号转导过程中,细胞内先后形成复合物Ⅰ(complexⅠ)和坏死小体(necrosome)。这2个复合物中都含有一个关键蛋白——受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)。复合物Ⅰ中的RIP1存在多种多聚泛素化修饰,且多聚泛素化修饰种类和水平的变化能决定细胞的命运——炎症、凋亡或坏死。此外,坏死小体中的RIP1也存在多聚泛素化修饰。然而,RIP1的泛素化修饰如何调控细胞信号转导和促进坏死小体的形成尚未被完全阐明。该文对RIP1泛素化修饰调控细胞程序性坏死的研究进展进行综述。     

过硫酸化岩藻多糖硫酸酯

岩藻多糖硫酸酯(fucoidan或fucan sulfate,FS)是一种硫酸多糖,具有多种生物活性。硫酸基团对多糖活性起重要作用,并且多糖活性与硫酸基团含量呈正相关。近些年,国内外研究者对SF进行硫酸化修饰以获得高硫酸基团含量和高活性的过硫酸化岩藻多糖硫酸酯。为促进对FS硫酸化修饰的深入了解,本文对FS活性与硫酸基团含量及位置的关系、过硫酸化方法及过硫酸化岩藻多糖硫酸酯活性的研究进展进行了综述。     

响应面法探讨氯磺酸-吡啶法修饰条件对硫酸化当归多糖取代度的影响

用氯磺酸-吡啶法对当归多糖进行硫酸化修饰。用响应面法研究了修饰条件中反应温度(A)、反应时间(B)和氯磺酸-吡啶比例(C)三个因素对产物的硫酸基取代度的影响,建立回归模型,验证了其有效性,并分析了主效应和因素交互作用。结果表明,在A为65~95℃、B为60~180 m in、C为1:3~14.3范围内,三个因素与产物平均取代度(Y)的回归模型为Y=2.74+0.66×A+0.66×B+0.80×C+0.51×A×B-0.31×A×C-0.16×B×C-0.34×A2-0.23×B2-0.50×C2;F检验证明模型拟合较好,可以用于量化控制反应条件;三个因素对取代度的影响程度为CA=B,A和B之间存在极显著的交互作用。     

薤白多糖的硫酸化修饰及体外抗氧化活性

为探讨薤白多糖硫酸化修饰的最佳条件,以及硫酸化修饰提高薤白多糖活性的可能性,采用氯磺酸-吡啶法对醇沉法得到的薤白多糖和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行硫酸化修饰,以氯磺酸-吡啶配比、反应温度和反应时间为自变量,修饰产物的硫酸基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定硫酸化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性。结果表明:薤白多糖氯磺酸-吡啶法修饰的最佳条件为氯磺酸∶吡啶=1∶3,反应温度65℃,反应时间2 h,此条件下硫酸根取代度为0.470,硫酸化修饰能提高薤白多糖的体外抗氧化活性。     

糖蛋白物与发育

糖与蛋白质或脂类共价结合而成的糖蛋白、蛋白聚糖、糖脂以及脂多糖统称糖复合物 ,最近几年人们对糖复合物在生物发育过程中的作用进行了大量的研究 ,已经在许多方面取得了重大进展。1 .糖复合物与配子发生和受精配子发生和受精过程中有大量糖复合物的参与 ,他们在配子发生、精卵识别与受精以及受精完成后防止多精穿入的皮层反应等过程中发挥作用。哺乳动物精子表面有一层几百种糖蛋白组成的糖萼 ,其成熟是精子成熟的标志。射出的精子头部外表面的糖蛋白能阻止顶体酶的释放 ,在获能过程中该糖蛋白被雌性生殖管道分泌物中的酶降解后精子才获…     

非晶状体 -晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物的细胞核转运及其选择性杀伤肿瘤细胞机制的研究

非晶状体βγ晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物(βγ-CAT)是从大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤分泌物中分离的分子量为72 kDa的天然蛋白复合物.本研究通过激光共聚焦显微镜和Westem blot分析βγ-CAT在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细胞核转运机制,以及βγ-CAT对多株肿瘤细胞(HCT116,HT29,A375,Hela,THP-1等)的细胞毒效应.结果表明:βγ-CAT的α亚基中含有典型的GTP/ATPase的保守结构模体Walker A和Walker B,体外检测到βγ-CAT具有GTP/ATP水解酶和GTP/ATP结合活性.在细胞核转运过程中,βγ-CAT的α亚基和β亚基参与形成约150kDa含有泛素化修饰信号的大分子复合物,且泛素化修饰信号和βγ-CAT的α亚基和β亚基共定位于细胞内和融合于细胞核区域的转运囊泡小体中.βγ-CAT能够选择性的杀伤肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞脱落和发生凋亡.上述结果为进一步深入研究阡βγ-CAT的细胞核转运和调节细胞功能的分子作用机制提供思路和线索.     

几种硫酸化试剂和溶剂对菊糖硫酸化改性的影响

为制取硫酸化菊糖,以硫酸钡比浊法测定硫酸基取代度(DS)、红外光谱测定含硫基团的特征吸收峰、核磁共振碳谱(13C NMR)判断硫酸根取代位置等方法,比较了以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)和吡啶(Py)三种溶剂,氯磺酸(CA)和三氧化硫(SO3)两种硫酸化试剂对菊糖硫酸酯化的影响.结果表明:以吡啶为溶剂、氯磺酸为硫酸化试剂的方法(CA-Py)与SO3-Py、CA-DMF三种硫酸化方法均获得了硫酸化菊糖,产品均显示不对称S=O键伸缩振动(约1255 cm-1)和对称的C-O-S键伸缩振动(约810 cm-1)特征吸收峰;三种方法的DS分别为:1.24,0.89,1.83;三种产品的13C NMR基本相同,均表明硫酸根连接在C3、C5、C6上.DMSO不适宜用作硫酸化溶剂.三种硫酸化方法是成功的,但以SO3-Py法操作简便,最适于菊糖硫酸化.     

不饱和硫酸二糖的纤维素薄板层析

提纯的人主动脉蛋白聚糖(PG)经碱性氢硼化钠处理生成氨基葡聚糖(GAG)。GAG经软骨素酶ABC消化生成Δ-4,5不饱和硫酸二糖,后者以纤维素薄板层析[标准二糖为Δdi—0S,Δdi—4S,及Δdi—6S;展开剂为：正丁醇：冰乙酸：2M氨水＝2：3：1(V／V)]可得到满意的层析谱。本法可用以鉴定PG(或GAG)中硫酸基位置及有关二糖的相对含量。     

硫酸化对金顶侧耳多糖构象及生物活性的影响

从金顶侧耳子实体中分离纯化一半乳甘露聚糖ＰＣ－３。该多糖在水中为无规线团构象,与Ｃｏｎ Ａ可相互结合并产生沉淀,对柯萨奇病毒ＣＢ５有一定的抑制作用,ＰＣ－３经硫酸化修饰后,由于同性电荷的排斥作用,使糖链的无规线团扩展呈伸展状态,局部可能形成螺旋。硫酸化的ＰＣ－３与Ｃｏｎ Ａ不能结合成多糖－蛋白复合物,但显著地提高了抗病毒ＣＢ５的活性。     

响应面法优化猴头菌硫酸化多糖

[目的]为了获得猴头菌多糖的最佳硫酸化修饰条件,提高猴头菌硫酸化多糖硫酸基团的取代度。[方法]采用单因素比较氯磺酸-吡啶摩尔比、反应温度和反应时间对猴头菌硫酸化多糖取代度的影响,利用响应面法对各因素的最佳水平以及各因素之间的交互作用进一步研究。[结果]猴头菌多糖的最佳硫酸化修饰条件为:氯磺酸-吡啶摩尔比为1:4、反应温度为59℃、反应时间为2. 6 h,取代度为0. 457,与模型的预测值基本相符。[结论]响应面法优化得到猴头菌多糖的硫酸化修饰条件参数准确,该模型可以用于猴头菌多糖硫酸化修饰条件的优化。     

中华蚱蜢精子发生过程中花生凝集素受体的分布与变化

采用生物素标记的花生凝集素(PNA)对中华蚱蜢(Acrida cinerea)精子发生过程中细胞质膜的糖蛋白(含有糖基Gal--β(1,3)-GalNAC)进行了标记,旨在认识精子发生过程中细胞质膜糖复合物的形成与变化规律,探讨其所具有的功能。结果表明,在中华蚱蜢的精子发生中,精母细胞能够自身合成PNA受体;精子细胞到成熟精子时期生精细胞质膜糖复合物发生了明显的修饰变化,这些变化与精子获得及卵子进行识别、粘附、结合等受精能力密切相关。