重组人干扰素α2b的提取和纯化

为了提高重组人干扰素α2b的质量 ,增加产量 ,降低成本 ,通过破菌 ,包涵体提取 ,离子交换层析 ,凝胶过滤等纯化方法制备干扰素纯品。结果表明干扰素纯度可达 95%以上 ,比活达到 1.2× 10 8IU/mg以上。结果提示 ,采用本方法收率高 ,纯度好 ,工艺稳定 ,适合大规模生产     

重组人干扰素α2b栓剂稳定性研究

将重组人干扰素α2b栓剂在不同温度下保存不同时间,检验干扰素生物活性、溶出度试验、融变时限、pH值和微生物限度及外观的稳定性。重组人干扰素α2b栓剂在4~8℃条件下放置48个月;在20~25℃条件下放置24个月IFN生物活性未见下降,37℃放置4个月IFN生物活性未见下降。重组人干扰素α2b栓剂的生物学活性及理化性质有较好的稳定性。     

重组人干扰素α2b栓剂稳定性研究

研究重组人干扰素α2b栓剂的稳定性。方法将重组人干扰素α2b栓在不同温度下保存不同时间,分别检验干扰素生物学活性、溶出度试验、融变时限、pH和微生物限度及外观的稳定性。结果重组人干扰素α2b栓在4~8℃条件下放置当时和放置48个月后的IFN生物学活性基本一致,未见下降;在20~25℃条件下放置24个月后IFN生物学活性未见下降,放置32个月后活性下降32%,36个月后IFN生物学活性下降55%;37℃条件下放置4个月后IFN生物学活性未见下降。结论重组人干扰素α2b栓剂的生物学活性及理化性质的稳定性好。     

注射用重组人干扰素α2b冻干制剂稳定性试验

本文通过对三批注射用重组人干扰素α２ｂ（ｒＩＦＮ－α２ｂ）冻干制剂在不同温度下,保存不同时间取样,对其外观、生物学活性、ｐＨ值、溶解状态及无菌试验等各项理化指标的观察试验,结果本品的冻干制剂在－２０℃和４－８℃的条件下保存４２个月,其上述各项检定指标无明显变化,均符合质检规程,即本文制品在此条件下稳定性良好,有效期可定为三年。同时说明该产品的生产工艺稳定。     

重组人干扰素α-2b滴鼻剂的研制

重组人干扰素α-2b(rIFNα-2b)滴鼻剂的试制及临床前工作研究.进行了理化和生物学性质试验、稳定性试验、鼻腔局部刺激性试验、急性毒性试验、长期毒性试验和动物体内抗病毒试验等.本品连续三批工艺稳定,检定合格,性质稳定,2～8℃保存24个月后生物学活性无明显下降,使用安全,无不良反应.其它各项试验均符合现行<中国药典>的要求.表明该制剂具有比较好的开发与应用前景.     

重组人干扰素α2b阴道泡腾片的研制

目的:制备重组人干扰素α2b阴道泡腾片,并对其质量和局部用药安全性进行研究。方法:将重组人干扰素α2b经制粒干燥,用酸、碱分开制粒法制备重组人干扰素α2b阴道泡腾片,按照《中国药典》对其性状、重量差异、崩解时限、pH、干扰素效价、水份含量、稳定性以及局部刺激性进行了考察。结果:本品处方、工艺合理,制备过程对干扰素生物活性影响较小;制剂质量符合规定,在4℃低温条件下保存具有较好的稳定性;局部刺激试验对家兔阴道组织无明显的刺激性。结论:该制剂质量稳定、可控,具有良好的稳定性和安全性。     

人干扰素α-2b生产工艺的研究

人干扰素α-2b的简易、高效生产工艺研究,包括高效率、小型化的发酵技术．不用单克隆抗体亲和层析的纯化工序．以及大肠杆菌表达的人干扰索α-2b包涵体蛋白的天然构型复性等问题．从10L基因工程大肠杆菌发酵液所得l000g菌体中得人干扰素α-2b约500mg,效价为l×10³u／mg,设备投资少,生产成本低,产品表现了高纯度、高效价。适宜大量生产,为广大人民群众提供廉价高质量药品创造了条件。     

人干扰素α—2b生产工艺的研究

人干扰素α-2b的简易、高效生产工艺研究,包括高效率、小型化的发酵技术,不用单克隆抗体亲和层析的纯化工序,以及大肠杆菌表达的人干扰素α-2b包涵体蛋白的天然构型复性等问题,从10L基因工程大肠杆菌发酵液所得1000g菌体中得人干扰素α-2b约500mg,效价为1×10~8u/mg,设备投资少,生产成本低,产品表现了高纯度、高效价。适宜大量生产,为广大人民群众提供廉价高质量药品创造了条件。     

聚乙二醇修饰重组人干扰素α-2b的碘染色法

目的：建立检测聚乙二醇位点特异性修饰重组人干扰素α-2b反应的方法。方法：采用分子量20000的甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺修饰重组人干扰素α-2b,反应混合物样品经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后,碘染色法判断反应产物组成。结果：该修饰反应产物除含有单PEG化的干扰素α-2b外,还有不同修饰程度的多PEG化干扰素。结论：本方法方便快捷、分辨率高、特异性强,同时可用于其它聚乙二醇修饰蛋白质的分析研究。     

用国产单克隆抗体纯化重组干扰素α1b的研究

制备高纯度的重组干扰素α1b的关键技术是单克隆抗体亲和层析。我们过去用英国Celltech公司提供的抗干扰素α单克姓抗体珠进行纯化。为适应大规模生产的需要,我们用安科生物高科技公司所建的杂交瘤细胞分泌的干扰素单克隆抗体及其制备的抗体珠进行纯化,获得较好的结果,纯化IFNα1原液纯度（SDS－PAGE,HPLC,比活）,鼠IgG及单克姓抗体珠的吸附量,使用次数等均符合要求,并用于大规模生产。     

rh-INFα2b治疗儿童毛细支气管炎的疗效及对免疫功能的调节作用

摘要 目的：探讨重组人干扰素α2b(rh-INFα2b)治疗儿童毛细支气管炎的临床效果及对免疫功能的调节作用。方法：选取我院儿科收治的毛细支气管炎患儿134例作为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组和对照组,每组各67例。两组均给予基础治疗措施,观察组采用雾化rh-INFα2b治疗,疗程均为一周。对比两组治疗前后的咳嗽、喘息、哮鸣音、三凹征症状评分、外周血T淋巴细胞分布、血清白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平的变化。结果：观察组治疗后的咳嗽、喘息、哮鸣音、三凹征症状评分均显著低于对照组(P<0.05),CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺均明显高于对照组(P<0.05),而CD8⁺测定值、血清IL-4、IFN-γ、IL-2水平均显著低于对照组(P<0.05);治疗7d后,观察组的痊愈率53.73%、显效率32.84%、有效率11.94%、无效率1.49%,对照组的痊愈率37.31%、显效率38.81%、有效率19.40%、无效率4.48%,观察组的痊愈率显著优于对照组(P<0.05)。结论：雾化rh-INFα2b可显著提高儿童毛细支气管炎的临床疗效,增强其免疫功能。     

疏水层析用于大规模纯化重组HBsAg的工艺研究

应用疏水层析法从CHO细胞培养液中纯化HBsAg,每根制备柱每次可处理细胞收液350L,在适宜的上样流速和层析温度条件下,层析后可去除96％的杂蛋白,再经超速离心和凝胶过滤层析,可获HBsAg纯品。经检定,HPLC纯度高于95％,其余各项检定指标均符合《中国生物制品规程》要求。结果表明,此方法纯化效率高、处理样品量大、成本低,适于大规模生产。     

抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制

应用鼠－鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α２ａ型干扰素（ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ）单克隆抗体细胞系１Ａ５、１Ｂ５和２７Ａ７。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价１∶２５６～１∶４０９６,腹水１∶２６×１０５～１∶２７×１０８。Ｉｇ亚类测定,１Ａ５和１Ｂ５ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,２７Ａ７为ＩｇＧ２ａ。三系ＭｃＡｂ均识别ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ,与ｒＨｕ－ＩＦＮ－α１和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ＥＬＩＳＡ试验,三系ＭｃＡｂ分别针对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ上三个不同表位。同ＭｃＡｂ建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ均可检测到１５０ｐｇ／ｍｌ,约１０ＩＵ／ｍｌ的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率９５％以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ提纯到９７％以上纯度。平均回收率为：１Ａ５单抗柱９０２％,１Ｂ５单抗柱９５３％,２７Ａ７单抗柱９４７％。比活性平均值依次为１９４×１０８ＩＵ／ｍｇ,１９７×１０８ＩＵ／ｍｇ和１６４×１０８ＩＵ／ｍｇ,残余鼠ＩｇＧ量均符合规程要求。纯化ｒＨｕ－ＩＦＮ?     

2013 年重组人干扰素alpha2b 注射剂评价性抽验质量分析

目的:评价国产重组人干扰素α2b注射剂的质量现状及存在问题。方法:采用法定检验方法结合探索性研究进行样品检验,统计分析检验结果,对国产重组人干扰素α2b注射剂的质量现状进行评价。结果:法定检验显示92批成品91批合格,合格率98.9%;24批原液20批合格(部分检验),合格率83.3%;探索性研究表明,按欧洲药典标准在原液中增加相关蛋白含量测定,则有两家企业的产品符合要求。结论:该品种总体质量状况良好,现行检验标准基本可行,建议在原液中增加相关蛋白含量检测。     

疏水层析纯化人重组白细胞介素－4

应用疏水层析对大肠杆菌表达的人重组白细胞介素－４（ｒｈＩＬ－４）进行了纯化,含有ｒｈＩＬ－４的包涵体,经洗涤、变性、复性后,以Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析,得到了高纯度的ｒｈＩＬ－４．纯度达９７％;回收率为３２％;比活性为２×１０~７Ｕ／ｍｇ,讨论了ｒｈＩＬ－４疏水层析的条件,并对不同的方法纯化白细胞介素－４进行了比较．     

Purification and characterization of recombinant human antithrombin containing the prelatent form in Chinese hamster ovary cells

Antithrombin (AT) is a serine proteinase inhibitor and a major regulator of the blood coagulation cascade. AT in human plasma has two isoforms, a predominant alpha-isoform and a minor beta-isoform; the latter lacks N-glycosylation at Asn 135 and has a higher heparin affinity. From the difference in its folding states, the AT molecule can be separated into three forms: a native form, a denatured and inactive form known as the latent form, and a partially denatured form called the prelatent form. In this study, we purified and characterized recombinant human AT (rAT) containing the prelatent form produced by Chinese hamster ovary (CHO) cells. When rAT was purified at physiological pH, its specific activity was lower than that of plasma-derived human AT (pAT). The latent and prelatent forms were detected in rAT by using hydrophobic interaction chromatography analysis. However, when rAT was purified at alkaline pH, the prelatent form was reversibly folded to the native form and the inhibitory activity of rAT increased to a value similar to that of pAT. Highly purified rAT was analyzed and compared with pAT by using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, circular dichroism spectroscopy, amino acid composition, N-terminal sequence, monosaccharide composition, peptide mapping, and heparin-binding affinity. From these analyses, rAT was found to be structurally identical to pAT, except for carbohydrate side-chains. rAT in CHO cells had a high beta-isoform content and it caused a higher heparin affinity than by pAT and also pH-dependent reversible inhibitory activity.     

重组人干扰素α2b凝胶联合乳酸菌阴道胶囊对宫颈高危型HPV持续感染的治疗

目的 观察重组人干扰素α-2b凝胶联合乳酸菌阴道胶囊治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HPV)持续感染的临床效果.方法 将110例宫颈高危型HPV持续感染而液基细胞学检查阴性的患者随机分为两组,其中对照组(58例)予以重组人干扰素α-2b凝胶治疗,观察组(52例)...     

药用级微生物谷氨酰胺转胺酶的纯化工艺研究

为了提高谷氨酰胺转胺酶的纯度和扩展在医药领域的应用,探索了一种适合工业化生产的、安全高效的微生物谷氨酰胺转胺酶纯化方法。轮枝链霉菌发酵后,经离心10 000 r/min 4℃除去菌体,调节发酵液电导率至4.1mS/cm和pH6.0后,以直线流速60cm/h通过SP Sepharose FF阳离子交换层析柱对目的蛋白高 选择性和高载量地捕获,再通过phenyl sepharose 6 FF（high sub）疏水层析柱进行精细纯化。纯化后经SDS-PAGE鉴定纯度达到95%以上,HPLC分析纯度> 99%。鲎试剂测定内毒素含量为0.013EU/ml,达到中国药典中血制品要求的低于0.15EU/ml标准。     

Evaluation of modified chitosan as matrix for hydrophobic interaction chromatography

Chitosan beads were modified with glutaraldehyde and modified chitosan was investigated as matrix for hydrophobic interaction chromatography. The influence of temperature, type of salt and its ionic strength on the adsorption of -galactosidase was studied. -Galactosidase was found to bind in presence of high concentration of ammonium sulphate (3 M, w/v) and 90% of the bound enzyme was eluted with decreasing salt concentration in presence of 10% ethylene glycol. Attempt was made to purify -galactosidase from modified chitosan, -galactosidase showed 1.7-fold purification with 43.96% recovery of enzyme activity. The SDS–PAGE analysis of enzyme showed considerable purification and its molecular weight was found to be 63–64 kDa. Unlike other chromatographic matrices, the prepared chitosan beads were used five times. The results showed that purification and recovery of the enzyme did not change even when column size was increased.     

重组人干扰素α-2b联合布地奈德雾化吸入对毛细支气管炎患儿炎性因子和康复进程的影响

目的:探讨重组人干扰素α-2b联合布地奈德雾化吸入对毛细支气管炎患儿炎性因子和康复进程的影响。方法:选取于2015年3月至2018年5月间徐州医科大学附属淮安医院收治的102例毛细支气管炎患儿,根据随机数字表法将患儿分为对照组(n=51)和研究组(n=51),对照组给予布地奈德雾化吸入治疗,研究组在对照组基础上联合重组人干扰素α-2b治疗。比较两组患儿临床疗效、临床指标情况,比较两组患儿治疗前、治疗6d后的炎症因子指标,观察两组患儿不良反应发生情况。结果:研究组患儿治疗6d后临床总有效率为92.16%,高于对照组患儿的76.47%(P0.05)。研究组患儿喘息消失时间、肺部啰音消失时间、退热时间、咳嗽消失时间以及住院时间均短于对照组(P0.05)。两组患儿治疗6d后白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均较治疗前降低,且研究组低于对照组(P0.05),干扰素-γ(INF-γ)均较治疗前升高,且研究组高于对照组(P0.05)。两组患儿治疗过程中不良反应发生率比较无统计学差异(P0.05)。结论:毛细支气管炎患儿采用重组人干扰素α-2b联合布地奈德雾化吸入治疗,疗效显著,可有效改善患儿临床症状,加速康复进程,能有效改善炎性因子水平,不良反应较少,具有一定的临床应用价值。