免疫沉淀法用于A群流脑多糖菌苗的鉴别试验

本文将免疫沉淀法——免疫双扩散及对流免疫电泳法用于Ａ群流脑多糖菌苗的鉴别试验。并对其检测Ａ群流脑多糖菌苗的特异性及敏感性与传统采用的间接血凝抑制试验法进行了比较。试验结果表明,免疫沉淀法准确、特异性好、操作简便、经济。完全符合ＷＨＯ规程及中国规程中对《Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程》鉴别试验的要求。因此可望替代现行的间接血凝抑制试验,以作为今后Ａ群流脑多糖菌苗鉴别试验的常规测定法     

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗稳定性研究

为确定A C群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期。对该疫苗在不同储藏温度下的稳定性进行了系统研究,将C群多糖抗原放置在37℃,A C群多糖疫苗分别放置在2-8℃,37℃和56℃,定期取样,用琼脂糖CL-4B凝胶柱层析后,测定Kd值在0.5以前的多糖回收率,结果表明,C群多糖抗原在37℃保存9周,A C群多糖疫苗于2-8℃保存4年,37℃保存88周,56℃保存10个月,多糖抗原或多糖疫苗的Kd值小于0.4,多糖回收率大于75%,符合规程要求;因而A C群脑膜炎球菌多糖疫苗的有效期可定为在2-8℃储藏条件下3年6个月。     

检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量ELISA法的建立

目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗体及酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对A群多糖抗原进行特异性定量测定。结果一系列验证试验表明,该法特异性较好,未检出与C、Y、W135群多糖的交叉反应;1.25～20 ng/mL多糖浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.98,经实验内10次及不同试验间以16、84、ng/mL测定3次A群多糖中的含量,变异系数在6.3%～11.5%间,回收率在91.8%～105.9%之间,符合常规质控要求,检测限量为4 ng/mL。采用该法测定3批ACYW135群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量、分子大小及回收率的结果均符合规程草案质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可尝试用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖的关键质量指标的检测。     

细菌内毒素对A群C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖蛋白质含量测定结果的影响

目的 探究Lowry法测定A群C群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)多糖原液蛋白质含量时,细菌内毒素对Lowry法的干扰情况。方法 根据《中华人民共和国药典》2015版(三部)规定的方法,测定含不同浓度的细菌内毒素的A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量,对检测结果进行分析。以细菌内毒素为干扰物质,设计3种方法进行验证,对验证结果进行离散系数,即CV值分析,确定干扰限值。结果 当细菌内毒素含量较高时,A群C群脑膜炎球菌多糖原液的蛋白质含量明显增高,该结果可能为假阳性。验证试验结果显示,当溶液中细菌内毒素浓度达到0.313EU/mL时,会对检测结果产生干扰,浓度越高,干扰程度越高。结论 为获得准确的检测结果,当细菌内毒素浓度达到干扰限值时,应先消除干扰,再测定蛋白质含量。     

发酵终点的选择对C群脑膜炎球菌精制多糖细菌内毒素含量的影响

目的研究不同发酵终点对C群脑膜炎球菌精制多糖细菌内毒素含量的影响。方法将250 L发酵罐中菌种同时均分接种于两个完全相同的1 200 L发酵罐并保持发酵参数完全一致,培养6～10 h,一罐参考A_(600 nm)值的峰值作为发酵终点,另一罐参考pH回升作为发酵终点,分别杀菌、离心、纯化获得精制多糖后,测定精制多糖中细菌内毒素含量、核酸含量、蛋白质含量、唾液酸含量、O-乙酰基含量、K_D值和K_D<0.5回收率等。结果以A_(600 nm)值达到峰值后0.5 h作为发酵终点,获得的精制多糖细菌内毒素含量较之于以pH回升至7.20作为发酵终点获得的精制多糖细菌内毒素含量低,差异有统计学意义(P<0.05),尽管前者精制多糖产量略低于后者(不超过10%),但其余质量指标(如K_D值和K_D<0.5回收率)几乎一致,前者核酸含量和蛋白质含量均更低,而唾液酸含量和O-乙酰基含量均更高。结论发酵后期参考A_(600 nm)值的峰值作为C群脑膜炎球菌发酵终点能够明显降低荚膜多糖细菌内毒素的含量,提高多糖产品质量。     

HPLC法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量

建立了高效液相色谱法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖的含量。样品经离心除去多糖后,采用阳离子交换柱分离,外标法定量分析。该法线性相关系数大于0.9999,回收率为98.8%,成品测定的CV值为1.2%(<2%),该法定量准确,重复性好,适于对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行快速检测。     

A＋C群脑膜炎球菌多糖疫苗的制备及其接种人体后的血清学效果

在现行的A群脑膜料球菌多糖原液制造工艺的基础上,经部分改进后进行C群脑膜炎球菌多糖原液的生产。3批中试A＋C群脑膜炎球菌多糖疫苗经全面检定后,各项指标均符合WHO《生物制品规程》的要求。该疫苗在接种人体后,5－13岁儿童组,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体4倍增长率为96．59％和92．15％;≤2岁儿童组,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体4倍增长率为68．60％和69．77％。2组儿童接种后1个月的抗A群及抗C群膜炎球菌血清杀菌抗体几何平均滴度（GMT）与接种前均有显著性差异（P＜0．001）。     

附子多糖FI的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE- C32柱层析分离 ,再通过 Sephadex G- 2 0 0柱层析进一步纯化 ,得到一种纯白色粉末状多糖 ,糖含量为 97% ,平均分子量为 2 .6× 10 5,熔点为 2 70℃。经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析 ,证明为葡聚糖。     

极大螺旋藻胞内多糖分离纯化及其结构的初步分析

本文以原产于非洲乍得湖的极大螺旋藻 (Spirulinamaxima)为材料 ,热水提取胞内粗多糖 ,丙酮、乙醚脱水脱色 ,再经改良的Sevag等方法脱蛋白 ,获得胞内多糖半精品 (Intracellularpolysaccharide ,IPSⅠ ) ,经DE 5 2、SephadexG 10 0层析柱纯化 ,得到两种单一组分的多糖精品 :IPSⅡA和IPSⅡB。利用HPLC、IR等方法测定其初步结构。结果显示 :IPSⅡA的平均分子量为 2 38,0 0 0Dt,主要单糖组成为L 岩藻糖、L 鼠李糖、D 木糖、D 半乳糖 (摩尔比为 6 .0 9∶3.38∶0 .6 6∶0 .0 72 ) ,硫酸根含量为 2 6 .3± 3.7μg/mg ,糖醛酸含量约为 13.37± 0 .4 5 μg/mg ;IPSⅡB的平均分子量为 34,90 0Dt ,主要单糖组成包括D 木糖、L 鼠李糖、D 果糖、D 葡萄糖、L 岩藻糖、D 甘露糖 (摩尔比为 6 .6 6∶4 .6 3∶0 .2 8∶0 .12∶0 .0 87∶0 .0 2 2 ) ,糖苷键构型以α型为主 ,硫酸根含量为2 1.5± 1.2 μg/mg。     

冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗安全性和免疫原性观察

为了评价冻干A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗(MPV)的安全性和免疫原性,按随机、盲法的原则,评价疫苗免疫后不良反应发生率、抗体阳转率及抗体几何平均滴度(GMT)。将606名健康观察者分为2～5岁、6～12岁、13～17岁、18～60岁四个年龄组,结果显示,该疫苗全身反应发生率2.64%,局部反应发生率1.32%,四个年龄组疫苗免疫后杀菌抗体阳性率分别为100%、100%、99.3%和100%,免疫后A群杀菌抗体GMT分别为1:250.47、1:190.61、1:144.22和1:205.79,免疫后C群杀菌抗体GMT分别为1:273.33、1:551.18、1:788.26和1:809.81,冻干A+C群多糖疫苗在≥2岁人群中具有良好的安全性和免疫原性,建议推广使用A+C群MPV。     

A群脑膜炎球菌多糖菌苗固体总量试验

本试验采用５０℃干烤法在不同实验条件下对Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗的固体总量进行了测定,并对其结果进行了比较。实验结果表明：（１）１ｍ１,２ｍｌ和４ｍ１取样量的固体总量之间无显著性差异。（２）采用２ｍｌ取样量用不同规格称量瓶和不同规格吸管对测定结果无明显影响。（３）采用１ｍ１、２ｍｌ和４ｍｌ取样量试验结果重复性均好。但从标准差及变异系数看,取样２ｍｌ或４ｍｌ者,试验误差更小,结果更为准确。     

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证.结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法.     

Dissemination of the ST-103 clonal complex serogroup C meningococci in Salvador,Brazil

Invasive meningococcal disease (IMD) is a major public health problem worldwide. An epidemic of serogroup C (NmC) IMD occurred in 2010 in the city of Salvador. In this study, we describe the antigenic and genetic characterization of meningococcal isolates collected from meningitis cases in Salvador from 2001 to 2012. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence typing (MLST) were performed for the analysis of IMD isolates. A total of 733 cases were identified, and the serogroup was determined for 391 (53.0%) of these. Most cases were caused by NmC (53%) or B (47%). The most prevalent strains were B:4,7:P1.19,15 (32.9%; 129/391) and C:23:P1.14–6 (28.6%; 112/391). Based on PFGE/MLST analysis, 71.3% (77/108 PFGE-tested isolates) clustered as two clones of sequence type ST-3779 and ST-3780, both belonging to the ST-103 clonal complex. ST-3779 has been detected in Salvador since 1996 and together with ST-3780 became predominant after 2005. There was a predominance of C:23:P1.14–6, ST-3779/3780 in Salvador during the period of 2007–2012, establishing a major clonal lineage, which remained in the community for a long time; this has serious implications for public health, particularly in terms of prevention and control strategies of IMD.     

C群流脑多糖菌苗唾液酸含量测定试验

Ｃ群脑膜炎球菌多糖菌苗是我们近年开发的一种新制品,其中唾液酸（ＳＡ）是该制品的有效成份之一。为了严格控制该制品的质量,经反复试验,对比各种试验条件,选择出较理想的测定ＳＡ方法－改良法,该法与Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ氏法比较,其标准曲线变异系数（ｃｖ％）为０．０３％,低于Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ氏法（０．３１％）;其回收率平均为１００．６２％。与中检所方法比较,无显著差异（Ｐ〉０．０５）,对批样品进行６     

C群脑膜炎球菌多糖纯化方法的改进

将C群脑膜炎球菌粗多糖的纯化改进为用1:1容量冷酚提取的生产工艺。结果表明,改进后的方法去除蛋白质效果同样能够达到《中国药典》2005版(三部)的要求,总体结果优于改进前。同时能扩大处理量而降低了生产成本,适合规模化生产。