人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０μｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总ＲＮＳ,经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ;将之克隆入ｐＵＣ１９中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０,转化大肠杆菌ＤＨ５α,观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素α原上游引物中Ａ、Ｔ含量     

人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总ＲＮＡ,经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ;将之克隆入ｐＵＣ１９中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。     

胸腺素α原基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR法从正常成人外周血和胎儿胸腺中分别克隆得到了四种胸腺素α原基因,经序列分析结果表明,克隆的四种ProTα基因的核苷酸序列并不一致。与已报道的胸腺素α原基因进行比较,胎儿胸腺中克隆的胸腺素α原基因几乎无变化,而从成人外周血中所克隆的则变化较大,但变化区域有一定规律,109-120位都有GGGAATGCTAAT碱基的缺失,变化较多的氨基酸集中为天冬氨酸和谷氨酸,而胸腺素α原前28个氨基酸、中心酸性区和末端核定位信号区域变化较小。该结果为胸腺素α原的结构、功能和演化研究提供了信息。     

胸腺素α原对老龄鼠T细胞和几种细胞因子分泌的影响

通过腹腔注射胸腺素α原（ｐｒｏｔｈｙｍｏｓｉｎα,ＰｒｏＴα）或直接用ＰｒｏＴα处理脾Ｔ细胞和腹腔巨噬细胞,检测ＰｒｏＴα对老龄鼠Ｔ细胞增殖活性、Ｔ细胞亚群、ＩＬ １、ＩＬ ２及ＴＮＦα活性的影响。实验结果表明：与对照组相比,ＰｒｏＴα在一定剂量上可明显提高老龄鼠的Ｔ细胞增殖活性（ｐ＜０．０１）;明显提高Ｔ细胞亚群中Ｌ３Ｔ＋４细胞数（ｐ＜０．０１）;显著促进ＩＬ ２及ＩＬ １和ＴＮＦα的分泌（ｐ＜０．０１）．总之,ＰｒｏＴα对免疫功能状态异常的老龄鼠具有免疫修复活性。     

重组人胸腺素α原体外活性观察

以原核表达并纯化人胸腺素α原后,观察其体外活性,了解到胸腺素α原对胸腺细胞氢化考的松损伤有明显的保护作用,表现在它可明显提高氢化考的松损伤后细胞的数目和ＭＴＴ反应能力,氢化考的松引起胸腺细胞凋亡的发生,并显著降低ＣＤ４＋、ＣＤ８＋单阳性细胞和ＣＤ４－ＣＤ８－双阴性细胞的比例,胸腺素α原不能抑制胸腺细胞凋亡的发生,并可能对胸腺细胞凋亡有促进作用,与空白对照组比较,它也可明显降低ＣＤ４＋阳性细胞的比例,结果表明,胸腺素α原对胸腺细胞氢化考的松损伤的保护作用并非通过抑制凋亡而实现。     

胸腺素α原研究进展

胸腺素原（prothymosin alpha ProTα）是一种强酸性的蛋白,进化上高度保守,分布极其广泛。ProTα氨基酸序列的特征除前28个氨基酸与胸腺素α1完全相同外,ProTα有明显的中心酸性区和亲核序列。ProTα具有广泛的生物学活性,在细胞增殖、免疫调控和生殖活性等多方面起重要作用。     

重组胸腺素α1的纯化及活性

将胸腺素α1基因4串体克隆于pThioHisA融合表达载体(pThioHisA-Tα1④),转化大肠杆菌TOP10。在IPTG诱导下,融合蛋白得到了高效表达。SDS-PAGE分析确定诱导表达的融合蛋白占菌体总蛋白的40%,且表达的融合蛋白主要以可溶形式存在。把用离子交换层析纯化出的目的蛋白进行CNBr化学裂解,经简单的离子交换层析可纯化出胸腺素α1单体,HPLC鉴定胸腺素α1的纯度达98%。利用3H-TdR进行生物活性测定,证实融合蛋白和胸腺素α1单体均具有在致有丝分裂原ConA存在的条件下,刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力,与化学合成的胸腺素α1相比具有相似的生物活性。     

胸腺素α原融合蛋白基因表达、纯化与生物学活性

胸腺素α原及胸腺九肽在体内免疫方面有重要作用 .根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,设计并人工合成了胸腺素α原及胸腺九肽融合蛋白的特异引物 .以胸腺素α原cDNA为模板 ,应用PCR及分子克隆技术构建了该融合蛋白的编码基因 ,将其插入pBV2 2 0质粒 ,转化大肠杆菌 ,通过温度诱导使该融合蛋白高效表达 ,并对表达产物进行了高效特异性纯化 .运用MTT法初步测定了该融合蛋白的活性 .结果表明 ,该融合蛋白对氢化可的松诱导的胸腺细胞损伤有一定的保护作用 ,为今后进一步研究和应用该融合蛋白奠定了基础     

胸腺素α原的研究进展

胸腺素α原(ProTα)是一种在哺乳动物细胞中广泛分布、结构保守的酸性小分子蛋白,是胸腺素α1(Tα1)的前体蛋白。目前在细胞内和细胞外均已发现了ProTα。在胞内,ProTα作为一种核蛋白,参与对细胞周期的调节,促进细胞增殖;在胞外,ProTα通过潜在的膜受体调节免疫应答,促进IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的产生,进而增强细胞和体液免疫应答。但该蛋白的分泌机制、受体以及信号通路还有待研究。     

母兔配种后10小时血清中若干生理指标与子代…

测定日本大耳白兔母兔配种后１０小时血清中的１０项生理指标,并与母兔所产每窝仔兔的性比进行对应分析。结果表明：母兔血清中ＦＳＨ、Ｔ、Ｎａ＾＋和Ｍｇ＾２＋的浓度在高、低两个性比组间有显著差异,Ｔ３的差异接近显著水平;并且,ＦＳＨ和Ｔ３与子代性比呈显著负相关,Ｍｇ＾２＋与子代性比呈显著正相关。     

凝结芽胞杆菌对大鼠降血脂作用的实验研究

目的 根据血脂检查法,探讨ＴＱ３３对实验性高脂血症大鼠模型降低血清总胆固醇（ＣＨ）、甘油三脂（ＴＧ）和升高高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）的可能性。方法 利用ＳＤ大鼠,给予高脂饲料３周建立高脂血症模型,分成三个剂量组分别灌服ＴＱ３３混县液４周,与对照组比较ＣＨ和ＴＧ水平。结果 给高血酯症大鼠ＴＱ３３４周后,高、中、低剂量组动物血清中ＣＨ及ＴＧ均显著降低;并均使高血脂症大鼠血清中ＨＤＬ－Ｃ显著升高。结论 大剂量ＴＱ３３对大鼠高血脂症有一定的治疗作用;并有防止大鼠形成动脉粥样硬化的作用。（注：凝结芽胞杆菌的课题研究中菌种编号为ＴＱ３３）     

中国人体内含有的长寿基因

我国科学家在国际上首次发现具有中国人特征的胸腺素原α基因,并被美国国立卫生研究院基因库收入登录正式命名。     

细支气管肺泡细胞增生和细支气管肺泡细胞癌内生长因子和蛋白激酶C的表达

表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子－α（ＴＧＦα）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）与细胞生长、增殖分化调节和细胞癌变有密切关系。作者用免疫组织化学方法检测了细支气管肺泡细胞增生（ＢＡＨ）和细支气管肺泡细胞癌（ＢＡＣ）的ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ表达。结果表明：ＢＡＣ中的ＥＧＦ、ＴＧＦα阳性率和阳性强度以及ＥＧＦＲ、ＰＫＣ阳性强度均明显高于ＢＡＨ。ＢＡＨ的重度不典型增生病例,其ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ均呈高表达。ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ三者在ＢＡＣ和ＢＡＨ中的表达存在明显相关性。提示：ＴＧＦα及其受体ＥＧＦＲ和ＰＫＣ是细支气管肺泡细胞增生、恶性转化和肺泡癌细胞失控生长的重要因素。     

不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素和生长激素分泌活动的影响

以１龄性腺发育中期鲤鱼为材料,采用腹腔（ｉ．ｐ）注射的方法,研究不同的下丘脑肽和神经递质对鲤鱼促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）分泌的影响。结果表明：促甲状腺激素释放激素（ＴＲＨ）、Ｌ－多巴（Ｌ－ＤＯＰＡ）、甲基睾酮（ＭＴ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、促黄体素释放激素类似物（ＬＨＲＨ－Ａ）和三碘甲状腺原氨酸（Ｔ３）都能显著刺激ＧｔＨ的分泌,但最大效应时间各不相同。ＴＲＨ和ＬＨＲＨ－Ａ能促进ＧＨ的分泌,Ｌ－ＤＯＰＡ、ＭＴ、ＧＡＢＡ对血清ＧＨ水平没有明显影响;Ｔ３则对ＧＨ分泌有一定的抑制作用。这说明鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ的分泌除了受各自的下丘脑释放因子和释放抑制因子的双重神经内分泌调控外,还受多种其它相同和不同调节因子的影响,也反映了鲤鱼ＧｔＨ和ＧＨ分泌的神经内分泌调控的复杂性。     

肠道有益菌群增效剂对高脂血症大鼠模型的影响

实验用血脂检查法,探讨对人工高脂血症大鼠模型灌胃肠道有益菌群增效剂９６０１（ 青春双歧杆菌加低聚木糖） 与９６０２ 青春双歧杆菌加葡萄糖酸钙微生态调节剂,１４ｄ 后检测血清总胆固醇（ＣＨ） 和甘油三酯（ＴＧ） 水平。结果表明：９６０１ 与自然恢复组比有显著差异,Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为３３ ％ ,ＴＧ 降低率为４４ ％ ;９６０２ 与自然恢复组别有显著差异,Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为４１ ％ ,ＴＧ 降低率为４８ ％ ;９６０１ 与三株口服液组比Ｐ＜ ０．０１ ,ＣＨ 降低率为３９ ％ ,ＴＧ降低率为４３ ％ 。１４ｄ 后９６０１ 与９６０２ＣＨ 与ＴＧ 水平均已恢复到正常水平,而自然恢复ＣＨ 仍高２５ ％ ,ＴＧ 仍高１７ ％ ,尚未恢复到正常水平。     

大肠杆菌N~α-乙酰基转移酶RimI对人胸腺素α原N末端乙酰化修饰的影响

目的:研究大肠杆菌Nα-乙酰基转移酶RimI对人胸腺素α原(ProTα)N末端乙酰化修饰的影响。方法:在大肠杆菌中共表达ProTα与大肠杆菌Nα-乙酰基转移酶RimI,同时设置只表达ProTα的对照菌,分别提取纯化ProTα,利用HPLC检测其发生乙酰化修饰的程度。结果:ProTα的乙酰化修饰发生在翻译后水平,有无RimI的过表达、诱导时间的长短以及这两个因素之间的交叉效应均对ProTα的乙酰化程度有影响,其F值分别为53.8、89.22及16.28,P值均小于0.0001;无论有无RimI过表达,乙酰化的ProTα所占比例在诱导6 h后逐渐升高(P<0.0001);在过表达Ri-mI的菌株中,乙酰化的ProTα在诱导12 h后占37.4%,而在无RimI过表达的菌株中占64.3%;RimI对ProTα乙酰化的抑制作用从诱导6 h后开始显现(P=0.0007)。结论:在大肠杆菌中,过量的Nα-乙酰基转移酶RimI可抑制人胸腺素α原的乙酰化修饰。     

母兔配种后10小时血清中若干生理指标与子代性比的相关

测定日本大耳白兔母兔配种后１０小时血清中的１０项生理指标,并与母兔所产每窝仔兔的性比（雄性个体所占比率）进行对应分析（窝仔数＜６的数据未参与此项分析）。结果表明：母兔血清中ＦＳＨ、Ｔ（睾酮）、 Ｎａ＋和Ｍ２＋的浓度在高、低两个性比组间有显著差异, Ｔ３（三碘甲状腺原氨酸）的差异接近显著水平（Ｐ＜０．１）;并且,ＦＳＨ和Ｔ３与子代性比里显著负相关（ｒ分别为－０．５０和－０．４６）,Ｍｇ２＋与子代性比里显著正相关（ｒ＝０．３９）;同时,Ｍｇ２＋／Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋×Ｎａ＋、Ｍｇ２＋×Ｋ＋和Ｔ３×ＦＳＨ与子代性比的相关分别为０．４０、０．４３、０．３９和－０．５３（Ｐ＜０．０５）。     

胸腺素α1二聚体蛋白的初步毒理学研究

目的:对胸腺素α1二聚体蛋白开展初步的毒理学研究,为后续系统地进行临床前研究提供依据。方法:将BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组和胸腺素α1二聚体蛋白高、中、低剂量组,观察胸腺素α1二聚体蛋白给药后小鼠的一般行为,进行血液生化学指征及组织病理学检测。结果:动物未见明显的中毒症状和死亡,与对照组相比,高、中、低各剂量胸腺素α1二聚体蛋白注射组的动物行为、活动、体重、进食量等与对照组无显著差异,血液生化指标与主要脏器组织形态学检查也均未见异常。结论:未发现胸腺素α1二聚体对小鼠有明显的毒性作用。     

“首乌降脂汤”对大鼠食物性高脂血症的预防作用研究

本试验就“首乌降脂汤”对大鼠食物性高脂血症的预防作用进行了试验研究。结果能呈现剂量依赖性地抑制高血脂模型大鼠血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ的升高及ＨＤＬ－Ｃ的降低并同时降低血清中脂质过氧化物的水平。     

胸腺素α1的研究进展

胸腺素α1是机体内的一种免疫活性肽,目前已用于乙型、丙型肝炎及恶性肿瘤、免疫缺陷等疾病的研究和临床治疗中。其作用机制尚不十分清楚,一般被认为具有生物反应调节物的功能。现对胸腺素α1的分布、作用机制及临床应用进行综述,并总结胸腺素α1在生物制备上的进展。