溶液环境对百日咳疫苗分离纯化的影响

针对百日咳疫苗在低盐条件下不稳定, 容易聚集而导致层析过程收率低、分离度低的难题, 实验中选择脲作为稳定剂来改善百日咳疫苗所处的溶液环境, 并采用离子交换层析和凝胶过滤层析进行百日咳疫苗的分离纯化, 通过ELISA抗原活性测定和还原性SDS-PAGE等方法研究了脲对百日咳疫苗分离纯化的影响。结果表明, 在流动相中加入 2 mol/L脲作为稳定剂, 能显著提高离子交换层析和凝胶过滤层析中的PT和FHA活性回收率、凝胶过滤层析的分离度、PT和FHA的纯度。这些结果对百日咳疫苗的分离纯化和层析工艺优化提供了重要的依据和参考。     

基因工程变链菌防龋疫苗的研制

本文采用我们自己构建的基因工程龋齿疫苗菌株,大罐发酵培养３批、菌体收量平均湿重为２．６７ｇ／Ｌ,表达率为４４．２７％。菌体经超声裂解,硫酸铵和链霉素粗提,再经吸附层检,凝胶过滤和离子交换柱层析等步骤纯化精提ＧＴＦ抗原３批。提纯的ＧＴＦ抗原,平均比活,提纯倍数和收率,分别为５８．３４ｕ／ｍｇ、６．０８倍和１９．２５％。此抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,分子量为５５ＫＤ,纯度达到９６．７％,并对湿度具有较好的稳定性能。且此抗原制备的疫苗免疫家兔具有较好的免疫原性     

关于腹泻疫苗人体安全性及效果的评价问题

人类腹泻的致病微生物有多种,其中危害最大的有霍乱菌、痢疾菌、大肠菌和轮状病毒等。从预防出发,特别是预防大流行的发生,用疫苗免疫,还不失为最佳选择,可惜尚未有合适的疫苗。当前应用生物技术研制新型疫苗有着良好的前景,并已有明显的进展,但如何评价疫苗的效果仍是困扰我们的问题。因为采用动物     

蛋白质凝胶过滤色谱上样方法的改进

凝胶过滤色谱因其操作方法简单,重复性强等特点在生物大分子的分离纯化中被广泛使用。特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。但由于蛋白质凝胶过滤色谱要求样品上样体积较小及洗脱流速较小时才能获得理想的分辨率,这使得凝胶过滤色谱经常成为蛋白质大规模纯化工艺中的限速步骤。本介绍一种改进的上样方法,在不降低分辨率的前提下,可将单位时间内凝胶过滤柱的产量提高两倍。     

精制原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗制备工艺的研究

通过ａＧ 株病毒在金黄地鼠肾细胞中培养,而制备的一种新型灭活狂犬病精制疫苗已获成功。该纯化方法包括醋酸锌沉淀和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ柱层析,所生产的疫苗质量完全达到新型狂犬病疫苗的要求。该工艺方法简单,成本低廉,是一种理想的狂犬病疫苗生产方法。     

蛇毒纤溶酶Fibrolase的凝胶过滤色谱复性研究

目的：研究蛇毒纤溶酶Fibrolase的最佳复性方法。方法：使用透析和凝胶色谱法对Fibrolase复性进行研究,比较2种复性方法的相对复性率及蛋白质回收率。结果：2种复性方法的复性率分别为20％、25％,蛋白质回收率分别为16％、5％。结论：凝胶过滤色谱复性优于透析法复性,凝胶过滤色谱复性使蛋白质的复性与纯化同步进行,简化了操作程序,提高了产品回收率。     

小牛类表皮生长因子活性肽（c－EGF）的分离纯化及性质

本文报道小牛颌下腺通过酸抽提、ＣＭ５２、ＤＥ５２柱层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤及ＨＰＬＣ等步,分离纯化到一个分子量为６ｋＤ,等电点为４．６的小肽。该小肽类似人重组表皮生长因子（ｒｈ—ＥＧＦ）的生物活性,具有刺激ＮＲＫ细胞的增殖及刺激新生小鼠的睁眼、萌牙,并具有增加Ａ４３１细胞膜蛋白质磷酸化的功能。氨基酸组成缺少苯丙氨酸及苏氨酸残基。我们命名它为小牛类ＥＧＦ样活性肽（ｃａｌｆＥＧＦ－ｌｉｋｅａｃｔｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅ,简称ｃ－ＥＧＦ）。     

白茯苓凝集素的研究

以中药白茶苓为材料,采用盐析、离子交换及凝胶过滤可纯化出快速蛋白液相谱（ＦＰＬＣ）纯的白茯苓凝集素（ＳＬＬ）。当其浓度为０．２５μｍｇ／ｍＬ时就能凝集兔红细胞,对人类Ａ,Ｂ,Ｏ型血细胞无作用。甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和胃蛋白对ＳＬＬ的凝血活性有强抑制作用,而常见糖类对其无明显抑制作用。ＳＬＬ含中性糖１２．５％,凝胶过滤及ＦＰＬＣ测得分子量为３１０００,亚基分子量为８０００,表明ＳＬＬ可能由四个相同亚     

镉诱导蚯蚓金属硫蛋白的分离纯化及其溶液构象的研究

镉诱导蚯蚓匀浆液经热沉淀,乙醇沉淀后,经凝胶过滤ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－２００柱层析,得三个镉结合蛋白峰,分子量依次为４０,１７及９ｋＤ。这三个组份再分别经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ柱层析,分别得三、三、二个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、巯基含量及氨基酸组成等分析,认为凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白（ＭＴ）,其经ＤＥＡＥ柱层析所得三个峰为ＭＴ三个亚型。对蚯蚓ＭＴ三个亚型在不同ＰＨ条件下     

竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

凝胶过滤与镍柱亲和纯化金葡菌a-溶血素重组蛋白的生物学特性比较

以在宿主菌株BL21(DE3)中成功表达的重组金黄色葡萄球菌a-溶血素蛋白为研究对象, 分析比较通过凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography)和镍柱亲和层析纯化试剂盒(Ni-NTA spin columns)纯化所得到的重组蛋白的蛋白含量和生物特性方面的差异。SDS-PAGE分析检测纯化产物, Bradford法测定蛋白含量, 兔红细胞测定半数溶血效价。结果显示这2种方法得到的纯化产物在53 kD处均呈现单一清晰带, 达电泳级纯度。与此同时, 凝胶过滤对目的蛋白的纯化率为14.04%, 蛋白含量为0.337 mg/mL, 溶血活性为1519 HU/mg; 镍柱亲和层析的纯化率为17.5%, 蛋白含量为0.35 mg/mL, 溶血活性为1463 HU/mg。由此可见, 凝胶过滤得到的纯化产物在蛋白含量和蛋白活性方面丝毫不亚于镍柱亲和层析纯化试剂盒。     

疏水层析用于大规模纯化重组HBsAg的工艺研究

应用疏水层析法从CHO细胞培养液中纯化HBsAg,每根制备柱每次可处理细胞收液350L,在适宜的上样流速和层析温度条件下,层析后可去除96％的杂蛋白,再经超速离心和凝胶过滤层析,可获HBsAg纯品。经检定,HPLC纯度高于95％,其余各项检定指标均符合《中国生物制品规程》要求。结果表明,此方法纯化效率高、处理样品量大、成本低,适于大规模生产。     

Antibody response to purified chick embryo cell vaccine in equines for production of equine rabies immune globulin

Rabies is endemic in India. The post exposure treatment of class three bite cases, as recommended by the World Health Organization, must involve the use of rabies immunoglobulin as soon as possible and up to the seventh day of start of anti rabies vaccination. The annual requirement in India as projected by the Ministry of Health, Government of India is about 1500 liters of purified anti rabies serum (ERIG). Central Research Institute (CRI), Kasauli, being the sole producer of ERIG in India, an effort was made to increase the production of ERIG by the use of tissue culture vaccine (Human) for primary immunization of equines. It also involved changing the vaccine from horse brain suspension to tissue culture vaccine by eliminating horse sacrifice for antigen preparation. A better immune response was obtained.     

流行性出血热(EHF)双价纯化灭活疫苗——I 期临床观察

根据卫生部药审(91)特申体第02号文件,本品纯化灭活双价疫苗92年完成了Ⅰ期人体反应及血清学效果观察。91001批双价疫苗以0,1,2月和0,14,35天程序免疫,91002批以0,1,2月程序免疫,各接种15人。接种后未出现任何不良反应,与Ⅰ型,Ⅱ型单价疫苗相同,是安全可靠的。两种免疫程序,二针次免疫后皆能产生较高免疫抗体,接种后半年仍保持一定抗体水平。中和抗体(PRNT)均在1∶10～1∶20,ELISA1∶478～1∶549(GMT),阳转率100％,再次证明本型纯化疫苗安全有效,并具有较高免疫活性,本型疫苗也可采用二针次(0,1月),总量2ml免疫。     

桂枝茯苓胶囊对小鼠尿生殖窦植入性前列腺增生的影响

观察桂枝茯苓胶囊对小鼠前列腺增生病理模型的影响。方法 :用小鼠尿生殖窦植入小鼠前列腺 ,建立前列腺增生病理模型 ,用桂枝茯苓胶囊连续灌胃给药 30天 ,测定前列腺重量和体积并进行病理学检查。结果 :与模型组比较 ,桂枝茯苓胶囊可明显减轻小鼠前列腺重量 ,减小小鼠前列腺体积 (P<0 .0 5 ;P<0 .0 1)。病理结果显示桂枝茯苓胶囊组小鼠前列腺增生轻于模型组。桂枝茯苓胶囊对小鼠前列腺增生具有抑制作用     

邻苯二甲醛(OPA)法检测铝吸附疫苗中抗原含量

目的:建立快速测定铝胶吸附的疫苗中抗原含量的OPA荧光检测法。 方法:利用邻苯二甲醛(OPA)在2-巯基乙醇存在下与氨基酸的N端或L-谷氨酸侧链反应,在460nm处生成荧光衍生物的原理,建立了无需进行抗原蛋白提取的检测方法,并对该方法的特异性、线性、精密度、回收率、重复性进行考察。同时,配合钠十二烷基的硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),研究在配制过程中抗原蛋白与佐剂是否分离。结果: OPA荧光法,在抗原蛋白含量为0.02~0.16mg/ml时,线性良好,准确度达90%~115%,批内和批间相对标准偏差≤15%。电泳结果显示,CpG的加入可能会导致少量抗原蛋白从铝胶中解离。结论:该方法快速、准确、灵敏度较高,重复性好,可以应用于含铝胶疫苗制剂的实验室甚至生产质控过程。     

Generalized frequency coding: a method of preparing polymorphic multistate characters for phylogenetic analysis

A new method of coding polymorphic multiistate characters for phylogenetic analysis is presented. By dividing such characters into subcharacters, their frequency distributions can be represented with discrete states. Differential weighting is used to counter the effect of representing one character with multiple characters. The new method, generalized frequency coding (GFC), is potentially superior to previously used methods in that it incorporates more information and is applicable to both qualitative and quantitative characters. When applied to a previously published data set that includes both types of polymorphic multistate characters, the method performed well, as assessed with g1 and nonparametric bootstrap statistics and giving results congruent with those of other studies. The data set was also used to compare GFC with both gap-weighting and Manhattan distance step matrix coding. On these grounds and for philosophical reasons, we consider GFC to be a better estimator of phylogeny.     

流感病毒裂解疫苗裂解剂去除方法的研究

裂解剂的残余含量是流感病毒裂解疫苗的主要质控指标之一。实验中采用膜超滤法和透析法做了裂解剂去除的比较研究。结果表明,膜超滤法效果优于透析法。其血凝素抗原纯化收率达到90%,裂解剂去除达98%以上;疫苗生产无菌操作和细菌内毒素易于控制,成本低,易于大规模生产。     

肾综合征出血热双价纯化疫苗（Vero细胞）安全性的研究

在肾综合征出血热（HFRS）双价纯化疫苗（Vero细胞）的研制中,对病毒培养用Vero细胞致瘤性和试制疫苗的过敏原性进行了动物实验研究,结果表明,病毒培养用Vero细胞无致瘤性,三批试制疫苗无过敏原性。说明用Vero细胞为培养介质的HFRS双价纯化疫苗是安全的。