狂犬病毒CTN—1株在Vero细胞上的适应传代研究

本文报导了用我国狂犬病毒固定毒人二倍体细胞适应株（ＣＴＮ－１）进行Ｖｅｒｏ细胞适应传代研究。通过连续传代培养,滴度可达８．０１ｏｇＬＤ５０／ｍｌ,达到了ＷＨＯ规定的不需浓缩的标准。病毒用０．０１ＭＯＩ感染细胞其产量与１Ｍｏｌ感染量相仿。病毒增殖高峰在４－５天,维持达１５天无明显下降,且可连续收获４－５次。因此,该毒种符合ＷＨＯ提出的疫苗生产毒种要求,可用于狂犬病疫苗生产。     

口服狂犬病疫苗

口服狂犬病疫苗根据毒种类型分为二类：一类为减毒活疫苗，首先美国用ＥＲＡ株在实验室研究成功，随后各国相继研究ＳＡＤ株的突变株ＳＡＤＢｅｒｎ（或ＳＡＤｓｗｉｓｓ），ＳＡＤＢ＿１９、ＳＡＧ＿１以及ＣＴＮ—１株口服狂犬病疫苗，均获得较好的口服免疫原性，对动物ＳＡＤＢｅｒｎ、ＳＡＤＢ＿１９、ＳＡＤｓｗｉｓｓ、ＣＴＮ—１的毒性相近，而ＳＡＧ＿１的毒性最弱，对多种成年野生动物不致病。以上各株病毒分别被制成口服疫苗在世界许多地区得到试验和应用。另一类为重组基因工程口服疫苗，已将狂犬病毒的糖蛋白基因分别重组到人腺病毒５型，痘苗病毒、浣熊痘病毒、金丝雀痘病毒、多角体病毒中，并证实均有免疫原性，重组痘病毒ＶＶＴＧｇＲＡＢ制备的口服疫苗已在比利时进行大规模的区域性试验，具有有效性、无毒性和热稳定性。口服疫苗的诱饵多采用鸡头、蜡制或膨化食物外壳内包装有疫苗胶囊的复合体。     

表达新城疫病毒F48E8株血凝素—神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建 …

在克隆和鉴定新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）基因的基础上,应用分子克隆技术将ＨＮ基因导入鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１中启动子Ｐ７．５的下游,得到携带ＮＤＶ－ＨＮ基因的质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１。将此质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１以脂质体转染中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４株感染３￣４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化３次,得到稳定的重组鸡痘病毒。用ＮＤＶ－ＨＮ基因特异     

不同型犬腺病毒纤突蛋白基因序列的比较分析

根据已发表的ＣＡＶ纤突基因序列,用ＰＣＲ方法,对４个ＣＡＶ－２毒　株和４个ＣＡＶ－１毒株的纤突基因进行了扩增和测序,测定的核苷酸序列经推导得到分别编　码５４３和５４２个氨基酸的ＣＡＶ纤突蛋白全序列。测定的ＣＡＶ－２比较表明：我国流行的ＣＡＶ－２　ＳＹ　强毒株与国外标准强毒株Ｔｏｒｏｎｔｏ　Ａ２６／６１株相同,其驯化致弱的毒株与驯化前相比在１１３４位　发生碱基颠换。测定的ＣＡＶ－１比较表明：我国流行的ＣＡＶ－１株与标准强毒ＲＩ２６１株差异相对　较大,而国内ＣＡＶ－１毒株互相之间相对差别较小。ＣＡＶ－２与ＣＡＶ－１纤突基因的同源性为８０．４８％。     

生物素标记GFV－cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用

以整合到质粒中的ＧＦＶ－ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ合成了生物素标记的ＧＦＶ单、双链探针。用合成的探针对提纯的ｃＦＶ－ＲＮＡ＿２、感染ＣＦＶ的昆诺藜叶及１８株而萄进行ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交检测表明：检测提纯病毒ＲＮＡ＿２的灵敏度为１．５ｐｇ／斑点,感染ＧＦＶ的昆诺藜提取液最高稀释度可达４０９６０倍;１１株显示典型扇叶症状的样品杂交结果均为阳性,且汁液稀释４００～８００倍仍能测出,７株不显示典型扇叶症状的葡萄中３株受到ＧＦＶ的侵染。单、双链探针最适使用浓度分别为１／２００及１／１００。     

中国脊髓灰质炎病毒疫苗株基因变异的分析

从急性弛缓性麻痹（ＡＦＰ）病例分离的３２株脊髓灰质炎（脊灰）病毒,在ＶＰ１编码区,经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法鉴定,并经核酸测序进一步证实力疫苗株,其中５株为Ｉ型疫苗,１６株Ⅱ型疫苗株,１１株Ⅲ型疫苗株,以同样的分析方法检测这些毒株基因组的３Ｄ聚合酶编码区,发现２株Ｉ型疫苗株在３Ｄ区的４３１个核苷酸序列为野毒序列,即这２株Ｓａｂｉｎ１基因型（ＶＰ１）与野毒基因型（３Ｄ）重组株;其余３株Ｉ型疫苗株未发现基     

广西壮族自治区HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

使用ＰＣＲ技术对１４份广西ＨＩＶ－１阳性感染者外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增,获得ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段,并对其Ｃ２－Ｖ３及邻区３５０－４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,１４份样品中９份为泰国Ｂ（Ｂ′）亚型,５份为Ｅ亚型毒株。其中Ｂ′亚型毒株的基因离散率为４．２％,与Ａ－Ｅ参考亚型及部分Ｂ亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的Ｂ亚型毒株序列十分接近,相互之间基因离散率在３．０％－４．４％的范围内;而Ｅ亚型毒株的基因离散率为２．１％,与国际Ｅ亚型毒株的基因离散率最近,为５．６％,与其它国际参考亚型基因离散率很远,在２１．１％－２７．３％。根据以上数据及其它资料提示,广西存在Ｂ′和Ｅ两种亚型的ＨＩＶ－１的流行,且其Ｂ′亚型毒株的传入,与流行在云南德宏州的相同亚型ＨＩＶ－１毒株密切相关,而Ｅ亚型毒株则可能是由泰国经越南传入广西的     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）CH—1a株糖蛋白基因的遗传变异分析

新近发现的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）是单股ＲＮＡ病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科,为了比较国内分离的ＣＨ－１ａ株与国外毒株的分子遗传学关系,扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ ＣＨ－１ａ株糖蛋白基因ＯＲＦ２￣５,测定了其核苷酸序列。用序列分析软件分析了其编码产物的分子量、等电点、疏水性、抗原性和有关位点,并与国外毒株进行了序列比较和系统发育进化分析。结果表明：ＣＨ－１ａ株与ＶＲ－２３３２株尽管密     

不同狂犬病毒株抗原反应性的比较研究

应用ELISA法对285份免疫前及健康人血清和742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗(aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测。结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均能达到90％以上,且与SNT效价的相关性较好;而aG株抗原对除aG株以外其它毒株狂犬病疫苗免疫后血清的阳性检出率仅为50％左右。因此不同毒株狂犬病毒抗原的反应性存在明显差异,选用纯度高、活性好的CTN株病毒或两株病毒以不同比例混合作为ELISA检测用抗原,测定疫苗免疫后人群的抗体水平,可获得满意的结果。     

传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析

以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株,Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板,用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段,分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ,分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５,ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较,结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间,在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异;在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示,Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ,Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ,在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中,该区就占５ 个,代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 和ＶＰ５区各有     

A new outbreak of fox rabies at the Russian–Mongolian border

<正>Dear Editor,Lake Baikal and its neighboring territories are an intermediate zone for the"steppe"and"arctic-like"rabies virus lineages in Russia.After the elimination of dog-mediated rabies during the early 1980s,this area remained rabies-free for over 25–30 years.A sudden reappearance of rabies occurred in this zone in the Republic of Buryatia in 2011–2012.A marginal part of the Mongolian steppe penetrates the Siberian taiga forests in this area,and human and animal rabies have been repeatedly recorded in the Republic of Buryatia from the end of the     

Investigation and analysis of rabies viral infection and distribution in China in 2005–2012

Dear Editor, We report the results of a preliminary investigation of data collected between 2005 and 2012.A National Human Rabies Surveillance program was initiated in high rabies incidence regions in 2005,and subsequently carried out nationally to monitor rabies situation.Our work presents a summary of epidemiological and etiologic rabies surveillance data collected since the implementation of the program.     

双表达狂犬病毒基因的非复制型痘苗病毒改建及免疫效果

为减少重组病毒非必需外源基因,进一步提高非复制重组痘苗病毒狂犬病疫苗的安全性,本研究改建不含报道基因LacZ的双表达狂犬病毒Ag株G、N的非复制重组痘苗病毒VTKRG△CKRN.采用G418-neo富集、蓝白斑及免疫蚀斑筛选等方法,以表达狂犬病毒糖蛋白(RG)基因的非复制重组痘苗病毒VTKRG△CKlacZ作为亲本株,利用同源重组原理,删除C与K片断间lacZ,并将狂犬病毒核蛋白(RN)基因插入C-K片段间.经核酸及蛋白水平检测表明VTKRG△CKRN能同时稳定有效地表达狂犬病毒G和N,并具有非复制病毒生长特性.重组病毒裸鼠毒力实验表明VTKRG△CKRN较复制型重组痘苗病毒VTKRG病毒毒力显著减弱.VTKRG△CKRN免疫小鼠可诱生较高有效中和抗体,并能保护小鼠免于致死剂量狂犬病毒攻击.以1.6×106PFU较低免疫剂量、仅一次免疫狗可保护狗经致死量中国狂犬病毒街毒株SBD株攻击后存活,诱生具有保护性中和抗体.非复制狂犬-痘苗重组病毒VTKRG△CKRN免疫效果好、更具安全性.     

双表达狂犬病毒基因的非复制型痘苗病毒改建及免疫效果

为减少重组病毒非必需外源基因,进一步提高非复制重组痘苗病毒狂犬病疫苗的安全性,本研究改建不含报道基因LacZ的双表达狂犬病毒aG株G、N的非复制重组痘苗病毒VTKRGΔCKRN。采用G418-neo富集、蓝白斑及免疫蚀斑筛选等方法,以表达狂犬病毒糖蛋白(RG)基因的非复制重组痘苗病毒VTKRG△CKlacZ作为亲本株,利用同源重组原理,删除C与K片断间lacZ,并将狂犬病毒核蛋白(RN)基因插入C-K片段间。经核酸及蛋白水平检测表明VTKRGΔCKRN能同时稳定有效地表达狂犬病毒G和N,并具有非复制病毒生长特性。重组病毒裸鼠毒力实验表明VTKRG△CKRN较复制型重组痘苗病毒VTKRG病毒毒力显著减弱。VTKRGΔCKRN免疫小鼠可诱生较高有效中和抗体,并能保护小鼠免于致死剂量狂犬病毒攻击。以1.6×106PFU较低免疫剂量、仅一次免疫狗可保护狗经致死量中国狂犬病毒街毒株SBD株攻击后存活,诱生具有保护性中和抗体。非复制狂犬-痘苗重组病毒VTKRGΔCKRN免疫效果好、更具安全性。     

Investigation of the evolutionary history of the lyssaviruses

Dear Editor, We report the results of evolutionary history estimation of the lyssaviruses based on an analysis of the Glycoprotein (G) sequences gene using the BEAST software package.The most recent common ancestor (TMRCA) of all the lyssavirus strains was estimated to be approximately 5030 years (95％ HPD 3988-6069 years),and there was a significant spread of the rabies virus throughout the world range in the last 200 years,consistent with significant time points in development and migration of human civilizations.We speculate that increased and expansion of human migration during this time period may have promote the increase in lyssavirus diversity.In addition,evidence of host switching in lyssavirus history from the Chiroptera to the Carnivora orders was also identified.     

狂犬病毒蚀斑方法在病毒研究和疫苗研制中的应用

本文采用狂犬病毒CTN-1和4aC株,经Vero细胞传代适应后,以Vero细胞为培养基质,建立了狂犬病毒蚀斑试验和蚀斑减少试验的方法。目前已将此方法应用于病毒鉴定、病毒克隆、病毒滴定以及抗狂犬血清的检测,并取得了较好的结果。     

精制原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗制备工艺的研究

通过ａＧ 株病毒在金黄地鼠肾细胞中培养,而制备的一种新型灭活狂犬病精制疫苗已获成功。该纯化方法包括醋酸锌沉淀和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ柱层析,所生产的疫苗质量完全达到新型狂犬病疫苗的要求。该工艺方法简单,成本低廉,是一种理想的狂犬病疫苗生产方法。