裸果木再生体系建立与不定芽发生研究

为探究裸果木再生体系建立的影响因素,确定其不定芽发生的起源,该研究以裸果木健壮植株的茎段为外植体,采用6 BA和IBA不同浓度组合,筛选愈伤增殖及不定芽再生的最佳浓度组合,确定生根诱导的关键影响因素,建立再生体系,并对其不定芽分化进程进行解剖结构分析,以确认其起源。结果表明：(1)裸果木茎段的最佳愈伤增殖培养基为MS+1 mg·L^-1 IBA+1 mg·L^-1 6 BA+30 g·L^-1蔗糖+7 g·L^-1琼脂,主体间效应分析表明IBA为关键影响因素;愈伤大小随IBA浓度增加呈现先升高后下降的趋势。(2)最佳不定芽诱导培养基为MS+0.5 mg·L^-1 6 BA+30 g·L^-1蔗糖+7 g·L^-1琼脂,诱导不定芽数量为4.9个/块,生芽率达92.3%。(3)生根诱导中,SH基本培养基和蔗糖浓度为关键因素,最佳生根培养基为SH+0~10 g·L^-1蔗糖+7 g·L^-1琼脂,生根率达91.3%。(4)解剖结构观察发现,不定芽起源于愈伤表层的分生细胞,为外起源。该研究通过器官发生途径建立了裸果木的再生体系,确定了不定芽为外起源,为裸果木这一珍稀濒危的林木种质资源保护及可持续利用奠定了研究基础,并为其未来的发展利用提供了有效途径。     

西兰花再生体系的建立与优化

目的:以西兰花无菌苗为材料,对影响西兰花再生的各种素进行研究,建立并优化西兰花的再生体系.方法:用组织培养法,对西兰花的外植体进行诱导生芽、生根.结果:不同品种的再生率差别较大,珠绿和青秀两个品种的再生率达91%以上,而鼎丰一号仅为80.3%;培养6 d 的下胚轴分化能力最强;当培养基中添加3 mg/L 6-BA 和0.2 mg/L IAA 时,下胚轴的分化率最高,玻璃化程度也降到最低;当培养基中添加0.2 mg/L IBA 或0.2 mg/L NAA时,可成功诱导不定芽生根.结论:建立并优化了西兰花再生体系,为西兰花遗传转化体系的建立奠定了基础.     

简单快捷建立高频黄瓜子叶离体再生体系

以１０种我国市场上常见的黄瓜品种为材料,建立了一个简单高效的黄瓜子叶离体再生系统。从种子萌发到获得再生植株仅需６周。子叶外植体在ＭＳ＝０．５ｍｇ／Ｌ ＢＡ培养基上不经愈伤组织诱导阶段而直接走器官发生途径。４～５天的子叶外 植体的不定芽发生能力最强。供试１０种基因型中,“碧春”和“甜翠绿”的再生率高达１００％。待不定芽长度超过１．０ｍｃ时,直接将不定芽转移到ＭＳ培养基生根成苗,幼苗移栽温室后正常结实     

草莓高频离体再生体系的研究

以6个草莓品种为试材,研究了影响草莓不定芽再生的各种因素,建立离体叶片高效再生系统。结果表明,外植体基因型、激素种类及配比、叶龄等是影响草莓再生的主要因子,其中‘鬼露甘’叶片最佳芽诱导培养基为MS 2.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L IBA,‘嫜姬’叶片愈伤组织的诱导以MS 3 mg/L 6-BA 0.2 mg/L 2,4-D较好,而且1周左右的暗培养可以防止外植体的褐化。芽伸长的最适培养基为MS 0.5 mg/L 6-BA 0.5 mg/L IBA,生根的最适培养基为MS 0.2 mg/L IBA,试管苗移栽后成活率为87%。     

香石竹叶片离体再生体系的建立

以香石竹(Dianthus caryophyllus Linn.)无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行筛选,建立香石竹叶片离体再生体系.结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的6-BA(0.5 mg·L-1)和TDZ(0.001 mg·L-1)配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化;添加一定浓度的PP333(4 mg·L-1)可提高叶片不定芽分化频率和平均芽数.香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS 0.002mg·L-1TDZ 0.5 mg·L-16-BA 0.2 mg·L-1IAA 4 mg·L-1PP333;壮苗培养基为:MS 0.2 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1IAA;生根培养基为:1/2 MS.不定芽诱导频率达到42.61%,平均芽数为4.53个.     

杂交鹅掌楸的不定芽诱导及植株再生

1　植物名称　杂交鹅掌楸 (Ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎｈｙｂｒｉｄ———Ｌ .ｃｈｉｎｅｎｓｅ×Ｌ .ｔｕｌｉｐｉｆｅｒａ)。2　材料类别　春季的萌动芽。3　培养条件　不定芽的诱导培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ1 .0ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＫＴ 0 .5 ＩＢＡ 0 .2 Ｖｃ5 ;(2 )     

杂种白杨离体再生体系的建立

以杂种白杨'717杨'(Populus tremula×Populus alba)和'353杨'(Populus tremula×Populus tremuloides)的叶片为材料,研究不同基因型、激素组合对叶片分化和不定芽生根的影响.结果表明:'717杨'叶片最适分化培养基是MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,'353杨'叶片最适分化培养基是MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.01 mg/L TDZ;最佳生根培养基为1/2 MS+0.2 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA,生根率达100%;叶片培养的最佳位置是自茎尖展叶的1～3片叶;20 mg/L卡那霉素可以抑制'717杨'和'353杨'叶片的诱导分化,40 mg/L卡那霉素可以抑制'717杨'和'353杨'不定芽的生根.     

李砧木Marianna离体叶片再生体系优化研究

以李砧木‘Marianna’试管苗新梢顶端第1片叶为外植体,研究激素组合、基本培养基种类及外植体类型等对不定芽再生的影响。结果表明:1/2 MS基本培养基和WPM培养基再生率显著高于MS和SH培养基;叶片附带叶柄的外植体再生率和再生不定芽数显著高于叶柄和切除叶柄的叶片外植体;最佳再生培养基为1/2MS+2.0mg/L TDZ+0.1 mg/L IBA+0.25%琼脂+3.0%蔗糖,最高再生率和再生不定芽数分别为81.7%和7.46±1.38个;最佳生根培养基为1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA,能获得96.7%生根率、较高的生根数和根长。     

野葛高频植株再生体系相关因子的优化

对野葛高频植株再生体系相关因子进行优化,结果表明,野葛带芽茎段再生体系的最佳消毒方式为70%酒精处理30s后用0.1% HgCl₂处理15min;最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 5.0mg/L;最佳培养条件为:蔗糖浓度30g/L,pH 6.0,液体培养,培养温度25℃,光照培养。     

黑莓品种‘Arapaho’离体叶片不定芽诱导影响因素分析及再生体系建立

以黑莓(Rubus spp.)品种‘Arapaho’无菌苗叶片为外植体,通过正交和单因素实验分别研究了基本培养基类型、6-BA和1BA质量浓度以及暗培养时间、外植体的叶位和接种方式对不定芽诱导的影响,并研究了IBA质量浓度对不定芽生根的影响;在此基础上,初步建立了黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系.正交实验结果表明:基本培养基类型对叶片不定芽诱导率及平均不定芽数的影响最大,而IBA质量浓度对叶片不定芽诱导率及6-BA质量浓度对平均不定芽数的影响较小;适宜‘Arapaho’叶片不定芽诱导的最佳培养基为含有2.0mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基.单因素实验结果表明:暗培养时间、外植体的叶位及接种方式对不定芽诱导率有显著影响;最适宜的暗培养时间为21 d;植株中、上部叶片的再生能力较强,其中第3和第4位叶的不定芽诱导效果最佳;叶面朝上接种更有利于不定芽的诱导.在含0.2 mg·L-1 IBA的MS培养基中,不定芽生根率达100.0％,且根数多、长势良好.黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系为:以无菌苗的第3和第4位叶为外植体,经过适当修剪后叶面朝上接种于含有2.0 mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基上,暗培养21 d后置于光照条件下培养30 d;将不定芽转接到含有0.5 mg·L-16-BA和0.3mg·L-1 NAA的MS培养基上进行继代培养;当不定芽高约2 cm时转接到含有0.2 mg·L-1IBA的MS培养基上进行生根培养,最终获得完整植株.     

不同形态氮素施肥对小黑杨幼苗生长的影响

以小黑杨当年播种苗为材料,研究了不同施氮量（12,24和48 mg·株^-1）和不同形态氮素（有机氮和无机氮）施肥对小黑杨幼苗生长的影响,以探讨小黑杨对氮基酸类有机氮素施肥的生长响应。结果表明：无论施无机氮（硝酸铵）还是有机氮（精氨酸）,小黑杨幼苗的苗高、地径、总生物量都是随施氮量的增加而增加,但是中等施氮量处理的幼苗氮利用效率最高。无机氮（硝酸铵）和有机氮（精氨酸）处理的幼苗在相同施氮水平下生长表现无明显差异,施用有机氮可以与施用无机氮获得相同的促进苗木生长的效果。不同氨基酸及其组合肥料施用对小黑杨幼苗生长的影响显著。单一氨基酸施肥情况下,施用精氨酸促进苗木生长的效果最好,谷氨酸次之,甘氨酸最差;氨基酸组合施肥情况下,有精氨酸的组合施肥苗木生长好,有甘氨酸的组合施肥苗木生长差。不同氨基酸施肥处理对小黑杨幼苗各器官氮含量没有明显影响。     

转TaLEA基因小黑杨无性系生长性状变异研究

以6年生的10个转TaLEA基因和1个非转基因小黑杨无性系为材料,对其生长量、干形、叶片性状、皮孔性状等15个指标进行测定分析。方差分析与遗传参数计算结果表明：11个小黑杨无性系间各性状达极显著差异水平（P＜0.01）,各指标表型变异系数处于1.92%~39.98%,遗传变异系数与表型变异系数接近,重复力处于0.621~0.987,表明基因的转入对无性系各性状的生长有一定的影响,但这种影响主要由遗传因素控制。表型相关分析结果表明转基因小黑杨生长量与干形性状、叶片性状、皮孔性状均呈不同程度的相关性,表明多指标共同作用,控制植株生长发育;利用综合评定法,当入选率为10%,初步选出XL-1和XL-9等2个优良无性系,2个无性系的树高、胸径分别比CK高16.55%和15.38%,比平均值高13.38%和19.46%,遗传增益分别为12.18%和17.42%。本研究为转基因杨树的良种选育提供重要的理论依据。     

小黑杨HD-Zip转录因子家族生物信息学及应答盐胁迫分析

HD-Zip转录因子基因是植物中特有的一类蛋白家族,在植物生长发育和逆境应答胁迫过程中发挥重要作用。HD-Zip转录因子基因是由高度保守的同源异型结构域（HD）和亮氨酸拉链域（LZ）结构域构成的特殊结构模型。杨树HD-Zip转录因子家族共有63个基因,可被分为HD-ZipⅠ、HD-ZipⅡ、HD-ZipⅢ和HD-ZipⅣ四个亚家族。本文利用RNA-Seq分析了盐胁迫条件下HD-Zip基因家族在小黑杨根、茎、叶等不同组织的基因表达差异,从转录组水平揭示其应答胁迫环境的分子机制,结果表明,盐胁迫下在叶中有25个HD-Zip基因下调表达,21个基因上调表达;茎中有42个基因下调表达,11个基因上调表达;根中有26个基因下调表达,24个基因上调表达。另外,本文根据拟南芥HD-Zip转录因子家族基因的已知功能,预测了杨树HD-Zip转录因子同源基因的功能,并利用生物信息学方法分析了杨树HD-Zip转录因子蛋白序列的保守结构域、氨基酸组成和理化性质等,为进一步研究杨树HD-Zip转录因子基因功能提供参考。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

狭叶黄芩组织培养再生体系的建立

以狭叶黄芩的茎段为外植体,研究不同消毒剂处理、不同植物生长激素配比对狭叶黄芩茎段腋芽诱导、愈伤组织诱导、丛生芽分化、增殖、生根及移栽的影响。结果表明：最佳消毒方式为0.1% HgCl₂消毒5 min,污染率最低为8.25%;诱导腋芽最佳培养基为MS+1 mg·L^-1 6-BA+1 mg·L^-1 NAA,诱导率可达73.66%;诱导愈伤最佳培养基为MS+1 mg·L^-1 6-BA+1 mg·L^-1 2-4D,诱导率为91.33%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+1 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA,分化率为44.71%。芽增殖的最佳培养基为MS+1 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA,其芽增殖倍数为5.85;最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg·L^-1 IBA,生根率可达到74.07%;试管苗移栽时蛭石：珍珠岩：园土比例按1：1：3的体积比搭配使用,移栽成活率最高达到79.24%,并且植株生长旺盛。本研究建立狭叶黄芩再生体系,为狭叶黄芩野生资源在妥善的保护基础上开发应用提供一定的理论支持。     

不结球白菜离体培养与植株再生体系研究

以4个不结球白菜品种为试材,对外植体、苗龄、激素的组配、培养基中琼脂和AgNO3浓度等再生因素进行了筛选优化,并探讨了抗坏血酸(AsA)对不结球白菜不定芽分化的影响。结果显示:以4~7d苗龄的带柄子叶为外植体诱导不定芽效果较好;MN培养基中4mg/L6-BA与0.5mg/LNAA的搭配有利于不定芽形成;琼脂的浓度变化对不定芽分化影响较大,以9g/L琼脂为宜;培养基中添加5~7.5mg/L的AgNO3、0.1~0.5mmol/L的AsA可显著提高不定芽的发生频率和质量。通过不定芽继代培养、生根培养和驯化移栽建立了能够获得较高再生频率的不结球白菜离体再生体系。     

花楸腋芽增殖途径快繁技术研究

选用花楸茎节为外植体进行组培腋芽增殖途径研究,结果表明：利于花楸生长的最适宜基本培养基为MS培养基;芽诱导培养基为1/2MS+6-BA 2.5 mg·L^-1+2.4-D 0.5 mg·L^-1;增殖培养基为MS+6-BA（1.600~2.100）mg·L^-1+NAA（0.140~0.230） mg·L^-1,平均繁殖系数达到13倍以上;继代壮苗培养的最佳培养基为MS+6-BA 0.2 mg·L^-1+IBA 0.2 mg·L^-1;在1/2MS+IBA 0.3 mg·L^-1培养基上,平均生根数为5.96,生根率达90.20%。将生根后的组培苗移栽至腐殖土：泥炭土：河沙（比例为3：2：1）的基质中,成活率达95.55%。     

金黄花滇百合植株再生与离体快繁技术体系的建立

以金黄花滇百合(Lilium bakerianum var. aureum)的鳞片为外植体, 探讨不同部位外植体和不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导和植株再生的影响。研究结果表明, 鳞片诱导愈伤组织和不定芽的最适培养基为MS+1.0 mg∙L ^-16-BA+0.1 mg∙L ^-1NAA+30 g∙L ^-1蔗糖; 不定芽增殖的最适培养基为MS+0.5 mg∙L ^-16-BA+0.1 mg∙L ^-1NAA+30 g∙L ^-1蔗糖; 不定芽诱导小鳞茎的最适培养基为MS+1.0 mg∙L ^-1NAA+30 g∙L ^-1蔗糖; 小鳞茎膨大生根的最适培养基为1/2MS+0.01 mg∙L ^-1NAA+60 g∙L ^-1蔗糖。该研究为金黄花滇百合种质资源保护和快速繁殖提供了技术支撑。     

铁棍山药组织培养快繁及试管珠芽离体再生体系研究

以河南温县铁棍山药带腋芽的茎段为外植体进行铁棍山药种苗快繁及珠芽离体再生体系的研究。结果表明:（1）75%乙醇浸泡30 s和5% NaClO消毒15 min配合使用灭菌效果最好;腋芽诱导最适培养基为MS+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA,培养20 d后诱导的多芽体倍数最高,为2.22,高度最高为3.3 cm;继代增殖最适培养基为MS+1.5 mg·L^-1 6-BA,增殖倍数可达4.1;生根培养最适培养基为1/2MS+0.2 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1 NAA+0.02%活性炭,平均生根天数为12 d,生根率达100%,根系最长为1.04 cm。（2）用单芽带外植体的接种方式,其珠芽诱导率及诱导的珠芽数显著高于只接单芽的接种方式,珠芽诱导率达88.9%,平均珠芽数为1.50,大小为0.38 cm×0.54 cm;蔗糖浓度为1%～3%有利于珠芽诱导,珠芽整齐度好,形状规则,试管苗叶色浓绿;离体珠芽芽诱导的最适培养基为MS+1.5 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA,珠芽在18～22 d发芽,30 d后诱导率最高为83.3%。该实验结果为铁棍山药试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。     

毛报春(Primula × pubescens)腋芽再生组织培养体系的建立

以毛报春(Primula × pubescens)无菌腋芽为外植体, 分析不同浓度激素配比对愈伤组织诱导和分化以及不定芽增殖和生根的影响, 筛选出不同阶段的最适培养基, 优化毛报春的组织培养再生体系。结果表明, 毛报春腋芽愈伤组织诱导及分化的最适培养基为MS+0.2 mg∙L^-1 NAA+1.0 mg∙L^-1 6-BA, 诱导率达84%, 出芽率达67%; 不定芽增殖最适培养基为MS+0.5 mg∙L^-1 NAA+0.2 mg∙L^-1 6-BA, 增殖率可达67%, 苗绿且健壮; MS+0.2 mg∙L^-1 NAA培养基最有利于组培苗的生根及伸长, 平均单株生根数为9条, 生根率高达70%。该研究建立了毛报春的组织培养再生体系, 可为报春属其它植物的遗传研究及种质创新提供参考。