甘草毛状根培养系统的建立及化学成分分析

利用发根农杆菌转化甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.)外植体获得毛状根,经PCR法检测,表明已转化成功。应用均匀设计法与比较法,建立了适合甘草毛状根的培养系统。化学成分分析结果表明,甘草毛状根含半胱亚磺酸,不含胱氨酸,商品甘草却含胱氨酸而不含半胱亚磺酸;甘草毛状根能合成多种黄酮成分,其中甘草查尔酮A的含量高达干生的0.18％。     

光果甘草毛状根培养过程中对活性氧清除能力和总黄酮含量的变化

采用化学发光法, 分析了光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)毛状根培养过程中对3种活性氧(ROS: O-2(÷)、HO·和H-2O-2)清除能力的动态变化, 并测定了培养过程中总黄酮含量的动态变化. 实验结果表明, 毛状根在对数生长期(20～28 d)对3种ROS都有很强的清除能力,在生长停滞期(29～40 d)对HO·和H-2O-2的清除能力仍维持较高的水平,而对O-2(÷)的清除能力随培养时间的延长逐渐下降.总黄酮含量在对数生长期呈现增加的趋势,至31 d时达到最高含量(0.78%),随培养时间的延长含量逐渐降低.     

地不容毛状根的培养

以Ｒ１０００,１５８３４,１８５５,８１９６等４种发根农杆菌菌株,在不同条件下,感染地不溶,结果在光照条件下,Ｒ１０００诱导植物幼嫩组织产生毛状根。毛状根在ＭＳ液体培养基中生长４２ｄ后,趋于稳定;异喹吉林生物碱含量在第２８ｄ时达到峰值１１０４μｇ／ｇＦＷ。６种培养基中,毛状根生长及异喹啉生物碱含量的差异很大,在在Ｂ５２基中毛状根生长最快,Ｎｉｔｓｃｈ培养基中毛状根异喹啉生物碱含量最讥。Ｂ５培养基中     

黄芪毛状根的大量培养

毛状根（hairyroots）是发根农杆菌（他如加加洲南栩前议）感染双子叶植物后,其R质粒上的TDNA片断整合进植物细胞核基因组中诱导产生的一种特殊表现型,近10年来已发展成一种新的培养系统［‘j。与植物细胞培养相比,毛状根培养具有生长速度快、激素自养、分化程度较高以及遗传性状相对稳定等优点,因此通过毛状根大规模培养,从中提取有价值的植物次生代谢产物具有应用前景。由于近三分之一传统药材的药用部位是根,所以这一培养系统在传统药材生产中具有更重要的意义。自1997年Ache＿。nn［fi首先成功地用发根农杆菌转化高等植物以来…     

重金属镉及其与锌组合对黄瓜毛状根生长及其抗氧化酶活性的影响

为了探讨利用黄瓜毛状根来修复重金属镉(Cd)污染的可能性, 研究了重金属Cd单独及其与锌(Zn)组合对黄瓜毛状根生长及其抗氧化酶SOD、POD活性变化的影响。结果表明, Cd≤10 mg/L仅在培养5~15 d间促进黄瓜毛状根生长, 使根增粗; 而Cd≥15 mg/L则抑制黄瓜毛状根生长, 浓度愈高抑制作用愈明显, 侧根变得短而细小。在供试的不同浓度Cd培养的黄瓜毛状根中, 除10 mg/L Cd外, 其余Cd浓度培养的黄瓜毛状根可溶性蛋白含量随着培养时间的延长而逐渐下降; 但其POD和SOD活性则随着培养时间的延长而逐渐升高。与对照(仅添加25 mg/L Zn)相比, 仅1 mg/L Cd+ 25 mg/L Zn组合在培养7~15 d期间促进黄瓜毛状根生长; 其余浓度Cd和25 mg/L Zn组合都抑制黄瓜毛状根的生长, 且Cd浓度愈高抑制作用越强, 侧根数目更少且短小, 侧根根尖变得肿胀; 同时, 除培养5 d外, 25 mg/L Zn和不同浓度Cd组合培养的黄瓜毛状根的生物量、POD和SOD活性均比单独添加对应浓度Cd培养的毛状根降低, 但其可溶性蛋白含量则较之明显提高。结果表明: 黄瓜毛状根具有较强的重金属Cd耐受能力, 高浓度Cd则抑制其生长; 而镉和锌组合会随着培养时间的延长而加重Cd对黄瓜毛状根生长的抑制作用。     

影响虎杖毛状根高频诱导的因素探讨

利用发根农杆菌ATCC15834对虎杖（Reynoutria japonica Houtt．）进行遗传转化,探讨影响其毛状根高频诱导的因素。结果表明：成熟叶片是转化效率较高的外植体,感染10d左右可形成毛状根,平均诱导率为55．66％,诱根密度为4．30。经PCR检测．证实农杆菌Ri质粒中的rolB及tms基因全部转入毛状根中。改良YEB培养液活化菌种后对出根作用小显著;叶片未经预培养而直接进行感染,其出根效果要明显好于经过MS。或利用TDZ预培养处理（P〈0．01）．毛状根平均诱导牢可达到81．84％,诱根密度为7．04;稀释菌液浸泡、超声振荡或微波辐射处理均可促使叶片提前出根．其中以超声处理30s效果最显著（P〈0．01）;感染叶片上表皮向上放置进行共培养有利于毛状根形成。在优化各种转化条件后,虎杖毛状根平均诱导率可提高到97．1％,诱根密度达到11．3。     

野葛毛状根离体培养与异黄酮生产

用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）R1601菌株感染野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）叶片外植体后获得的毛状根,经连续4次继代培养,鲜重增加到最初的6.2倍。PH为5.5的1/2SH液体培养基较适合野葛毛状根的生长。与自然根相比,毛状根在无激素的1/2SH液体培养基中离体培养20d后,鲜重增加22.6倍,释放入培养液中的异黄酮量增加10.6倍。毛状根生产异黄酮的量略高于自然根,且根中含量明显高于愈伤组织及茎中异黄酮的含量。培养液体积影响毛状根的离体生长及异黄酮的释放。     

何首乌毛状根的诱导和培养(简报)

发根农杆菌（Agrobacteriumrhizogenes）侵染后,通过其Ri质粒的T－DNA片段在植物细胞基因组中整合,诱导形成毛状根（hairyroot）l’l。利用生长迅速、生产效能高而稳定的毛状根培养物生产药用植物的次生物质,已有不少报道「一习。但未见发根农杆菌对何首乌遗传转化的报道。何首乌（Polygonu。。ltij7orumThunb．）为常用中药,其块根为乌须发、悦颜色、益精养血和抗衰老的要药。本文报道发根农杆菌对何首乌遗传转化的实验结果,为今后用毛状根培养物生产何首乌的次生物质打下基础。l材料和方法细菌菌株及培养发根农杆菌（Agrobacteri…     

人参毛状根培养过程中对活性氧清除能力的动态变化

采用化学发光法 ,考察了人参 (PanaxginsengC .A .Mey)毛状根培养过程中对 3种重要活性氧ROS(O2÷、OH·、H2 O2 )清除能力的动态变化 ,发现在毛状根生长对数期时对 3种ROS都有很强的清除能力 ,而在生长停滞期较低 ,符合人参毛状根生长的S型曲线 ,印证了人参毛状根的生长和衰老过程。     

毛状根培养与植物次生代谢物的生产

综述了发根土壤杆菌诱导植物产生毛状根的方法及毛状根的特点,重点介绍了国内利用毛状根培养技术生产植物次生代谢物的最新研究进展。     

Embryological Studies in Glycyrrhiza uralensis Fisch.

This paper reports the studies of overall embryology of Glycyrrhiza uralensis Fisch. Development of the anther wall follows the dicotyledonous type. The cytokinesis of the microspore mother cell in meiosis is of simultaneous type. The arrangement of microspores in tetrad is tetrahedral, isobilateral and decussate. Microspores have various types of abortive to development. Mature pollen grain is of the 2-celled type. The ovule is bitegminous, crassinucellate and campylotropous. The megaspore mother cell gives rise to unequal dyad and then linear tetrad. The chalazal megaspore, the second or the third megaspore towards the micropylar end are functional megaspore. The development of the embryo sac conforms to the Polygonum type. Mature embryo sac has various types of variation. The fertilization belongs to the premitotic type of syngamy. The development of most embryoes belongs to the Onagrad type. The development of the endosperm belongs to the nuclear type and the endosperm near the chalazal end develops into haustorium.     

甘草资源的开发与利用

介绍了甘草的主要生物学特征 ,药用价值、食用价值、日化用价值 ,并对甘草资源的开发利用提出了一些建议     

新疆甘草化学成分研究

从新疆甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)根中分离得到5个化合物,分别鉴定为:槲皮素(1)、甘草次酸(2)、阿魏酸(3)、5,7,3′,4′-四羟基-7-葡萄糖基二氢黄酮醇(4)、8,5′-二羟基3′α-鼠李糖黄酮(5)。其中化合物4,5为首次从该植物中分离得到。     

不同种源地乌拉尔甘草发芽期抗旱性鉴定

在PEG6000模拟干旱胁迫条件下,研究不同种源地的6份乌拉尔甘草种子发芽期与抗旱性相关的形态和生理指标的差异,并通过隶属函数法、系统聚类分析结合反复干旱胁迫对不同来源的材料进行抗旱性的综合评价。结果表明来源于内蒙古中部地区的1号、2号甘草的抗旱性较强,其次为内蒙古东部赤峰的4号甘草以及来自新疆地区的5号和6号甘草,赤峰来源的3号材料的抗旱性最弱。从隶属函数以及聚类分析的结果来看,对于甘草种子发芽期抗旱性鉴定宜选用20%的PEG6000。     

乌拉尔甘草根与根状茎发育解剖学研究

应用常规石蜡切片方法,对乌拉尔甘草根和根状茎的结构及其发育进程进行研究.结果显示:(1)乌拉尔甘草根的发育包括原分生组织、初生分生组织、初生生长和次生生长4个发育阶段.原分生组织由3层原始细胞组成,具有典型分生组织细胞的特征;初生分生组织由根冠原、表皮原、皮层原和中柱原组成;初生结构包括表皮、皮层和中柱,初生木质部为4原型,偶见3原型,内皮层细胞具凯氏带;次生生长依靠维管形成层和木栓形成层活动完成,维管形成层源于初生木质部和初生韧皮部之间的薄壁细胞,而木栓形成层由中柱鞘细胞脱分化产生;次生结构由次生维管组织和周皮共同组成,根中央不具髓.(2)根状茎发育过程与地上茎类似,包括原分生组织、初生分生组织、初生生长和次生生长4个发育阶段.原生分生组织由原套和原体组成,其衍生细胞分化成由原表皮、基本分生组织和原形成层组成的初生分生组织;初生结构包括表皮、皮层、外韧维管束、髓和髓射线,维管束呈环形排列;位于维管束中的原形成层细胞恢复活动产生次生木质部和次生韧皮部,束间形成层产生射线细胞;靠近维管束内侧的皮层薄壁组织细胞脱分化产生木栓形成层,以后形成周皮.周皮、次生维管束、射线和髓共同构成根状茎的次生结构.     

外源甘草酸对NaCl胁迫条件下甘草幼苗生长、根部甘草酸含量以及几种与盐胁迫相关生理指标的影响

50和100mmol·L-1NaCl有利于甘草幼苗根部甘草酸积累。在200mmol·L-1NaCl胁迫下喷施甘草酸(5mmol·L-1),可以明显促进根的生长,提高叶片中叶绿素含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,降低叶片电导率、可溶性糖和脯氨酸含量,增加根部甘草酸含量。     

甘草野生种群果实与种子形态特征的地理变异研究

目的：研究甘草荚果和种子形态特征地理变异规律并分析其形成的生态学机制。方法：采用样方调查的方法测定全国4省区8个旗县甘草野生种群的地上植株形态特征,采用双重筛选逐步回归分析方法探讨甘草荚果和种子形态特征的地理变异规律及其形成的生态学机制。结果：（1）不同甘草种群的荚果数、荚果腺毛长度、种室数目、每荚种子粒数和结实率5项指标的差异达到了极显著水平（P〈0．01）;荚果长度、荚果厚度、荚果腺毛密度和种子长度4项指标的差异达到了显著水平（P〈0．05）。（2）荚果厚度、种室数目等5项形态特征与经度呈显著相关,只有荚果腺毛长度1项指标与纬度显著相关。结论：甘草野生种群荚果与种子形态特征存在显著的地理变异,其变异趋势以经向变异为主,光照因子差异是导致地理变异的主要原因,其次为温度因子和水分因子,其相关关系可用多元回归模型解释。     

甘草细胞放大培养中搅拌式反应器操作策略优化

为获得甘草细胞在反应器中放大培养的最佳条件,在建立稳定的甘草细胞搅拌式生物反应器放大培养体系的基础上,分别以单因素和正交实验获得的数据为样本,以细胞净增长生物量为考察指标,运用BP神经网络耦合遗传算法对反应器操作策略进行优化。结果表明,接种量6.4%、摇床转速89r/min、通气速率0.1vvm是甘草细胞进行反应器培养的最优条件;与传统的正交实验方法相比,这种基于神经网络耦合遗传算法的优化方法使反应器中细胞生物量的积累提高了6.9%。     

宁夏乌拉尔甘草营养器官中甘草酸含量的动态变化研究

利用高效液相色谱（HPLC）法对宁夏中部干旱带半野生乌拉尔甘草营养器官中甘草酸含量的动态变化规律进行了研究.结果表明：地下营养器官（根和根状茎）是甘草酸主要积累部位,而地上茎和叶中甘草酸含量很低甚至检测不到.就地下器官而言,甘草酸的积累随生长年限增加而递增,且1～4 a生甘草均表现出主根中甘草酸的含量高于根状茎的规律.分别对3 a、4 a生的半野生甘草根和根状茎进一步研究发现,在一个生长季节中甘草酸含量的变化呈现相似的变化规律.即从7～10月份,甘草根和根状茎中甘草酸含量呈波动性上升趋势,10月份达到最大值.