汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究

根据HFRSV汉滩型（HTN）代表株76－118和汉城型（SEO）代表株R22基因资料,设计了两组引物,用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段,并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高,但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原,其工作浓度均达1：100000用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）,检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株,2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本,并与cELISA法比较,二者阳性检出率分别为100％和84．6％,符合率为84．6％,但前者比后者敏感性高15．4％。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切,建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（RT-PCR－RFLP）分型法。被定为HTN型的9株,SEO型的8株,余3株未能定型。此20个毒株曾用血清学方法分型,仅11株分型成功．与RT-PCR－RFLP法结果符合。分型成功率RT-PCR－RFLP法比血清法高30％。     

汉滩病毒西安分离株84FLi的L片段核苷酸序列测定以及分析

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),分节段扩增汉滩病毒 84FLi株的L基因片段cDNA,纯化的PCR产物片段直接用于序列测定或克隆入pND18-T载体中 进行测序.结果表明,84FLi株的L片段cDNA由6533个核苷酸组成,四种核苷酸的比例分别为A33.39%,C16.43%,G20. 74%,T29.44%.GC含量为37.17%,AT含量为62.83%.推导出的最大开放读码框架为从38到649 3 ,共编码2151个氨基酸.序列同源性分析表明,84FLi株核苷酸与HTN型国际标准毒株76-11 8的同源性为83.7%,差异性为18.8%;而与中国株A9的同源性高达97.6%,差异性仅为2.4%. 与SEO型代表Seoul80-39的同源性为75.2%,66.1%～66.5%.L片段的氨基酸比较分析表明, L 片段与HTN型间的同源性为97.5%～98.0%,而与SEO型的同源性为83.5%～85.5%.与PUC、TUL 、SN和AND等其它型汉滩病毒的同源性仅为68.6%～69.6%.结果表明84FLi株属于HTN型,并与分离自国内的HTN型病毒高度同源.     

汉滩病毒西安分离株84FLi的L片段核苷酸序列测定以及分析

采用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,分节段扩增汉滩病毒 84FLi株的L基因片段cDNA ,纯化的PCR产物片段直接用于序列测定或克隆入 pND18 T载体中进行测序。结果表明 ,84FLi株的L片段cDNA由 6 5 33个核苷酸组成 ,四种核苷酸的比例分别为A33.39% ,C16 .4 3% ,G2 0 .74 % ,T2 9.4 4 %。GC含量为 37.17% ,AT含量为6 2 .83%。推导出的最大开放读码框架为从 38到 6 4 93,共编码 2 15 1个氨基酸。序列同源性分析表明 ,84FLi株核苷酸与HTN型国际标准毒株 76 118的同源性为 83.7% ,差异性为 18.8% ;而与中国株A9的同源性高达 97.6 % ,差异性仅为 2 .4 %。与SEO型代表Seoul80 39的同源性为 75 .2 % ,6 6 .1%～ 6 6 .5 %。L片段的氨基酸比较分析表明 ,L片段与HTN型间的同源性为 97.5 %～ 98.0 % ,而与SEO型的同源性为 83.5 %～ 85 .5 %。与PUC、TUL、SN和AND等其它型汉滩病毒的同源性仅为 6 8.6 %～ 6 9.6 %。结果表明 84FLi株属于HTN型 ,并与分离自国内的HTN型病毒高度同源     

汉坦病毒中国疫苗株Z37M片段的克隆及序列分析

汉坦病毒Z37株是从褐家鼠体内分离到的,用于生产双价肾综合征出血热疫苗的病毒毒株之一,血清分型为SEO型。利用RT-PCR方法扩增Z37株M基因片段cDNA,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。Z37株M基因片段由3651个核苷酸组成,只有一个开放读码框架,共编码1133个氨基酸。与HTN型病毒(76-118、A9、HV-114)的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.8%～72.1%、76.2%～76.7%,与SEO型(R22、L99、80-39)的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.3%～96.1%、95.3%～98.9%。这一结果的获得进一步从分子水平确定了Z37株的型别,并为研制M基因片段重组疫苗打下基础。     

肾综合征出血热疫苗候选毒株A16株的分子特性

为研究肾综合征出血热疫苗候选毒株A16株的分子基础,应用RT-PCR方法扩增并测定了A16株的M和S片段的序列,结果A16株M片段的全基因序列共3 615个核苷酸,编码1 133个氨基酸.S片段的全基因序列共1770个核苷酸,编码429个氨基酸.A16株M片段核苷酸全基因序列及其推导的氨基酸与HTN型毒株同源率为75.5%～90.3%和85.9%～97.1%,即A16与HTN同型毒株间的差异高达9.7%～24.3%和2.9%～14.1%,而与SEO型的同源率比较,核苷酸和氨基酸分别仅为70.2%～70.8%和73.4%～76.7%.S片段的序列同源率与M片段的结果相类似,即核苷酸和氨基酸的同源率与HTN型毒株分别为76.0%～90%和92.1%～97.7%,与SEO型为67.0%～67.7%和81.7%～82.6%.结果显示,A16株虽然属于HTN型,但该毒株为HTN型病毒的新亚型病毒株.     

肾综合征出血热疫苗候选毒株A16株的分子特性

为研究肾综合征出血热疫苗候选毒株A16株的分子基础,应用RT－PCR方法扩增并测定了A16株的M和S片段的序列,结果A16株M片段的全基因序列共3615个核苷酸,编码1133个氨基酸。S片段的全基因序列共1770个核苷酸,编码429个氨基酸。A16株M片段核苷酸全基因序列及其的氨基酸与HTN型毒株同源率为75.5%-90.3%和85.9%-97.1%,即A16与HTN同型毒株间的差异高达9.7%-24.3%和2.9%-14.1%,而与SEO型的同源率比较,核苷酸和氨基酸分别仅为70.2%-70.8%和73.4%-76.7%.S片段的序列同源率与M片段的结果相类似,即核苷酸和氨基酸的同源率与HTN型毒株分别为76.0%－905和92.1%-97.7%,与SEO型为67.0%-67.7%和81.7%-82.6%。结果显示,A16株虽然属于HTN型,但该毒株为HTN型病毒的新亚型病毒株。     

肾综合征出血热病毒基因的检测、分型和衣壳蛋白基因的克隆及表达

根据我国流行的2型肾综合征出血热病毒(HFRSV)代表毒株汉滩型(HTNV)76-118株和汉城型(SEOV)R_(22)株M节段的核苷酸序列,设计2型共同引物,建立了逆转录-聚合酶链反     

逆转录-聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析对我国肾综合征出血热病毒分型的研究(英文)

建立准确、快速、灵敏的汉坦病毒基因分型方法,可弥补传统血清学方法的不足,对防治该病毒所致的肾综合征出血热(HFRS)具有重要意义。本试验采用逆转录－聚合酶反应(RT-PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)和限制性片段长度多态性(RFLP)方法,对流行于我国的两型汉坦病毒代表株??汉滩型(HTNV)76－118和汉城型(SEOV)R22株进行基因分析。根据病毒DNA序列的电脑软件分析,不同HFRSV囊膜糖蛋白编码基因M节段1199~1497间核苷酸序列上RsaI、TaqI和HindIII的酶切位点存在差异(Fig.1), 可用于进行限制性内切酶基因多态性分析,以确定HFRV的型别。首先,以一对引物扩增该片段(Fig.2)。然后,分别用这三种内切酶(Fig.3,4,5)进行酶切分型。共分析了从我国不同地区,不同宿主分离的毒株18株,及国际标准毒株2株,酶切图谱显示,这些毒株可以被分为三组(Table.1)：9株可定为HTNV型,8株可定为SEOV型,3株无法确定其型别(X型)。该法分型结果与血清学经典的空斑减数中和试验分型结果基本一致,说明该酶切分型方法具有一定的可行性。     

汉坦病毒中国疫苗株Z37M片段的克隆及序列分析

汉坦病毒Z37株是从褐家鼠体内分离到的,用于生产双价肾综合征出血热疫苗的病毒毒株之一,血清分型为SEO型,利用RT－PCR方法扩增Z37株M基因片段cDNA,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。Z37株M基因片段由3651个核苷酸组成,只有一个开放读码框架,共编码1133个氨基酸。与HTN型病毒（76－118、A9、HV－114）的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.8%-72.1%、76.2%-76.7% ,与SEO型（R22、L99、80－39）的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.3%-96.1%、95.3%-98.9%。这一结果的获得进一步从分子水平确定了Z37株的型别,并为研制M基因片段重组疫苗打下基础。     

逆转录—聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析对我国肾综合征出血热病毒分型的研究

建立准确、快速、灵敏的汉坦病毒基因分型方法,可弥补传统血清学方法的不足,对防治该病毒所致的肾综合征出血热（HFRS）具有重要意义。本试验采用逆转录－聚合酶反应（RT－PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法,对流行于我国的两型汉坦病毒代表株－汉滩型（HTNV）76－118 和汉城型（SEOV）R22株进行基因分析。根据病毒DNA序列的电脑软件分析。不同HFRSV囊膜糖蛋白编码基因M节段1199－1497间核苷酸序列上RsaI,TaqI和HindⅢ的酶切位点存在差异（Fig.I),可用于进行限制性内切酶基因多态性分析,以确定HFRV的型别。首先,以一对引物扩增该片段（Fig.2)。然后,分析用这三种内切酶（Fig.3,4,5)进行酶切分型,共分析了从我国不同地区,不同宿主分离的毒株18株,及国际标准毒株2株,酶切图谱显示,这些毒株可以被分为三组（Table.a)：9株可定为HTNV型,8株可定为SEOV型,3株无法确定其型别（X型）,该法分型结构与血清学经典的空斑减数中和试验分型结构基本一致,说明该酶切分型方法具有一定的可行性。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism