安徽羽叶报春愈伤组织的诱导和培养

为了寻找大批量快速繁殖安徽羽叶报春(Primula merrilliana)的有效办法,笔者以其叶片、叶轴为外植体,用不同浓度生长调节物质进行愈伤组织诱导实验.结果表明:(1)愈伤组织诱导的最适培养基为:MS 2.0mg/L 6 BA 0.5mg/L～1.0mg/L 2,4-D,叶片、叶柄出愈率均达100%.(2)MS培养基加0.1mg/L 2,4～D和1.0mg/L～1.5mg/L TDZ对叶柄的诱导效果较佳,其诱导率达81%,而且在这种生长调节物质浓度下的愈伤组织可直接分化出不定芽.     

KT和NAA对知母愈伤组织再分化的影响

以知母愈伤组织为材料,采用单因子试验方法,探讨不同浓度KT和NAA对其再分化的影响。结果表明:知母愈伤组织生根的最佳培养基为MS+KT 2 mg/L;愈伤组织再生芽的最佳培养基为MS+KT 2 mg/L+NAA 1 mg/L;愈伤组织再生苗长高的最佳培养基为MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+KT 2 mg/L+NAA 1 mg/L。     

两个薄荷品种叶片愈伤组织的诱导及增殖

采用正交实验设计,研究了诱导培养基中6-BA、NAA和VC浓度及基本培养基类型4个因素对薄荷(Mentha haplocalyx Briq. )品种'687'和'沪39'叶片愈伤组织诱导的影响, 并研究了增殖培养基中6-BA、 NAA、 IBA和 2,4-D浓度对愈伤组织增殖的影响,筛选出适宜于品种'687'和'沪39'叶片愈伤组织诱导和增殖的最适培养基.结果表明,培养基中6-BA、NAA和VC浓度及基本培养基类型对品种'687'和'沪39'叶片愈伤组织的诱导率和褐化率均有一定的影响,但不同品种适宜的培养基配比有一定的差异;NAA浓度对品种'687'愈伤组织诱导的影响作用显著,影响品种'沪39'愈伤组织诱导的主要因素是VC浓度和基本培养基类型.适宜于品种'687'叶片愈伤组织诱导的培养基为含0.5 mg·L-1 6-BA和1.5 mg·L-1 NAA的B5培养基,适宜于品种'沪39' 愈伤组织诱导的培养基为含 1.5 mg·L-1 6-BA、 1.5 mg·L-1 NAA 和 100 mg·L-1 VC 的 1/2MS 培养基, 均含 5.5 g·L-1 琼脂和 30 g·L-1蔗糖(pH 5.5～pH 5.8).2个品种叶片愈伤组织增殖所需的生长调节剂浓度及比例也有一定的差异,较高浓度的细胞分裂素有利于愈伤组织的增殖,品种'687' 和'沪39'叶片愈伤组织增殖的适宜培养基分别为B5培养基和1/2MS培养基,均含2.0 mg·L-1 6-BA和1.5 mg·L-1 NAA以及5.5 g·L-1琼脂和30 g·L-1蔗糖(pH 5.5～pH 5.8).     

三尖杉外植体来源与培养基成分对愈伤组织生长的影响

为了建立和优化获得有效生物碱成分的三尖杉愈伤组织的培养技术和方法,以大连地区移栽自庐山植物园的三尖杉(Cephalotaxus)植株为原料,就外植体种类、基本培养基种类、激素种类和浓度等因素对愈伤组织诱导、生长的影响进行了系统的研究和归纳。实验发现,幼茎外植体因其出愈率早、诱导率高而最佳;培养基MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导率达91%,继代培养基中一定浓度的NAA(1.0～3.0mg/L)有利于愈伤组织的产生,但是高浓度的NAA(8.0mg/L)则对愈伤组织的生长有抑制作用,其在MS基础培养基上较在B5和1/2MS培养基上褐化轻,生物量增长快,冬季诱导的愈伤组织,其诱导率普遍高于夏季所诱导的愈伤组织。结果表明,以11月份三尖杉幼茎为外植体,以MS NAA3.0mg/L KT0.1mg/L为诱导培养基和继代培养基,继代6～8代,每代培养30～35d,收获愈伤组织或细胞培养物,该程序是获得大量三尖杉愈伤组织的较佳培养程序。     

“凤丹”牡丹花丝愈伤组织诱导及分化研究

以"凤丹"花丝为外植体，探究了外植体发育时期、基本培养基和植物生长调节剂（plant growth regulators，PGRs）对愈伤组织诱导、增殖和分化的影响，并对不同类型的愈伤组织进行了形态组织学观察。结果表明：花蕾直径为13~19mm时、半透明或白色的幼嫩花丝更适宜愈伤组织的诱导；愈伤组织诱导的最适培养基为SH添加2，4-D 1 mg·L^-1、NAA 2 mg·L^-1及BA 0.2 mg·L^-1，最高诱导率和诱导量分别为99.12%和5.68 g；愈伤组织增殖的最适培养基为SH添加2，4-D 0.5 mg·L^-1、NAA 0.5 mg·L^-1及BA 0.25 mg·L^-1，增殖率为3.86；花丝愈伤组织根据形态结构可分为三类，Ⅰ类愈伤组织具有典型的胚性愈伤组织特征，可进一步分化产生体胚；Ⅱ类愈伤组织和Ⅲ类愈伤组织内部呈现大量维管组织分化，其中Ⅱ类愈伤组织中观察到了不定芽的分化，Ⅲ类愈伤组织未见分化。上述结果表明"凤丹"花丝具有重要再生潜力，是一种良好的新型外植体，对研究建立牡丹体外再生体系具有重要价值。     

文心兰类原球茎的愈伤组织诱导及其植株再生

该研究首次以文心兰的类原球茎( protocorm-like bodies, PLBs)为外植体进行愈伤组织诱导及其植株再生培养,并分析了不同浓度的TDZ和2,4-D配比对愈伤组织增殖的影响。结果表明：以1/2MS为基本培养基,添加1 mg.L-1 TDZ与3 mg.L-12,4-D,从接种的 PLBs上可以诱导出乳白色的、较疏松的愈伤组织,诱导频率达到100％。愈伤组织继代培养时,在2,4-D浓度为0.5~2.0 mg.L-1的范围内,其增殖主要受TDZ浓度的影响,TDZ浓度从1.0 mg.L-1降低到0.5 mg.L-1,愈伤组织鲜重增殖倍数显著增加,由最低的4.50倍增加到最高的6.04倍。愈伤组织增殖的最适培养基为1/2MS ＋0.5 mg.L-1 TDZ ＋1.0 mg.L-12,4-D。将在最适愈伤组织增殖培养基上继代培养约1个月的愈伤组织转移到T2培养基(3.5 g.L-1花宝1号＋20 g.L-1红薯＋25 g.L-1香蕉＋1 g.L-1 tryptone ＋20 g.L-1蔗糖＋3.5 g.L-1 phytagel)上,黑暗培养1个月后,每克鲜重的愈伤组织约诱导出1328.67个PLBs。将诱导出的PLBs转移到新鲜的T2培养基上光照培养1个月,萌发率为90.12％。而将小植株转移到添加1 g.L-1活性炭的1/2MS培养基上,成苗率达到100％。该研究结果成功建立了文心兰的高频愈伤组织诱导及其植株再生体系,为文心兰基因工程育种提供了一个高效、稳定的转化受体系统。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化研究

以2个小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,研究了不同预处理、不同2,4-D浓度及与KT组合、不同蔗糖浓度等因素对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:4℃低温预处理可提高愈伤组织的出愈率及再生苗率,2个材料的出愈率及再生苗率均达到90%和30%以上;在不同预处理条件下,2,4-D浓度对出愈率及再生苗率的影响与基因型有关,2,4-D浓度为1~2 mg/L更有利于愈伤组织诱导及分化;附加KT能缓解高浓度2,4-D对再生苗率的抑制作用,而对于在1、2 mg/L 2,4-D的培养基中附加KT则不表现这种作用;蔗糖浓度则在30 g/L条件下更有利于愈伤组织诱导。因此通过4℃低温预处理,在MS基本培养基中附加1~2mg/L 2,4-D及30 g/L蔗糖亦可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化。     

苦荞胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

以苦荞子叶和下胚轴为外植体,进行了不同浓度激素组合的MS和SH固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生的研究。结果发现,MS培养基比SH培养基更有利于胚性愈伤组织诱导;2,4-D是诱导愈伤组织的有效激素,KT能有效促进胚状体的形成;下胚轴和子叶都能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株。下胚轴在MS 1.5mg·L-12,4-D 1.5mg·L-1BA培养基,子叶在MS 2mg·L-12,4-D 0.5~1.5mg·L-1BA上能高效诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS 2mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1KT培养基中继代,能有效诱导胚性愈伤组织;来自下胚轴的胚性愈伤组织在1/2MS 2.0mg·L-1BA 0.5mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上能够高频再生出芽,来自子叶的胚性愈伤组织在1/2MS 1.0mg·L-1BA 0.1mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上芽诱导率较高;MS 1mg·L-1NAA是适宜的再生苗生根培养基。     

火龙果愈伤组织诱导与植株再生

为了建立火龙果愈伤组织诱导与植株再生体系,以火龙果茎段、幼苗和子叶为外植体进行离体培养试验。结果表明：茎段诱导愈伤组织的最优培养基为1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BAO．5mg·L^-1,诱导子叶愈伤组织的最适培养基是1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1,诱导愈伤组织分化的最优培养基为1／2MS＋6-BA4．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1,最佳生根培养基为1／2MS＋6．BA1mg·L^-1＋NAA0-3mg·L^-1。     

水花生愈伤组织的诱导及根的分化

在 1/ 2MS培养基上培养出水花生的无菌苗 ,然后将水花生不同器官的外植体接种在不同培养基和添加不同种类激素及其浓度配比的培养基中 ,研究愈伤组织的诱导条件。结果表明 :茎、叶为适宜组培的器官 ,苄基腺嘌呤(BA)、萘乙酸 (NAA)、玉米素 (ZT)、吲哚乙酸 (IAA)的几种配比对水花生茎和叶的愈伤组织诱导均产生良好效应 ,NAA不变 ,随BA浓度上升 ,愈伤组织的诱导率上升。NAA/BA的比值越大越有利于根的分化。     

阔鳞鳞毛蕨孢子的无菌繁殖

以阔鳞鳞毛蕨（Dryopteris championii）成熟孢子为外植体,研究了不同植物生长调节剂及浓度对其孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根的影响。结果表明：1/2MS＋2%蔗糖为孢子萌发最适培养基,20 d后萌发率达65%;诱导愈伤组织的最适培养基为MS＋KT 0.5 mg.L-1＋2,4-D 1 mg.L-1,诱导率达39.8%,愈伤组织为绿色颗粒状;颗粒状愈伤组织在MS＋KT0.2 mg.L-1的培养基中生长出大量丛生芽,转化率可达66.3%;MS＋IAA 0.2 mg.L-1＋NAA 0.2 mg.L-1培养基可有效促进幼孢子体苗生根。     

球子蕨孢子的无菌繁殖

以球子蕨成熟孢子为外植体,研究了不同激素及浓度对其孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根的影响。结果表明:孢子萌发最适培养基为1/2MS+2%蔗糖,20d后萌发率达55.7%;诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.5mg·L-1KT+0.5mg·L-12,4-D,诱导率达36%,愈伤组织为绿色颗粒状;颗粒状愈伤组织在不添加激素的MS培养基中即可生长出大量丛生芽,转化率可达49.3%;低浓度(0.2mg·L-1)的IAA可有效促进幼孢子体苗生根。     

虎杖愈伤组织的诱导及高产白藜芦醇材料的筛选

将虎杖(Polygonum cuspidatum)不同外植体经不同消毒时间处理后,接种在添加不同激素种类和水平的相同基本培养基上或相同激素种类和水平基本培养基上进行诱导实验,同时对根、根茎芽、叶、韧皮诱导的愈伤组织进行白藜芦醇的含量测定实验,其结果表明:基本培养基以MS较好,外植体叶对激素种类较为敏感,其中适当浓度的NAA诱导愈伤组织比2,4-D的效果要好,KT比BA要好,在有KT存在的培养基上诱导愈伤组织比较紧密,有利于分化;在MS NAA2m g/L KT0.1mg/L培养基上诱导愈伤组织较好,根茎芽的诱导率最高,为73%.愈伤组织的生长趋势从接种的第3d开始生长,到21d时生长达到最高峰,干重为0.461g,以后生长速度减慢.不同材料诱导的愈伤组织中白藜芦醇的含量以根茎部芽的愈伤组织含白藜芦醇最高,其次是叶和根,最低的为韧皮.     

杂景天愈伤组织诱导及红景天苷测定

以杂景天的子叶、胚轴为外植体,接种在附加不同激素组合的MS培养基上诱导愈伤组织产生,愈伤组织经继代培养后,用高效液相色谱检测红景天苷含量.结果显示,杂景天的子叶是诱导愈伤组织的理想外植体,子叶在MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L 2,4-D和MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L NAA培养基上的愈伤组织诱导率较高(81.8%、80%).愈伤组织有红、绿2种类型.HPLC检测显示红色愈伤组织不含红景天苷,绿色愈伤组织红景天苷含量为0.288 6%.表明利用组织培养生产红景天苷是可行的.     

扁桃愈伤组织诱导及分化的研究

以扁桃优良品种'Naporeil'的茎段、叶片和花药作为外殖体,分别对其进行愈伤组织诱导和分化研究,以筛选愈伤组织的最佳诱导增殖培养基、分化培养基和生根培养基.结果表明,该品种以茎段、花药作为外殖体最易诱导获得愈伤组织,叶片不适宜作为外殖体诱导愈伤组织;愈伤组织的最佳诱导增殖培养基均为B5+0.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,愈伤组织诱导率为100%,增殖倍数最高可达7倍;茎段愈伤组织的分化培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.8 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ZT,分化率为71%;花药愈伤组织未见分化.由茎段愈伤组织再分化获得的不定芽在1/2MS+0.5 mg/L IBA培养基上诱导生根,并给以黑暗预处理可使生根率达80%以上.     

长柄双花木愈伤组织诱导及植株再生

以长柄双花木当年生嫩梢上的叶柄、嫩茎、嫩叶为外植体,对影响长柄双花木愈伤组织诱导和继代、分化主要因素进行研究。结果表明:在培养基MS+NAA0.5mg/L+2,4-D2.0mg/L上,三种外植体均可诱导出愈伤组织,其中叶片愈伤组织诱导率最高。该培养基还可作为愈伤组织继代培养基,但继代培养周期不超过2周。愈伤组织接种在MS+BA2mg/L上分化不定芽,根的诱导在1/2MS+IBA0.5mg/L培养基上进行。     

雷竹体细胞胚诱导的初步研究

以雷竹（Phyllostachys violascens）种胚为外植体, 脱分化产生愈伤组织, 愈伤组织诱导产生体细胞胚, 并发育成苗。实验结果表明： 愈伤组织诱导体细胞胚基本培养基为MS无机盐＋20 g·L^-1葡萄糖（glucose）＋10 mg·L^-1腺嘌呤（adenine sulfate）＋ 0.5 g·L^-1麦芽抽提物（malt extract）＋0.1 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1氨氯吡啶酸（picloram）＋10 g·L^-1type A agar; 将基本培养基中的氨氯吡啶酸浓度升高至0.1 mg·L^-1即为愈伤组织诱导的最佳培养基, 早期子叶胚是愈伤组织诱导的最佳胚体; 愈伤组织在添加0.001 mg·L^-1TDZ和0.3 mg·L^-1ABA的愈伤组织最佳培养基上光照培养4周后, 去除其中的ABA, 并添加0.1 mg·L^-1NAA继续培养1个月, 体细胞胚数量最多可达87.43%, 该培养基是体细胞胚发生的最佳培养基; 将上述体细胞胚发生培养基中的6-BA浓度升高至1 mg·L^-1, 继代培养2个月后有小苗出现。组织学观察显示, 体细胞胚细胞核大、质浓且多数呈球形原胚状。     

睡菜离体快繁技术的研究

以睡菜的幼嫩茎段为外植体,接种到附加不同浓度激素配比(6-BA/NAA)的MS培养基,诱导睡菜愈伤组织、芽及根的生长。研究发现,外植体在1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+MS的培养基上培养10d,可观察到浅绿色的愈伤组织。愈伤组织转接到4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+MS培养基上2周左右可生成芽。对带芽的愈伤组织再进行诱导生根进而形成完整再生植株,最适根诱导培养基为0.3mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+MS培养基。该实验采用植物离体快繁技术成功建立了睡菜再生体系,为睡菜种苗规模化奠定了技术基础。     

曼陀罗茎段愈伤组织诱导和再生植株的研究

本试验以曼陀罗茎段为外植体,在附加不同植物激素组合的培养基中对愈伤组织的诱导和植株再生进行研究。结果表明:采用修改的MS培养基(除去甘氨酸,维生素B1含量增加至0.5mg/L,pH5.5)附加2mg/L2,4-D可由曼陀罗茎段诱导大量胚性愈伤组织;愈伤组织继代选用0.5mg/L2,4-D为宜;不定芽的诱导采用MS培养基(20g蔗糖,8g琼脂,0.1g水解干酪素) 6-BA(0.5mg/L);幼苗进一步转接至1/2MS IBA(0.2mg/L)生根培养基中,可完成曼陀罗茎段愈伤组织诱导和再生植株的组织培养过程。     

大叶秦艽的组织培养与植株再生

以秦艽的叶和下胚轴为外植体,成功地诱导出愈伤组织和再生植株.诱导愈伤组织最合适的培养基为附加2 m g·L- 1 2 ,4 - D和0 .5 mg·L- 1 6 - BA的MS培养基,诱导率可达到10 0 % .愈伤组织转移到附加2 mg·L- 12 ,4 - D和0 .5 mg·L- 1 KT和5 0 0 m g·L- 1 L H的MS培养基上进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0 .1mg·L- 1 2 ,4 - D和0 .5 m g·L- 1 6 - BA的MS分化培养基上进行分化,其分化率可达到86 .6 7% ,将分化出的芽转接到不加激素的MS上,结果可生长出大量的分化苗.