中性神经酰胺酶在胰岛β细胞脂毒性中的变化及作用

目的:探讨中性神经酰胺酶(NCDase)在胰岛β细胞脂毒性中的变化及作用。方法:采用0.5 mM棕榈酸作用INS-1细胞不同时间,用MTT法检测细胞活力;细胞内分别建立NCDase基因过表达和干扰后,用MTT法检测细胞的增殖活力;棕榈酸刺激细胞24 h,HPLC法和Western Blot法检测NCDase活性和蛋白表达;重组质粒pEGFP-C3-NCDase过表达NCDase基因和NCDase siRNA干扰NCDase基因分别建立后,棕榈酸刺激24 h,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,棕榈酸刺激24 h时细胞抑制率显著降低(52±3.2)%(P0.01);与BSA对照相比,棕榈酸刺激24 h NCDase活性显著被抑制(P0.01),NCDase蛋白水平也被显著下调(P0.001);与BSA对照组相比,过表达NCDase显著促进细胞的增殖,然而NCDase干扰显著抑制细胞的增殖(P0.05);与p EGFP-C3+棕榈酸组相比,pEGFP-C3-NCDase显著缓解棕榈酸诱导的细胞凋亡(P0.01);与con.siRNA+棕榈酸组相比,NCDase siRNA显著促进了棕榈酸诱导的细胞凋亡(P0.01)。结论:棕榈酸刺激后抑制β细胞NCDase活性和蛋白表达,NCDase过表达促进β细胞增殖并且在β细胞脂毒性中起着保护作用。     

细胞毒性T细胞表位预测

细胞毒性T细胞表位是由8～10个连续的氨基酸残基构成的特殊肽段。本文对基于基序、基于结构、基于人工神经网络和隐马尔可夫模型的各类细胞毒性T细胞表位预测方法进行了综述。     

绵羊MSTN多克隆抗体的制备及细胞毒性分析

目的:研究绵羊肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)多克隆抗体的安全性。方法:将绵羊MSTN成熟肽基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化至BL21(DE3)中;利用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,West-ern blotting鉴定其免疫原性;ELISA检测抗体效价;通过检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的水平研究其细胞毒性。结果:成功获得了330 bp的绵羊MSTN成熟肽基因,表达蛋白分子量约为33 kDa,纯度达90%以上;Western blot检测表明MSTN蛋白具有免疫原活性;ELISA检测证实制备的抗体可与抗原蛋白特异性结合,抗体效价为l:25 600,细胞毒性试验表明高浓度的多克隆抗体(200μg/mL)对肌肉细胞无毒害作用。结论:制备的绵羊MSTN多克隆抗体具有生物学活性,对肌肉细胞无细胞毒性,为促生长效果验证提供了安全保障。     

CdSe/ZnS-SA量子点细胞毒性的初步研究

目的：探讨链亲和素修饰的CdSe/ZnS核壳结构量子点（CdSe/ZnS-SA）对稳定转染pcDNA3.1/APP595/596质粒的人胚肾（HEK293）细胞的短期毒性作用.方法：将CdSe/ZnS-SA量子点与稳定转染pcD-NA3.1/APP595/596质粒的HEK293细胞共培育,在倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果：终浓度为2.5 nmol/L-20 nmol/L的CdSe/ZnS-SA量子点与HEK293细胞分别共育8h、16h、24 h后,细胞的形态无明显改变;终浓度为2.5 nmol/L-25 nmol/L的CdSe/ZnS-SA量子点与HEK293细胞分别共育8h、16 h、24 h,各处理组与对照组间,各处理组间的吸光度值、细胞凋亡率差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论：一定浓度范围的CdSe/ZnS-SA量子点在短期内对稳定转染pcDNA3.1/APP595/596质粒的HEK293细胞无明显的毒性作用,具有较好的生物相容性.     

聚乙二醇化学修饰的聚乙烯亚胺衍生物的制备及其细胞毒性研究

目的:合成聚乙二醇(PEG)化的聚乙烯亚胺衍生物(PEI-Et)基因输送载体PET 1和PET 2,并考察两个载体材料在He La细胞、MCF-7细胞中的细胞毒性及在He La细胞中的转染效率。方法:将亚乙基二氯甲酸酯与PEI 800 Da交联制备成交联PEI衍生物PEI-Et,进一步将PEI-Et与聚乙二醇(PEG)以不同摩尔比例(1:1,2:1)交联连接,得到PEG化的PET 1和PET 2。采用MTT法检测PEI-Et、PET 1、PET 2对He La细胞、MCF-7细胞的细胞毒性。检测单位质量的荧光强度测定转染效率。结果:PET的细胞毒性随浓度增大而增大,在同一浓度下PET的细胞毒性小于PEI 25 KDa(P0.01);并且与DNA复合后,复合物细胞毒性随质量比的增高而增大,在同一质量比下PET的细胞毒性小于PEI 25 KDa(P0.01),特别是PET 1。并且最佳比例时,PET 1的转染活性最高。结论:作为非病毒基因载体,PET 1具有高的转染效率及低的细胞毒性。     

抗肿瘤蛋白Onconase的原核细胞表达及细胞毒性检测

本文主要利用pET22b(+)表达载体在大肠杆菌中表达一种在两栖类蛙(Rana pipiens)卵细胞内存在的核糖核酸酶—Onconase。通过包涵体复性、蛋白纯化等程序最终获得与天然蛋白活性相似的重组蛋白,并检测Onconase 对源于皮肤T 细胞淋巴瘤的Hut-78肿瘤细胞的毒性(IC_(50)=0.5μmol/L),证明Onconase 用于抗淋巴瘤的可行性。     

包有蓖麻毒蛋白的脂质体的制备,性质及毒性研究

以半乳糖神经酰胺（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ,ＧＣ）为材料,采用冷冻干燥脱水再水化法（ＤＲＶ法）制成包裹有蓖麻毒蛋白的半乳糖神经酰胺脂质体（ｒｉｃｉｎＧＣＬｓ）并对其性质及体外细胞毒性和动物毒性做了研究,实验结果表明,ｒｉｃｉｎ－ＧＣＬｓ的最大包封率可达７４．１％,粒度分布主要在０．５～０．８μｍ之间,符合静脉注射液的标准,脂质体冻干粉在４℃储存近半年,粒度分布几乎没有变化,体外细胞毒性     

两种体外细胞毒性检测方法的比较研究

目的比较两种常用的细胞毒性检测方法在医疗器械生物学评价中的相关性。方法分别采用MTT比色法和细胞增殖度法,在37℃条件下,将五种医疗器械／生物材料的浸提液分别与小鼠成纤维细胞（L-929）接触2天和2,4,7天,比较材料对细胞的毒性影响。结果5种不同的材料浸提液分别表现出不同程度的细胞毒性反应（0～2级）。将MTT比色法与细胞增殖度法（2天）的实验数据进行相关性分析,显示两者之间具有良好的相关性（R=0．977）。结论MTT比色法由于其检测所需的细胞量相对较少,试验步骤相对简便、检测周期短,因此具有一定的优越性,是个值得推荐的细胞毒性检测方法。     

万古霉素/磷酸钙骨水泥复合材料的细胞毒性研究

目的:研究不同浓度配比(0%、1%、5%、10%)万古霉素/磷酸钙复合材料对大鼠骨髓间充质干细胞的毒性作用。方法:原代培养大鼠间充质干细胞并鉴定;采用CCK-8法测定不同浓度配比万古霉素/磷酸钙复合材料对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响、TUNEL法测定细胞凋亡率、扫描电镜观察细胞形态学改变。结果:CCK-8结果显示,5%及10%万古霉素/磷酸钙复合材料显著抑制大鼠骨髓间充质干细胞增殖(P0.05);TUNEL结果显示,5%及10%万古霉素/磷酸钙复合材料组细胞凋亡率显著增高(P0.05);扫描电镜结果显示,高浓度万古霉素毒性作用下细胞失活,形态学发生显著变化;1%万古霉素/磷酸钙复合材料组对细胞影响相对于空白对照组无显著差异。结论:低浓度(1%)万古霉素/磷酸钙复合材料基本无细胞毒性,细胞相容性好。     

Structure-Function Relationship of Three Triple-Helical Nucleic Acids

Abstract

The nucleic acid triplexes poly d(T)·poly d(A)·poly d(T), poly (U)·poly (A)·poly (U), and poly (I)·poly (A)·poly (I) display a sort of continuity between each other. However, their morphologies present their own individuality which, considering those of their parent duplexes, are quite unexpected. This comparison helps to understand triplex structure-function relationship. While helical parameters are functions of the sugar pucker, low values of WC and Hoogsteen base-pair propellers is commonplace for triplexes and the Hoogsteen base-pair geometry monitors the effects of the interstrand phosphates charge-charge repulsion.

Synopsis

The nucleic acid triplexes poly d(T)·poly d(A)·poly d(T), poly(U)·poly(A)·poly(U), and poly (I)·poly (A)·poly (I) present distinct morphologies. Considering those of their parent duplexes, they are also quite unexpected.     

姜黄素共聚物胶束的制备与体外细胞毒评价

目的:制备一种姜黄素共聚物胶束以提高姜黄素的水溶性及其抗肿瘤活性。方法:采用乳化溶剂挥发法制备了载姜黄素的共聚物胶束(Cur/PTL1胶束),对其粒径、载药量、包封率和体外药物释放行为进行了考察;并采用MTT法考察了PTL1空白胶束和Cur/PTL1胶束的体外细胞毒作用。结果:制备了粒径在40 nm左右的载姜黄素共聚物胶束,载药量为9.78±0.29%,包封率为97.24±2.68%。体外药物释放实验表明,游离姜黄素在24 h内的药物累积释放率达到90%以上,而Cur/PTL1胶束在24 h内药物累积释放率为23.8%,能够持续释放14天,14天内累积释放率为85.9%,具有一定的缓释能力。MTT实验结果表明,当PTL1空白胶束浓度达到1 mg/mL时,细胞的存活率仍在90%以上;Cur/PTL1胶束组IC50为4.73±0.23μg/mL,游离姜黄素组IC50为6.42±0.35μg/mL。结论:实验结果表明,Cur/PTL1胶束可以作为一种有前景的纳米药物输送系统。     

氨甲喋呤-人血清白蛋白-单抗79结合物的制备及其体外细胞毒作用

 本研究采用间接连接法,应用异型双功能连接剂SPDP,形成以酰胺键和二硫键连接的氮甲喋吟-人血清白蛋白-单抗79(MTX-HSA-McAb79)结合物。其中McAb79与HSA克分子比有效地控制在1:1～2,且结合物的纯度及产率均较高,有一定的制备价值。 对靶细胞Nalm-6的体外细胞毒试验结果表明:MTX-HSA-McAb 79的杀伤活性显著强于MTX-HSA-nIgG,但较游离MTX的杀伤活性为弱。且MTX-HSA-McAb 79的杀伤作用依赖于McAb 79与靶抗原CALLA的抗原抗体反应。     

Piperidinyl Peptide Nucleic Acids: Synthesis and DNA-Complementation Studies

Abstract

Synthesis of a new six membered PNA analogue by introducing a methylene bridge between β carbon atom of ethylene diamine and β′ carbon atom of linker to nucleobase.     

新型聚乙烯亚胺衍生物在COS-7细胞中转染和毒性的研究

目的：研究以乙二醛为连接剂的聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine,PEI）衍生物Polyimine-PEI对非洲绿猴肾癌细胞COS-7的转染活性和细胞毒性的影响。方法：以荧光素酶质粒为报告基因,研究高分子与DNA的复合物在COS-7细胞的转染活性,用MTT方法研究高分子对COS-7细胞的毒性。结果：COS-7细胞实验显示,Polyimine-PEI具有很低细胞毒性,其毒性显著低于PEI25kDa,同时也具有高效输送质粒的能力。结论：Polyimine-PEI是一种新型的高效,低毒在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体。     

新型聚乙烯亚胺衍生物在COS-7 细胞中转染和毒性的研究

目的:研究以乙二醛为连接剂的聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)衍生物Polyimine-PEI对非洲绿猴肾癌细胞COS-7的转染活性和细胞毒性的影响。方法:以荧光素酶质粒为报告基因,研究高分子与DNA的复合物在COS-7细胞的转染活性,用MTT方法研究高分子对COS-7细胞的毒性。结果:COS-7细胞实验显示,Polyimine-PEI具有很低细胞毒性,其毒性显著低于PEI25kDa,同时也具有高效输送质粒的能力。结论:Polyimine-PEI是一种新型的高效,低毒在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体。     

新型PEI 衍生物在COS-7 细胞中的转染与毒性研究

目的:寻找一种新型的转染效率高,毒性低的非病毒基因载体.方法:通过化学方法合成Polyimine-MPEI,然后以不同质量比包裹绿色荧光蛋白质粒,检测在COS-7细胞中的转染效率和毒性.结果:在比例从5到100之间,转染效率均比较理想,能达到1.00E+07以上,Polyimine-MPEI的毒性也很小,细胞的生长率均在80％以上,明显高于PEI25KDa对照组.结论:Polyimine-MPEI是一个很有研究前景的聚合物载体,具有高转染效率低毒性的特点,可以通过延长反应时间,增加分子量,增大转染能力.     

新型聚乙烯亚胺衍生物在Hep G2 细胞中转染和毒性的研究

目的:研究以对苯二甲醛( Terephthalaldehyde)为连接剂的聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)衍生物PEI-Tp对肝癌细胞Hep G2的转染活性和细胞毒性的影响.方法:以荧光素酶质粒作为报告基因,研究高分子和DNA的复合物在Hep G2细胞中的转染活性,用MTT的方法研究高分子对Hep G2细胞的毒性.结果:Hep G2细胞转染结果显示构建的聚乙烯亚胺衍生物PEI-Tp具有高效输送质粒的能力;细胞毒性结果显示PEI-Tp随着浓度的增加,其毒性显著低于PEI25 kDa.结论:Hep G2细胞实验数据显示PEI-Tp是一种高效、低毒,在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体.     

新型可降解PEI衍生物的表征及其在Brl-3A细胞中的毒性和转染研究

目的:对新型可降解高分子进行表征,研究其在Brl-3A细胞中的毒性和转染效率,以及连接剂比例对以上方面的影响。方法:通过化学方法合成不同比例PEI-Tr高分子,考察其包裹质粒DNA形成纳米颗粒的粒径和电位,以CCK-8方法考察Brl-3A细胞中的细胞毒性,以荧光素酶质粒为报告基因考察Brl-3A细胞中的转染效率。结果:PEI-Tr材料能形成200 nm以下带20 mV左右正电荷的纳米颗粒,具有较好的细胞内吞能力和溶液稳定性,细胞毒性实验证明,随着浓度增加PEI-Tr材料显示了远低于PEI-25kDa的细胞毒性,细胞转染实验表明其拥有高效输送质粒的能力。结论:PEI-Tr是一种高效低毒的可降解聚阳离子载体,在基因输送领域有很大的潜力;连接剂的比例在聚阳离子功能中起到重要作用。