小鼠正常肝、再生肝和腹水型肝癌H22a细胞酪氨酸蛋白磷酸酶的比较研究

小鼠肝在再生过程中,胞浆酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)活力比正常肝有明显升高,并且伴有时相变化,,手术后24—48h活力达到最高,而H22a细胞各组分的活力都比正常肝低。PTPP在正常肝细胞的溶酶体中分布最高;再生肝中则在细胞核、胞浆和微粒体中更集中;在H22a细胞中,PTPP的活力分布趋于平均化。再生肝和H22a细胞胞浆中都缺少正常肝的a、b两个PTPP活力峰,其它五个主要PTPP峰与正常肝无根本的差别。     

十全育真汤对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究十全育真汤对荷瘤小鼠免疫功能的影响,探讨十全育真汤抗肿瘤的作用机制。方法：SPF级雄性昆明种小鼠30只,制成荷H₂₂小鼠肝癌细胞移植瘤模型,随机分为模型组、阳性对照组及十全育真汤组（n=10）;另选择未接种小鼠10只为正常对照组。正常对照组、模型组每天按10 ml/kg灌胃生理盐水及蒸馏水,阳性对照组、十全育真汤组每天按8 g/kg、18 g/kg灌胃参一药液（80 mg/ml）与十全育真汤剂。连续给药14 d后处死小鼠,测量胸腺、脾脏指数及抑瘤率,检测外周血中白细胞、淋巴细胞含量及T细胞亚群CD3、CD4、CD8细胞百分比,血清中白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及干扰素-β（IFN-β）的含量,淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤功能。结果：较正常对照组,十全育真汤组小鼠体重明显增加,脾脏指数显著增大（P<0.05）;白细胞、淋巴细胞CD4、CD8、CD3及TNF-α含量明显升高（P<0.05）;IL-2、IFN-β含量显著下降（P<0.05）;淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤功能明显升高（P<0.05）。与模型组相比,十全育真汤组小鼠胸腺、脾脏指数显著增大（P<0.05）;白细胞、淋巴细胞CD3、CD4、IL-2、IFN-β及TNF-α含量明显升高（P<0.05）,CD8含量则显著降低（P<0.05）;NK细胞杀伤功能及淋巴细胞增殖能力显著增加（P<0.05）。结论：十全育真汤可促进H₂₂荷瘤小鼠免疫器官的生长,增强机体免疫功能,有利于肿瘤机体的恢复。     

黄瓜香联合顺铂治疗小鼠H22肝癌的研究

目的 观察黄瓜香联合顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用.方法 将40只接种H22肝癌细胞的昆明小鼠随机分为4组,其腹腔分别注射生理盐水(对照组);黄瓜香组;顺铂组;黄瓜香+顺铂组(联合治疗组),观察小鼠的毒副反应及生存质量.实验19 d后,处死全部小鼠,剥离皮下肿瘤,称小鼠肿瘤重量,计算抑瘤率.结果 黄瓜香组的H22肝癌平均瘤重为(1.26 ±0.19)g,明显低于对照组的(1.89 ±0.56)g(P ＜0.01).联合治疗组的平均瘤重为(0.57 ±0.42)g,均明显低于黄瓜香组(P＜0.01)和顺铂组(P＜0.01);其抑瘤率达69.8％,明显高于黄瓜香组(x2=16.9875,P＜0.01)和顺铂组(x2=5.0602,P＜0.05).联合治疗组小鼠的毒副反应明显低于顺铂组,生存质量好于顺铂组;黄瓜香组与联合治疗组都能调节肠道菌群,扶植肠道中有益菌(乳酸杆菌和双歧杆菌)生长,抑制大肠埃希菌生长,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 黄瓜香与顺铂合用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用,能降低顺铂毒副反应,提高小鼠的生存质量.     

不同治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效比较

目的比较不同治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效。方法采用H22腋下实体瘤KM小鼠及小鼠标准化、计量化辨证方法,观察复合化疗方案局部注射、索拉非尼口服,及两者联合应用等对小鼠抑瘤率和证候的影响。结果所选用3个治疗方案均具有一定的抑瘤作用,综合对气血阴阳证候的影响及胸腺和脾脏重量,以复合化疗方案局部注射联合索拉非尼口服最好。结论局部介入联合索拉非尼口服方案疗效较好。     

佐剂增强的肿瘤细胞裂解物疫苗抗小鼠H22肝癌作用

以鼠源肝癌H22全细胞裂解物为抗原,通过化学偶联白喉毒素(DT)和串联重复的T辅助表位mH-SP70407-426肽段,混合OK432(链球菌A群)制成肿瘤全细胞疫苗H22-DT-M2-OK432(HDTMOK)。治疗性免疫结果显示,疫苗激发的免疫应答对H22肿瘤起到了有效的抑制作用。为进一步提高该疫苗的抗肿瘤效果,用偶联的疫苗制备免疫刺激复合物(ISCOM),并验证其抑瘤效果。治疗性免疫结果显示,与PBS组相比,ISCOM疫苗组平均瘤重和瘤体积显著降低(P<0.01),同时有效地抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01);ELISA法从血清中检测到高滴度的抗体。且与HDTMOK疫苗相比,ISCOM疫苗抑瘤作用提升显著(P<0.05)。HDTMOK能有效抑制小鼠肝癌实体瘤生长,佐剂配伍后的疫苗对H22的抑制更为显著,能够有效提升肿瘤全细胞疫苗的抗肿瘤能力。     

不同来源H22细胞株的生物学特性比较研究

目的　对不同研究单位保存的小鼠肝癌H2 2 细胞株的基本生物学特性进行比较研究。方法　从国内3个不同研究单位 (武汉大学典型培养物保藏中心 ,山东省医学科学院药物研究所以及中国医学科学院药物研究所 )引进小鼠肝癌H2 2 瘤株 (分别简称武汉H2 2 、山东H2 2 、北京H2 2 ) ,KM小鼠腹腔传代 ,然后对其体外培养特性、体内生长特征、病理形态、治疗学特征进行了比较分析。结果　 3株H2 2 细胞在体内、体外生长速度明显不同 ,武汉H2 2 生长速度较其他瘤株快 (P <0 .0 1) ,接种一致性好 ;而山东H2 2 则在 10 4 个细胞 只小鼠时即可接种成功。荷瘤小鼠体内未发现明显转移灶 ,但肿瘤形态各不相同。环磷酰胺治疗时 ,山东H2 2 抑瘤率最高为 74 6%。结论　不同研究单位H2 2 瘤株的生物学特性有很大不同 ,虽为同一起源 ,但经不同单位保存使用一定时间后 ,它们之间的生物学特性已存在较大的差异     

小鼠宫内移植恶性肿瘤H22的实验研究

为了观察恶性肿瘤细胞处于宫内中晚期胚胎环境对胎鼠发育影响及恶性肿瘤的生物学行为,将8×106的H22细胞数量移植到胎鼠的羊膜腔(D9-D12)和腹腔(D13-D18),观察移植H22后的胎鼠分娩、新生鼠发育状况和荷瘤情况.结果发现,被移植H22的胚胎(D9-D18)能够继续在孕鼠子宫中发育至分娩,新生鼠无发育异常,新生鼠继续发育成熟,发育同正常鼠比较无异常,且一直无腹水荷瘤,H22荷瘤标志物AFP放射免疫法(radio-immunityRI)测定为阴性,RT-PCR法检测AFP阴性.     

姜黄素对两株不同转移力小鼠腹水型肝癌细胞生物学特性的影响

目的 研究姜黄素（Curcumin,Cur）对来源于同一亲本的小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株（HCa-F和HCa-P）增殖、细胞周期分布及皮下移植HCa-F和HCa-P的615小鼠生存期的影响,并探讨2株细胞对Cur的敏感性差异是否存在显著性.方法 用15～250 μmol/L Cur分别处理HCa-F和HCa-P 48 h,以MTT法检测细胞的生长活性,以生长曲线评估药物对细胞生长的作用,以流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响,观察Cur对细胞形态的影响.给615小鼠右腋中线皮下接种HCa-F和HCa-P细胞,通过ig给药的方法,观察Cur对荷瘤鼠生存期的影响.结果 Cur可抑制HCa-F和HCa-P的生长,抑制率分别为7.23%～82.23%和6.04%～61.31%,且呈剂量依赖性;IG0在HCa-F为51.48μmol/L,在HCa-P为90.87μmol/L;在非细胞毒性最大剂量15μmol/L Cur作用下,2株细胞的生长速度均受到抑制,群体倍增时间延长;HCa-F细胞形态受到影响;细胞周期被重新分布,HCa-F被阻滞在S期,HCa-P被阻滞于S期和G2/M期.经ig给予150 mg/kg的Cur可使皮下接种HCa-F和HCa-P的615小鼠生存率提高分别达45.06%和49.68%.结论 Cur可抑制HCa-F和HCa-P的增殖,使细胞周期重新分布,且高转移细胞株HCa-F较低转移细胞株HCa-P对Cur更为敏感Cur可延长荷瘤鼠的生存期.     

醉鱼草苷Ⅳ对H22肝癌小鼠的抑瘤作用

为观察醉鱼草苷Ⅳ对 H22肝癌小鼠的体内抑瘤作用,取 H22肝癌细胞接种于小鼠右腋皮下,H22肝癌小鼠随机分为5组：模型组、醉鱼草苷Ⅳ高、中、低(1．00、0．50、0．25 mg/kg)3个剂量组和阳性药(CTX,20．0 mg/kg)对照组.每组10只,治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,连续腹腔注射10 d后,于第11天观测抑瘤率、脾腺指数、胸腺指数,同时进行血清中 SOD、MDA、GGT 和 AKP 含量检测.结果表明：与模型组比较,醉鱼草苷Ⅳ高、中剂量组对小鼠 H22移植性肝癌均有显著的抑瘤作用(P＜0．01),抑瘤率分别为56．96％和50．63％;与模型组相比,醉鱼草苷Ⅳ高剂量组小鼠血清SOD活性增加(P＜0．05),醉鱼草苷Ⅳ各剂量组血清MDA、GGT和AKP水平均降低(P＜0．01);除 SOD活性之外,环磷酰胺组与模型组比较无显著差异.说明醉鱼草苷Ⅳ在体内具有抗肝癌作用,其机理可能和机体的抗氧化能力有关,有待于进一步研究。     

结直肠癌肝转移原发病灶切除后患者生存状况及预后因素分析

目的:探讨结直肠癌肝转移原发病灶切除后患者生存状况及预后因素分析。方法:回顾性分析2008年5月至2012年5月我院收治的60例结直肠癌肝转移并接受原发病灶切除术患者临床及随访资料。采用Kaplan-Meier方法计算中位生存时间,采用Log-rank检验进行单因素分析,采用Cox回归模型进行多因素分析,对影响结直肠癌肝转移原发病灶切除后患者预后的相关因素进行分析。结果:60例患者1、2、3年生存率分别为83.2%、67.8%及50.3%;中位生存时间为(22.9±5.56)个月。单因素分析结果显示,原发肿瘤形态学分型、原发肿瘤T分期、原发肿瘤N分期、原发病灶手术方式、肝转移时间以及肝转移灶局部治疗方式等6个临床因素是结直肠癌肝转移原发病灶切除患者预后的影响因素(P0.05)。多因素分析结果显示,影响结直肠癌肝转移原发病灶切除后患者预后的因素主要有原发肿瘤形态学分型、原发病灶手术方式以及肝转移灶局部治疗方式(P0.05)。结论:原发肿瘤形态学分型、原发病灶手术方式以及肝转移灶局部治疗方式是影响结直肠癌肝转移患者预后的主要因素。对结直肠癌肝转移患者进行早期明确诊断与手术治疗,并对肝转移灶局部设定合理治疗方案,对于患者生存状况的提高具有十分积极的意义。     

不同入肝血流阻断方式对荷瘤小鼠肝功能影响的实验研究

目的:探讨不同血流阻断方式对荷瘤小鼠肝细胞功能的影响。方法:选择昆明小鼠24只随机分为三组,正常对照组(Suspe-nded operation,SO)、肝门阻断组(Occlusion of the portal triad,OPT)、保留肝动脉持续阻断门静脉(Occlusion of portal vein,OPV)各8只。采用门静脉注射肿瘤的方法建立肝癌模型,建模后3天采用阻断范围为左外叶和中叶、阻断时间为60分钟的入肝血流阻断方式,复流后5天后,通过测量3组对肝脏的缺血再灌注损伤程度以及病理学变化来评价不同血流阻断方式对肝细胞功能影响的程度。结果:门静脉注射小鼠肝癌细胞8天后,对照组测量小鼠正常丙氨酸氨基转移酶(ALT)值为66.5±22.3 IU/L,OPT组值为276.3±80.5 IU/L,OPV组值为89.6±28.4 IU/L,两组比较有统计学差异(P0.01);对照组测量小鼠正常天冬氨酸氨基转移酶(AST)值为301.3±126.7 IU/L,OPT组值为1126.4±285.5 IU/L,OPV组值为438.6±150.7 IU/L,两组比较有统计学差异(P0.01),病理组织学OPV组肝细胞损伤程度明显较OPT组轻。结论:保留肝动脉持续阻断门静脉可以减轻荷瘤小鼠肝脏的缺血再灌注损伤。     

131Ⅰ－McAbJH_（107）在载人肝癌BEL－7402裸鼠体内的放射免疫显像分析

用氯胺Ｔ碘标技术标记抗人肝癌单克隆抗体ＪＨ１０７（ＭｃＡｂＪＨ１０７）,观测其在载人肝癌ＢＥＬ７４０２裸鼠模型上的分布显像情况,氯胺Ｔ碘标法标记率５０％。每鼠腹腔注射２００Ｃｉ１３１Ⅰ－ＭｃＡｂＪＨ１０７,放射性物质第２４ｈ开始在肿瘤部位浓聚、逐步加强,９６ｈ达高峰,肿瘤组织较清楚显像并维持至１４８ｈ;同时周围组织放射性本底逐步减弱、消失。对照组１３１Ⅰ－ＮＩｇＧ呈全身均匀分布。无明显放射性物质浓聚及清楚显像。在４８ｈ和９６ｈ,１３１Ⅰ－ＭｃＡｂＪＨ１０７在１２种正常组织（脑除外）的Ｔ／ＮＴ均值分别为３．３８和６．２６,而１３１Ⅰ－ＮＩｇＧ的Ｔ／ＮＴ均值均低于１．０。     

Cox回归模型在肝癌病人生存分析中应用的研究

生存时间是癌症患者和临床医师共同关心的焦点,也是临床癌症诊治工作的重要指标之一．生存分析是研究多种因素与生存时间的关系以及关系程度的大小．Cox回归模型是生存分析中常用的方法之一．本文利用Cox回归模型对786名肝癌患者进行生存分析,确定影响肝癌患者预后的主要因素是癌栓、肝癌部位、治疗方式、肝脏储备功能、端粒酶活性、细胞增殖活性、γ-GT(γ-谷氮酰转肽酶)、术后复发等．为临床研究延长肝癌病人的生存期,提高其生存率提供了有力的依据．     

shASPP2 H22稳转肝癌细胞系的构建及ASPP2敲低对H22移植瘤小鼠血管生成的影响

摘要 目的：构建小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系,观察ASPP2敲低对血管生成的影响。方法：针对小鼠ASPP2基因设计了3个不同的shRNA干扰序列（Y18421,Y18422,Y18423）及1个对照序列（GL427NC2）,采用双酶切（Age Ⅰ和EcoR Ⅰ）及质粒连接构建重组质粒,使用菌落PCR和测序比对进行鉴定;使用293T细胞将各重组质粒包装慢病毒并测定滴度;将 shASPP2和对照慢病毒质粒转染H22细胞,采用流式细胞术测定转染效率;采用qRT-PCR、Western Blot法观察shASPP2慢病毒对H22细胞ASPP2的干扰效果;采用CCK8法观察ASPP2敲低对H22细胞增殖的影响;采用Western Blot法观察ASPP2敲低对H22细胞及上清VEGF表达和分泌的影响;采用细胞注射法建立小鼠ASPP2敲低H22细胞皮下移植瘤模型,游标卡尺法观察肿瘤体积大小,采用活体激光共聚焦观察肿瘤血管生成情况,采用Western Blot法观察肿瘤组织VEGF的表达。结果：双酶切、菌落PCR和测序鉴定结果表示各重组质粒构建成功;各重组质粒经慢病毒包装后,测定显示Y18421、Y18422、Y18423和GL427NC2慢病毒质粒的滴度分别为3.40×10⁸ TU/mL、4.08×10⁸ TU/mL、5.49×10⁸ TU/mL和1.7×10⁹ TU/mL;Y18421、Y18422、Y18423及GL427NC2慢病毒质粒转染效率分别为：86.2 %、69.6 %、60.8 %和76.9 %。与GL427NC2 H22细胞相比,Y18421 H22细胞的ASPP2 mRNA及蛋白的表达明显降低（P<0.01,P<0.05）;Y18421细胞在培养24,48,72 h后增殖速率显著增加（P<0.0001,P<0.001,P<0.01）;Y18421细胞及上清的VEGF表达显著升高（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。与GL427NC2 细胞移植瘤相比,Y18421细胞移植瘤体积明显增大（P<0.05）,总血管长度显著增加（P<0.05）,VEGF蛋白的表达明显上调（P<0.05）。结论：小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系构建成功,ASPP2敲低可能通过上调VEGF的表达促进小鼠H22细胞移植瘤血管生成。     

p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学研究

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学改变.方法分别选取2、6、12、18、24月龄的SPF级p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21+/+野生型小鼠,剖检进行大体观察,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行组织学HE染色及电镜超微结构观察.结果 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏大体、光镜和电镜下均有明显病理改变.随着月龄的增加,肝脏色暗质硬,表面有结节和肿瘤形成;光镜下,肝细胞浊肿,炎症细胞浸润,脂肪变性,点状、灶状和碎屑状坏死,非典型增生,肝细胞癌.癌细胞分化良好,类似肝细胞,形成索状和腺泡状结构.癌细胞核深染,具核分裂像.电镜下,癌细胞核变形,核膜曲折凹陷,线粒体肿胀,数目增多,嵴减少.4例18月龄转基因小鼠发生肝细胞癌(4/10),6例24月龄的转基因小鼠发生肝细胞癌(6/10),其中2例发现远处转移.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏出现明显病理损害,18月龄小鼠开始发展成高分化的肝细胞癌,高龄小鼠形成的肝细胞癌能够转移.