神经干细胞移植对脑损伤大鼠整合素表达的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）移植对大鼠创伤性脑损伤（TBI）整合素（integrin）表达的影响。方法从E14大鼠胚胎分离NSCs,进行原代培养及传代培养;对NSCs进行诱导分化;采用免疫细胞化学技术对NSCs和其分化为神经元的表型进行鉴定。采用改良的Feeney法制备创伤性脑损伤模型。利用脑立体定位仪和微量注射泵进行NSCs脑内移植。采用免疫组织化学技术、免疫印迹技术和RT—PCR技术检测在移植后不同时间脑组织损伤区整合素的表达。结果在培养基中,NSCs呈球团状悬浮生长,Nestin表达阳性。用含10％胎牛血清的培养基对NSCs进行体外诱导分化后第2d,多数细胞伸出突起,以后突起逐渐延长,分支增加。分化后第5d,部分细胞呈βⅢ-微管蛋白阳性。整合素阳性产物主要表达于细胞膜,呈棕黄色。在对照组及移植组均可见阳性细胞表达。在不同时间点,NSCs移植组移植点及其周围脑组织中整合素的mRNA表达均显著高于对照组（P〈O．01）。整合素的蛋白表达结果和tuRNA表达结果相一致。结论移植NSCs至TBI大鼠损伤脑组织,在移植点周围脑组织中整合素的表达显著增加。     

在大鼠创伤性脑损伤模型中神经干细胞移植对突触素表达的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）移植对创伤性脑损伤（TBI）模型大鼠感觉运动功能的恢复作用及其对损伤脑组织中突触素（SYP）表达的影响。方法体外培养大鼠胚胎皮质NSCs;采用Feeney法制备TBI模型,于造模后72h,移植组采用PKH26荧光示踪剂标记的NSCs直接移植于脑损伤区,对照组以等量生理盐水代替NSCs;分别于移植后不同时间点,采用Gridwalk和Latency试验检测TBI大鼠的感觉运动功能;荧光显微镜下计数移植细胞的存活数量;采用免疫印迹和RT-PCR技术检测脑损伤区及周围组织中SYP的表达。结果 NSCs移植大鼠前、后肢功能分别在移植后第2w和4w恢复至手术前水平,而直到第8w,对照组大鼠后肢功能和通过平板移动时间与NSCs移植组和基线比较仍有显著性差异（P〈0.05）。移植的NSCs随移植时间延长存活数量减少,移植后第4w和8w的存活数分别为6.3%±1.0%和4.1%±0.9%。在移植后的8w期间,移植组脑损伤区及周围组织中SYP的表达均明显高于对照组（P〈0.05）。结论移植的NSCs在TBI脑内能够存活,并明显改善了TBI大鼠对侧肢体的感觉运动功能;NSCs移植促进了脑损伤区及周围组织中SYP的表达,这可能是NSCs移植促进功能恢复的机理之一。     

神经干细胞移植研究进展

神经干细胞是指一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,能分化成为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等众多神经细胞。成年哺乳动物内源性神经再生能力有限,无法弥补因神经疾病而导致的神经细胞缺失,因而,人们开始寻求外源性神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的可能,在动物模型上开展了大量研究,并建立了多种移植方法。该文就神经干细胞的特性、来源、移植方式、在中枢神经系统疾病中的实验研究进展等作一综述。     

神经干细胞移植的临床研究进展

神经系统损伤会导致脑内神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的扩增以实现自我修复功能,而通过外源细胞移植的方式来加速这一进程,可能是一种更有效的治疗手段。当前,神经干细胞临床研究所面临的主要问题是如何评价细胞在移植后的行为和功能。该文综述了近几年使用神经干细胞移植治疗几种主要神经系统疾病的临床研究成果,并着重关注了干细胞移植后的示踪研究。     

SNAP-25在大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织中的表达研究

目的:观察蛛网膜下腔出血(SAH)后突触小体相关蛋白(SNAP-25)在大鼠脑组织中的表达变化.方法:42只成年健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、对照组、SAH后1、3、5、7、14天共7组,经大鼠自体股动脉(尾动脉)非肝素化动脉血注入视交叉池致蛛网膜下腔出血模型.蛛网膜下腔出血后1、3、5、7、14天后处死大鼠,取颞叶皮层、海马、小脑做标本,Western blot及免疫组化测定SNAP-25,采用SPSS16.0软件分析.结果:与正常组相比,对照组无明显差异(P＞0.05);SAH组中SAH后1天的SNAP-25蛋白水平降低明显(P＜0.05);SAH后3天蛋白水平达到最低值(P＜0.01);SAH后5、7天的SNAP-2蛋白水平虽降低但呈逐渐上升趋势(P＜0.05);SAH后14天的SNAP-2蛋白水平与正常组相比无明显差异(P＞0.05).结论:SNAP-2在SAH后72小时明显下降,后逐渐上升,至14天时基本恢复正常.     

大鼠胚胎神经干细胞纹状体内移植后特性

观察大鼠胚胎神经干细胞移植入成年大鼠纹状体后的存活、迁移和分化状况。自14天胎鼠脑室下区分离获得神经干细胞,利用无血清培养基培养扩增并进行鉴定。经4～5代的扩增后,以BrdU标记的神经干细胞通过脑立体定位注射移植入成年大鼠纹状体内,然后分别于移植后2周、4周、6周和8周时做脑冰冻切片,通过免疫组织化学和免疫荧光方法检测移植细胞的数量、定位和分化情况。8周后移植细胞的检出率约16%;移植细胞向周围宿主组织有广泛的迁移表现,尤以沿着白质束向头尾方向的迁移最为显著,最远向后侧达到内囊;纹状体中移植细胞主要分化为神经元和星形胶质细胞。星形胶质细胞数量最多,主要位于移植区与宿主组织临界部位,而神经元处于移植区中央。培养的大鼠胚胎神经干细胞可以作为移植替代治疗神经退行性疾病研究的供体细胞源,而移植中的迁移现象值得注意。     

大鼠纹状体内移植神经干细胞的迁移分化行为

本文分离培养胎鼠脑室下带区(SVZ)神经干细胞,经含绿色荧光蛋白基因(GFP)的2型重组腺相关病毒感染,获得具有GFP标记的神经干细胞。标记后的细胞移植到成年SD大鼠纹状体内。分别在移植后45天、90天、120天时,取移植大鼠全脑进行矢状连续冰冻切片观察。结果显示,在各时间段,移植位点始终能检测到标记细胞,但有相当数量的细胞远离移植位点向周围迁移。移植后45天,细胞迁移出现明显的方向性、迁移细胞成链式排列。移植后120天,明显观察到两条迁移路线:一条沿弧形路线向背后侧迁移到达胼胝体下缘;另一条向腹后侧迁移到达黑质,并有细胞绕过或穿过黑质到达大脑底端。免疫组织化学分析显示,迁移细胞呈现β-tubulinⅢ阳性。     

胚胎神经干细胞移植及胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤的修复作用

将胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植至成年大鼠损伤的脊髓,观察移植后NSCs的存活、迁移以及损伤后的功能恢复。实验结果显示：动物NSCs移植4周后,斜板实验平均角度和运动评分结果比对照组均有明显增高(P＜0．05),而脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)处的空洞面积显著减小(P＜0．05);在NSCs中加入胶质细胞源性的神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)后,上述改变更加显著。移植后的NSCs不仅能存活,而且向损伤的头端和尾端迁移达3mm之远。这些结果表明,移植的NSCs不仅可以存活、迁移,还可减小SCI空洞面积,促进动物神经功能的恢复;此外,我们的结果还表明GDNF对SCI功能恢复有促进作用。     

神经干细胞脑内移植后的存活、迁移和分化

从胚胎或成体大鼠脑组织、人胚脑组织均能分离到神经干细胞 ,将它们进行体外原代培养扩增或永生化后植入脑内 ,均能观察到其在脑内的迁移和分化现象。其分化能力主要取决于移植部位的脑内微环境 ,但这种影响作用是相对的。同时 ,体外培养环境如培养时间和细胞融合程度、维甲酸类诱导分化剂处理、NGF转导处理再移植或与嗜铬细胞 (分泌NGF)共移植等 ,也能决定神经干细胞脑内移植后向神经元方向分化的能力。神经干细胞移植为中枢神经系统功能重建和神经再生带来新的希望。     

人神经干细胞移植改善衰老大脑的认知功能

神经干细胞移植治疗神经退行性疾病代表了一种新的研究方向。Ｑｕ等把神经球状态的未分化人神经干细胞 (ＨＮＳＣｓ)注射到大鼠侧室。 30天后 ,发现移植的ＨＮＳＣｓ分化成神经细胞和星形胶质细胞 ,这些细胞以非常有序的模式迁移到海马和皮层部位。形态学显示ＢｒｄＵ标记阳性的细胞沿侧脑室壁分布 ,有一些细胞则直接迁移到脑室内壁 ,而且与宿主脑建立了功能性联接。组织化学进一步证实 ,在大脑皮层ＨＮＳＣｓ来源的 βＩＩＩ ｔｕｂｕｌｉｎ阳性细胞长出朝向皮层边缘的树突 ,而在海马这些细胞表现出多重突起和分支 ,星形胶质细胞着色明显的…     

社区综合干预对老年阿尔茨海默症患者的康复效果

目的:探讨社区综合干预对老年阿尔茨海默症患者的康复效果。方法:选择本社区管理的50例阿尔茨海默症患者,随机分为对照组和研究组,每组25例。对照组患者采用常规模式进行康复训练,研究组患者在此基础上加以综合干预。观察并比较两组患者干预前后的精神症状评分(PANSS)、生活质量评分(QQL-100)、康复效果评分(MRSS)、智力评分(MMSE)以及记忆力评分(IMCT)等。结果 :两组患者接受干预前的各项指标无显著性差异(P>0.05)。与干预前比较,两组患者干预后的PANSS、QQL-100、MRSS、MMSE及IMCT均获得不同程度改善,且研究组患者显著优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 :社区综合干预可改善老年阿尔茨海默症患者的生存质量,促进康复效果,值得推广。     

诱导型多能干细胞iPSc研究现状及其移植治疗帕金森综合症应用前景

诱导多能干细胞(i PS细胞)在小鼠和人上的成功获取,使干细胞领域的研究进入了一个崭新的时代。干细胞研究是再生医学的重要组成部分,研究干细胞的最终目的是应用干细胞治疗疾病,其在疾病模型建立、药物筛选、细胞移植等方面具有极大的应用潜力。i PSCs是由体细胞诱导分化而成的"多能细胞",具备和胚胎干细胞类似的功能,既解决了ESCs的伦理障碍,又为ESCs的获得提供了一条全新的途径,具有重要的理论和应用价值。i PS细胞不仅打破了道德理论的束缚,而且在再生医学、组织工程和药物发现及评价等方面具有积极的价值。神经系统遗传性疾病发病率居各系统遗传病之首,但其发病的分子机制仍不完全清楚,运用体细胞重编程技术建立的疾病特异性诱导多能干细胞模型将有助于揭示神经系统遗传性疾病的发病机理。近几年i PS细胞最新研究成果表明,利用疾病患者i PS细胞模型已逐渐应用于帕金森氏病、老年性痴呆症、脊髓侧索硬化症、脊髓肌肉萎缩症及舞蹈症等5种常见神经性退行性疾病发病机理的研究。本文主要对i PSc的发展历程,避免病毒基因干扰诱导i PS细胞进行的优化,以及干细胞尤其是i PS细胞移植治疗帕金森病等神经系统疾病的现状及应用前景进行系统阐述与论证。     

多奈哌齐治疗阿尔兹海默症患者的临床剂量使用探讨

目的:评价多奈哌齐治疗阿尔兹海默症(AD)的疗效及疗效与用药剂量的关系,探讨检测血清中胰岛素样生长因子-I(IGF-I)来指导治疗剂量的可行性。方法:87例轻中度的AD患者,患者使用5 mg/d多奈哌齐疗效不佳。在增加剂量之前,根据血清胰岛素样生长因子-I(IGF-I)水平和简易智力状态检查表(MMSE)得分之间的一致性,将患者分为3组。A组:n=27,IGF-I≤99ng/m L,MMSE≤37;B组:n=33,IGF-I≤99 ng/m L,MMSE18;C组:n=27,IGF-I99 ng/m L,MMSE18。A、B组中,血清IGF-I水平显著低于C组。试验开始后将多奈哌齐的剂量从5 mg/d增加到10 mg/d,服用12周后,观察血清IGF-I水平同MMSE和阿尔兹海默症评定量表(ADAS)得分的相关性及三组患者的临床改善情况。结果:血清IGF-I水平同认知功能有明显相关性。IGF-I同MMSE正相关(r=0.478,P=0.036),IGF-I同ADAS得分负相关(r=-0.464,P=0.029)。增加多奈哌齐(10 mg/d)剂量治疗后,只有A组患者MMSE得到显著改善。A组患者对治疗的敏感性显著高于B、C组患者。结论:血清中IGF-I水平和MMSE分值可以做为一种标志物,判断对低剂量多奈哌齐(5 mg/d)无效的轻中度AD患者,能否采用高剂量多奈哌齐(10 mg/d)进行治疗。     

阿尔茨海默病运动治疗研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种神经退行性疾病,目前对其发病机制尚未完全阐明,治疗效果也不佳。最近不少研究者根据运动对人体,特别是对脑的益处,提出运动治疗AD的可能。本文综述了运动治疗AD的研究进展及其可能机制,展望其可能的治疗前景。     

基于BP神经网络和RBF神经网络预测老年痴呆症疾病进展的对比研究

目的:比较反向传播算法(BP)神经网络和径向基函数(RBF)神经网络预测老年痴呆症疾病进展的效果。方法:以老年痴呆症随访数据为研究对象,以性别、年龄、受教育程度、有无高血压、有无高胆固醇、有无心脏病、有无中风史、有无家族史8个指标作为输入变量,以五年随访的MMSE差值为输出变量,构建基于BP神经网络和RBF神经网络的老年痴呆症疾病进展预测模型。结果:与BP神经网络模型相比,RBF神经网络预测的结果更好,能够有效地预测老年痴呆症疾病进展。结论:神经网络模型将老年痴呆症疾病进展预测问题转化为随访数据中相关测量指标与MMSE差值的非线性问题,为复杂的老年痴呆症疾病进展预测提供了新思路。     

Differential Expression of SNAP-25 Isoforms and SNAP-23 in the Adrenal Gland

Abstract : In the rat adrenal gland, we previously observed that SNAP-25 is not restricted to the plasmalemma in noradrenergic cells as it is in adrenergic cells, and hypothesized that SNAP-25 isoform expression is different in the two phenotypes. Expression of SNAP-25 isoforms and SNAP-23 was examined by immunoblotting, immunofluorescence, and RT-PCR. Amplifications of SNAP-25 mRNAs were combined with Southern hybridization, restriction enzyme analysis, and sequencing of cloned PCR products to compare SNAP-25 isoform expression in rat and bovine adrenal glands. SNAP-25 and SNAP-23 mRNA and protein are expressed in the glands ; SNAP-23 is enriched in the adrenal cortex, whereas SNAP-25 is restricted to the adrenal medulla. Furthermore, high levels of SNAP-25 and low levels of SNAP-23 are observed in the PC12 cells, whereas both SNAP-25 and SNAP-23 are expressed in adrenal medullary cultures. In all extracts, the SNAP-23 mRNA corresponded to SNAP-23a. SNAP-25a is the major form expressed in rat adrenal glands (75%), as it is in PC12 cells (80%), but both SNAP-25a and SNAP-25b (40% vs. 60%) are expressed in bovine adrenal medulla in situ and in culture. In addition, an enriched population of adrenergic cells (93%) expressed a higher level of SNAP-25b (70%), suggesting that this isoform may not be restricted to fast neurotransmission.     

磁共振技术在轻度认知障碍与阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是当今老年人最常见的一种原发性神经退行性疾病。其主要病理学特征表现为神经元的脱失、神经纤维缠结及老年斑形成。轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)被认为是AD及其他老年痴呆症的前驱阶段,可进一步转化成AD,且MCI与AD有着相似的病理变化。随着MCI和AD患病数的逐年增加,其给患者家属及社会增添了巨大负担,因此,对MCI和AD作出早期诊断变得尤为重要。然而,MCI和AD早期的临床表现并不突出,且实验室检查也缺乏足够的特异性,当临床医生做出明确诊断时,多数患者已处于AD的中晚期。近年来,随着磁共振技术的不断发展,多种磁共振技术已广泛地应用于MCI和AD的研究中,并为MCI及AD的早期诊断提供了重要的影像学依据。本文分别从结构性磁共振(s MRI)、静息态f MRI、磁共振弥散张量成像(DTI)、磁共振波谱成像(MRS)、磁敏感加权成像(SWI)及MRI分子影像几个方面,阐述多种磁共振技术在MCI和AD研究中的进展。     

重度牙周炎对阿尔茨海默病模型大鼠肠道菌群及神经炎症因子表达的影响

摘要 目的：探讨重度牙周炎对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠肠道菌群及神经炎症因子表达的影响。方法：将SD大鼠随机平分为空白对照组（NC组）、牙周炎组（P组）、AD组、P+AD组,每组10只大鼠。NC组不做任何处理,P组和AD组大鼠分别构建重度牙周炎模型和AD模型,P+AD组同时构建重度牙周炎模型和AD模型。8周后,采用Morris水迷宫实验观察大鼠的空间学习和记忆能力;酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清炎性因子：白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素10（IL-10）水平;苏木精-伊红（HE）染色检测海马组织病理变化;粪便进行短链脂肪酸（SCFAs）测序及16S rRNA基因测序。结果：NC组和P组大鼠神经元排列整齐且紧凑,没有明显的细胞空泡和坏死,AD组和P+AD组海马组织中观察到神经元变性和坏死,海马区锥体细胞排列松散,空泡化。与NC组相比较,AD组逃逸潜伏期、IL-1β、TNF-α水平、拟杆菌门、变形菌门、链球菌属、普雷沃菌属、大肠杆菌志贺氏菌属的相对丰度显著增加（P<0.05）,停滞时间、穿越平台次数、IL-10水平、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐的含量及Shannon、Simpson、Chao1指数、厚壁菌门、乳酸杆菌属的相对丰度显著减少（P<0.05）,而NC组与P组以上指标对比差异不显著（P＞0.05）;与AD组、P组相比,P+AD组逃逸潜伏期、IL-1β、TNF-α水平、拟杆菌门、变形菌门、链球菌属、普雷沃菌属、大肠杆菌志贺氏菌属的相对丰度显著增加（P<0.05）,停滞时间、穿越平台次数、IL-10水平、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐的含量及Shannon、Simpson、Chao1指数、厚壁菌门、乳酸杆菌属的相对丰度显著减少（P<0.05）。结论：重度牙周炎可促进AD大鼠肠道菌群紊乱及神经炎症因子表达。     

阿尔茨海默病患者红细胞膜蛋白表达的变化

目的:探讨早发性和迟发性阿尔茨海默病(AD)患者红细胞(RBC)膜蛋白表达的变化。方法:选取2016年1月至2018年1月经青海省人民医院确诊为AD的患者40例,根据年龄将AD患者分为迟发性AD患者(年龄≥65岁)23例和早发性AD患者(年龄65岁)17例。选取同期同医院19名年龄≥65岁的健康体检者为迟发性AD对照组,16名年龄65岁的健康体检者为早发性AD对照组。采用流式细胞术检测全血样本中葡萄糖转运蛋白1 (glucose transporter1, Glut1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1, ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒超家族G成员2(ATP-binding cassette super-family G member 2,ABCG2)和三磷酸腺苷结合盒超家族B成员6 (ATP-binding cassette sub-family B member 6, ABCB6)等转运蛋白以及胰岛素受体(insulin receptor, INSR)、质膜钙泵(plasma membrane Ca2+ATPase, PMCA)等这些RBC膜蛋白的表达。结果:与同年龄段健康体检者对比,早发性AD患者RBC膜Glut1和INSR的表达水平显著增加(P均0.05),而ABCA1、ABCG2、PMCA和ABCB6表达无显著差异。与同年龄段健康体检者对比,迟发性AD患者RBC膜Glut1、INSR、ABCA1和ABCG2的表达显著增加(P均0.05),而PMCA和ABCB6表达无显著差异。结论:RBC膜Glut1、INSR、ABCA1和ABCG2蛋白表达的检测可能可作为AD病程诊断的新的参考标记物。     

星形胶质细胞在阿尔茨海默病中的功能变化及分子机制

星形胶质细胞在脑内数量最多,分布最广,对神经元有营养支持的作用,并且能够调控神经元的活性。越来越多的证据表明星形胶质细胞激活参与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生和发展。在AD病理情况下,星形胶质细胞在多种因子如β淀粉样蛋白(beta-amyloid,Aβ)和促炎细胞因子的作用下被激活,激活的星形胶质细胞进一步释放一氧化氮(Nitric oxide,NO)和多种炎性因子增强炎症级联反应。功能失常的星形胶质细胞会促进Aβ的产生,减弱对Aβ的摄取和清除,导致Aβ聚集沉积形成老年斑。激活的星形胶质细胞释放的炎症因子还能显著增加神经元内tau蛋白的异常过度磷酸化,产生神经纤维缠结。本文对星形胶质细胞在AD中参与神经变性的功能变化和分子机制进行总结,为星形胶质细胞作为靶点预防及治疗AD提供一定的理论依据。