一次淀粉凝胶电泳同时测定猪六种血清蛋白质多态性的简便方法

自从Smithies1955年发明淀粉凝胶电泳分离技术以来,国外已广泛应用此技术研究血清蛋白、乳蛋白、卵清蛋白和同功酶的多态性。而且在方法上不断改进,一次淀粉凝胶电泳所能测定的蛋白质种数也不断增加,由最初的一两种蛋白质增加到现在的五种蛋白质。我国在这方面的研究起步较晚。一些学者发现国产马铃薯淀粉用作凝胶电泳支持物效果不好,而进口水解淀粉价格昂贵,大量使用受到限制。为了解决这个问题,作者参考有关文献资料,结合自己的实验体会加以改进,建立了用国产马铃薯淀粉,一次淀粉凝胶电泳同时测定猪转铁蛋白(Tf)、血液结合素(Hpx)、前白蛋白(Pa)、后自蛋白(Po)、铜蓝蛋白(Cp)、淀粉酶(Am)、多态性的简便方法。     

用亲和层析法分离提纯红曲霉葡萄糖淀粉酶的不同分子型

葡萄糖淀粉酶(产生菌为红曲霉(Monascus rubiginosus Sato)AS3.3491)是多型性酶,在聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈三条区带,相应于AS3.2199(原使用菌株)所产生的E_3、E_4和E_5。由于这三个组分性质极为接近,提纯十分困难。我们曾用DEAE一纤维素柱层析和垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法分离得到了凝胶电泳     

限制性片段凝胶电泳

DNA琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的设计有很多种。有些装置很容易用玻璃或有机玻璃制成,而且用这些简单装置可得到极好的结果(图1)。     

三种花生幼胚蛋白质提取方法比较研究

植物组织(或细胞)的蛋白质提取效率与效果直接影响蛋白质双向凝胶电泳等实验的结果。为探索建立适用于花生幼胚蛋白质(双向凝胶电泳用)提取的最佳条件,尝试了磷酸缓冲液直接提取法、改良的荔枝胚胎蛋白提取法和Trizol(附加)提取法等3种提取方法,根据蛋白提取得率、试剂成本、双向电泳图谱的质量(蛋白质斑点的丰度、分布特点)进行初步评价。结果表明,磷酸缓冲液直接提取法简单但总体效果较差,改良的荔枝胚胎蛋白提取法综合评价最好,与双向凝胶电泳条件更兼容。     

中蜂囊状幼虫病病毒核酸和多肽的研究

中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和琼脂糖凝胶电泳(AGE)分析,表明为单链RNA,易于降解;CSBV结构多肽经SDS-PAGE分析,有3个多肽,其分子量分别为27,000、29,000、39,000道尔顿。此病毒RNA和多肽与意蜂囊状幼虫病病毒(SBV)有差异。     

DGGE/TGGE技术及其在微生物分子生态学中的应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)是近些年微生物分子生态学研究中的热点技术之一。由于DGGE／TGGE技术具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点,被广泛地应用于微生物群落多样性和动态性分析。文章对DGGE／TGGE技术原理与关键环节、局限性和应用前景进行了综述。     

DIGE技术及其在植物蛋白质组学研究中的应用

双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)是一项新出现的荧光标记定量蛋白质组学技术,比经典的双向凝胶电泳(2-DE)具有更高的动力学范围和灵敏性。文章综述了DIGE蛋白质组学的基本原理、实验方法、在植物蛋白质组学研究中的应用和局限性,并对DIGE技术的应用做了展望。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的快速脱色方法

以牛血清白蛋白为材料进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶固定后,用考马斯亮蓝R-250染色后比较传统脱色液(冰乙酸-甲醇溶液)和不同盐溶液(NACL、KCL、CUCL2)的脱色效果的结果表明:PAGE和SDS-PAGE胶,0.25和0.5MOL·L-1NACL,在70℃(PAGE)、50℃(SDS-PAGE)下脱色,约2￣4H,效果好,灵敏度高,背景低。     

蝮蛇Agkistrodon halys Pallas蛇毒纤溶酶对纤维蛋白质的作用

应用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法证明蝮蛇毒纤溶酶对人体纤维蛋白原的α(A)链和β(B)链都有作用。借助酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察到人纤维蛋白原经蝮蛇毒纤溶酶水解后,产生一系列分子量大小不等的碎片X′、Y′、D′和E′。     

一种有效的DNA序列测定方法

比较了单链和双链DNA(ss和dsDNA)模板和两种不同的聚丙烯酰胺凝胶电泳对DNA序列测定的影响。结果表明:在相同的条件下,ssDNA模板明显优于dsDNA模板;缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA序列的长度在40cm长的胶上可达350nt。而一般的线性聚丙烯酰胺凝胶电泳才可测150nt。对于基因组序列分析,采用单链DNA模板和缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种有效的测定方法。     

DGGE技术在动物胃肠道微生物研究中的应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)是通过聚丙烯酰胺凝胶中变性剂浓度梯度的不同,将序列不同的DNA分开。目前,该技术已广泛应用于瘤胃微生物、肠道微生物等多样性研究。综述了变性梯度凝胶电泳技术的基本原理、优缺点及其在动物营养中的应用。     

晚疫病菌基因组SSR扩增产物两种检测方法的比较与改进

以32份马铃薯或番茄晚疫病菌基因组DNA为模板,分析了琼脂糖凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对10对SSR引物多态性检测的影响,同时比较了聚丙烯酰胺凝胶电泳两种银染法(常规银染法和快速银染法)的差异。结果显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳分离效果好,具有更高的多态性检出率,其中快速银染法与常规银染法的检出结果相同,但常规银染步骤繁琐,整个过程要用1-2h,而快速银染只需约15min,且染色背景较浅,条带清晰。聚类分析显示,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法可将供试晚疫病菌株分布于更多的聚类组,显示出更高的遗传变异度。可见,聚丙烯酰胺凝胶电泳快速银染法结合SSR分子标记技术,可有效地用于马铃薯或番茄晚疫病菌群体遗传多样性分析。     

层析聚焦法分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶及其抗血清制备和鉴定

 应用层析聚焦和Oligo(dT)-纤维素亲和层析相结合的方法,从小牛胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)。纯化的TdT聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条区带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量为24,000及26,000d的两条区带。此纯化TdT径戊二醛交联法,自身交联后免疫家兔,得到兔抗小牛TdT的单价抗血清,并进行了免疫学鉴定。     

变性梯度凝胶电泳技术在微生态学研究中应用的进展

变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术具有无需进行微生物培养、检测率高、分辨率高、重复性好等优点,现已逐渐成为微生态学研究中的强有力工具.本研究介绍了变性梯度凝胶电泳(DGGE)的基本原理和实验步骤中的系统优化,重点介绍和讨论了DGGE在微生态学研究中应用以及进展情况,并对该技术的应用前景进行了展望.     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2㎜)。在工作中,我     

简易平板聚丙烯酰胺凝胶干燥及保存装置

平板(Slab)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)与含有十二烷基磺酸钠的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是一种重要的生化技术,在蛋白质与多肽的分析鉴定上,应用十分普遍。但电泳后的凝胶脆弱易碎,难长期保存。近年来,国外已有凝胶干燥保存装置的商品,但价格较贵,效果也不很理想。在干燥过程中有时胶片会干裂,尤其是对一些含聚丙烯酰胺浓度较高(20％以上)的胶或较厚的胶片(1.5—2mm)。在工作中,我     

小鼠腹水型肝癌H22a细胞浆胞内磷蛋白磷酸酶的纯化和性质

 磷蛋白磷酸酶是磷酸化/脱磷酸化作用中重要的调节酶。本文建立了小鼠腹水型肝癌细胞胞浆内磷蛋白磷酸酶(PrP)的纯化方法。用~(32)P-酪蛋白为底物测定活力。经纯化的酶纯度提高1380倍,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳检查,只有一条泳带。用凝胶过滤法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测得该酶分子量为200,000。该酶催化~(32)P-酪蛋白脱磷酸化反应的最适pH7.2,对热不稳定。     

浙贝母根际土壤总DNA提取和纯化方法的比较

本研究通过对6种土壤总DNA提取方法(CTAB-SDS-冻融法、玻璃珠-SDS-酚氯仿抽提法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-SDS法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-溶菌酶法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-冻融法和UltraClean试剂盒法)和4种纯化方法(改进琼脂糖凝胶电泳法、2%聚乙烯吡咯烷酮-琼脂糖凝胶电泳法、PVPP层析柱法和低熔点琼脂糖电泳法)的比较,证明利用20 mmol/L EDTA(pH 7.5)预处理土壤后,利用CTAB-SDS-冻融法提取土壤总DNA并经改进琼脂糖凝胶电泳法纯化获得的浙贝母根际土壤总DNA的得率和纯度相对较高,达44.00 μg/g±2.65 μg/g土壤,可用于后续基于16S rDNA分析基础上的土壤微生物分子生态学的分析工作.     

田菁胶生物合成中的甘露糖磷酸变位酶

用 DE-52和磷酸纤维素亲和层析分离和纯化了甘露糖磷酸变位酶(PMM),非 SDS 凝胶电泳为一条带,但 SDS 凝胶电泳则有三条带,分子量为41500,66000和74000。测定了田菁(Sesbania cannabina)种子的子叶和胚乳中的甘露糖磷酸变位酶和葡萄糖磷酸变位酶(PGM)的活性,并进行了比较,讨论了两种酶的耐温性与田菁胶合成生理活动的相关性。     

红螯光壳螯虾卵黄磷蛋白的分离纯化和鉴定

采用凝胶层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对红螯光壳螯虾(Cherax quadricarinatus)卵巢中的卵黄磷蛋白进行了分离、纯化和鉴定。结果显示该虾的卵黄磷蛋白是一个分子量为369ku的多聚体,由分子量为85．4、80．6、76．6、73．7ku的四个亚基组成。染色分析表明卵黄磷蛋白为糖-磷-类胡萝卜素结合的复合蛋白。氨基酸组成分析显示天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)为主要氨基酸。