免疫胶体金法检测TGFl32，bFGF在IgAN肾组织内位点

目的 探讨TGFβ2和bFGF在IgAN肾组织内存在的位点。方法 采用免疫组织化学，胶体金标记和免疫电镜技术，对28例IgAN肾活检组织进行了TGFβ2和bFGF检测。结果 TGF岛和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内，在其它部位有极少量的分布。结论 免疫电镜技术和免疫组织化学技术联合应用，对抗原的精确定位具有重要的研究意义。TGF协和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内的生物化学意义需要进一步研究。     

免疫胶体金试剂的制备及应用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒

报道了用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的方法。实验采用１０ｎｍ胶体金标记纯化兔抗鼠ＩｇＧ制备了免疫胶体金探针试剂。用本法从戊型肝炎患者粪便提取物中检出ＨＥＶ呈球形,直径３２±５ｎｍ。此方法具有快速、灵敏、直观等特点,在ＨＥＶ生物学性质研究中,有一定的应用价值。     

一种酚氧化酶原组织定位的胶体金标记免疫电镜方法

以亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée5龄幼虫的中肠和体壁组织为材料,采用Epon812常规包埋方法,以作者实验室制备的酚氧化酶原多克隆抗体为一抗、胶体金标记的羊抗鼠IgG为二抗,采用醋酸双氧铀-柠檬酸铅双染色体系,建立一种胶体金标记的特异性强且超微结构保存较好的亚洲玉米螟幼虫体内中酚氧化酶原免疫电镜定位方法。     

胶体金免疫层析法检测猪链球菌2型的研究

目的:制备胶体金免疫层析试纸检测猪链球菌2型.方法:用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒,标记猪链球菌2型多克隆抗体,通过免疫层析作用对猪链球菌2型进行检测,并对试纸条的敏感性、特异性、稳定性进行评价.结果:每毫升胶体金最佳抗体标记量为22μg/mL,最佳包被抗体浓度为2 mg/mL,最佳BSA封闭浓度为1.5%,建立的胶体金免疫层析试纸条栓出猪链球菌2型的下限为106 CFU/mL,从检测到结果判断时间为5～15 min,与其他常见致病菌及链球菌属中15个群无交叉反应.结论:获得了检测猪链球菌2型的胶体金免疫层析试纸,该法操作简便,灵敏度高,特异性强,可用于猪链球菌的快速初筛和检测.     

TGF-βⅡ型受体在实验性IgA肾病肾小管的表达

用免疫组织化学方法研究了ＴＧＦ－βⅡ型受体在实验性ＩｇＡ肾病及正常小鼠肾内的表达。结果表明ＴＧＦ－βⅡ型受体在实验性ＩｇＡ肾病及正常小鼠肾内均有表达,但最明显的是ＩｇＡ肾病的肾小管。该结果提示ＩｇＡ肾病时,肾小管有可能在ＴＧＦ－β的作用下增加细胞外基质的合成,从而导致肾小管间质的纤维化     

TGF-βⅡ型受体mRNA及蛋白在人IgA肾病肾小管上皮的表达

为探讨转化生长因子-β（TGF-β）在人IgA肾病肾小管间质纤维化中的应用。本用原位杂交及免疫组织化学方法研究转化生长因子-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）mRNA和蛋白在肾小管上皮细胞的表达。结果表明：TGF-βRⅡmRNA定位于肾小管及集合管上皮细胞,TGF-βRⅡ蛋白定位于肾小管及集合管上皮细胞的基底面,腔面及侧面,或呈与基底膜相垂直的基底部纵纹出现于一些细胞的胞质内,肾小球系膜细胞也可见TGF-βRⅡmRNA及蛋白表达,但不如肾小管明显,以上结果提示肾小管和集合管上皮细胞的受体可与TGF-β特异性结合。TGF-β则通过自分泌作用促进小管上皮细胞合成与分泌ECM。过多的ECM在小管周围沉积;或TGF-β抑制ECM的降解,终将导致IgA肾病的肾小管间质纤维化。     

肝细胞与肝癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜比较研究

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,简称β－Ｇ）在正常人体组织匀浆和体液中含量很低,在人体细胞中β－Ｇ超微结构定位尚未见报道。采用低温包埋,胶体金标记、免疫电镜技术,进行了人体肝细胞和肝癌细胞内β－Ｇ的定位。实验结果表明,β－Ｇ定位于内质网,同时观察到肝癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数目明显多于肝细胞中金颗粒数目。这一结果可能对肝癌的期发现,早期诊断提供一种新方法     

βAmyloid蛋白在恒河猴脑组织中的形态学特点

目的观察βamyloid蛋白在不同年龄的恒河猴脑中的表达及其组织学和细胞超微结构水平的分布特点。方法分别取脑组织额叶、海马、颞叶和顶叶做免疫组化,观察βamyloid蛋白在组织学上的分布特点及与年龄的关系;选用23岁恒河猴一只,灌注后取上述部位做免疫电镜,观察βamyloid蛋白在细胞超微结构水平的分布特点。结果免疫组化染色可观察到年轻猴的神经细胞和胶质细胞中有少量的Aβ40颗粒,以额叶和海马居多。在老年猴脑中Aβ40常聚集成团状斑块。年轻猴脑细胞内未见明显的颗粒状Aβ42,而老年猴的额叶有多量的Aβ42细胞外散在斑块,神经细胞和胶质细胞内也见有Aβ42颗粒状沉积。免疫电镜可观察到Aβ40的胶体金颗粒大部分存在于老年猴神经细胞细胞质中,在细胞间质和小胶质细胞中也可见少量的胶体金颗粒,多见于额叶;标记Aβ42的胶体金颗粒也是多见于神经细胞中,在小胶质细胞中少量存在,同时在颞叶的神经纤维束中也可见Aβ42标记的胶体金颗粒。结论Aβ42是恒河猴老年斑的主要成分,并在其形成过程中起到重要作用。     

酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果观察

目的:比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果,以探讨酶联免疫法和胶体金法在检验与病理科乙肝表面抗原检测中的应用价值.方法:选择2017年1月～2019年12月我院进行胃镜检查的100例上消化道疾病患者,均在胃镜检查前检测乙肝表面抗原,对照组使用胶体金法进行检测,观察组使用酶联免疫法进行检测.比较酶联...     

膀胱移行细胞和移行细胞癌细胞内β-葡萄糖醛酸酶免疫电镜比较研究

β－葡萄糖醛酸酶（β－Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,简称β－Ｇ）在正常人体组织匀浆和体液中含量很低,本实验采用胶体金标记,免疫电镜技术,进行了人体正常移行细胞与移行细胞癌细胞内β－Ｇ定位研究,实验结果表明,β－Ｇ存在于移行细胞和移行细胞癌细胞中的内质网、溶酶体内,同时观察到癌细胞中标记β－Ｇ的金颗粒数量多于正常移行细胞中金颗粒的数量,本实验结果可能对于移行细胞癌的早期发现、早期诊断提供了新的依据。     

富亮氨酸α-2糖蛋白1在IgA肾病中高表达并与肾间质纤维化和肾功能损害呈正相关

目的观察富亮氨酸α-2糖蛋白1(leucine-richα-2 glycoprotein 1, LRG1)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)在不同纤维化程度IgA肾病肾组织中的表达,并探讨其与肾脏临床指标、组织病理的相关性。方法选取肾活检确诊为IgA肾病患者,采用HE及Masson染色检测肾间质纤维化程度,随机选取肾间质纤维化不同分级的IgA肾组织44例和正常对照肾组织15例,测定BUN、Scr、24 h尿蛋白量,并用免疫组织化学技术检测LRG1和TGF-β1的表达情况,探讨LRG1与TGF-β1、肾纤维化及肾脏功能的关系。结果随着肾脏纤维化程度加重,IgA肾病肾组织LRG1、TGF-β1表达逐渐升高, BUN、Scr、24 h尿蛋白量水平逐渐上升。IgA肾病组织LRG1水平与TGF-β1、肾间质纤维化、BUN、Scr、24h尿蛋白量呈正相关。结论 LRG1蛋白水平随着IgA肾病肾纤维化及肾功能损害的加重而逐渐升高,可能作为IgA肾病的一个损伤指标。     

细胞粘附分子在IgA肾病患者肾组织中的表达──定量免疫组织化学研究

本研究应用免疫组织化学方法及计算机图象分析系统,对４７例ＩｇＡ肾病患者肾组织中细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的变化进行了定量研究。以此进一步探讨细胞粘附分子在ＩｇＡ肾病肾脏损伤中的作用变化机理。本文的结果显示：ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１在ＩｇＡ肾病肾小球内表达均增加,且与肾小球病变程度有密切关系。肾小球病变越重,上述粘附分子在肾小球内表达越强。重度ＩｇＡ肾病患者肾小球内ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的表达最强。在伴有炎症细胞浸润的肾间质中ＩＣＡＭ－１也有存在。这一结果说明,ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１表达强度的变化与ＩｇＡ肾病的发展有密切的关系。     

基于胶体金的8-羟基-2′-脱氧鸟苷免疫层析试纸条北大核心CSCD

8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)是评价DNA氧化损伤较灵敏和稳定的生物标志物。文中采用竞争法建立一种快速、灵敏检测8-OHdG的胶体金免疫层析试纸条。将样品垫(玻璃纤维素膜)、结合垫(玻璃纤维素膜)、硝酸纤维素膜和吸水垫依此粘贴在聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)底板上,构建试纸条。通过柠檬酸钠还原三水合四氯金酸制备胶体金(gold nanoparticles,AuNPs),8-OHdG配对的抗体(antibody,Ab)包被于AuNPs的外层(Ab coated AuNPs,Ab@AuNPs)作为探针。牛血清蛋白(bovine serum protein,BSA)与8-OHdG用碳二亚胺盐酸盐偶联制备人工抗原,作为检测线的包被抗原。羊抗鼠多抗(imunoglobulin G,IgG)作为质控线的包被抗体。对试纸条的硝酸纤维素膜、上样液的配方、金标抗体喷涂量等实验参数进行了优化。结果表明,硝酸纤维素膜(nitrocellulose film,NC)膜采用CN 95,上样液的最优配方为1%BSA+3%吐温-20+3%蔗糖+0.9%NaCl溶液,最适金标抗体喷涂量为4μL。利用试纸条在可见光下检测8-OHdG,根据检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线)的显色强度对比,可初步判断尿液中8-OHdG的含量水平。并通过T线的灰度值计算尿液中的8-OHdG的浓度,检测限为2.55μg/L。该方法简单、快速且有较好的特异性,可检测人体尿液中的8-OHdG含量,以初步评价人体的健康状态。     

红腹锦鸡肾的组织结构及EGFR、TGF-β、AQP-2在肾脏中的表达

为了解红腹锦鸡肾脏的结构特征,观察表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子-β(TGF-β)、水通道蛋白-2(AQP-2)在肾脏中的表达情况,应用组织学方法及免疫组织化学方法,观察了5只红腹锦鸡肾脏的组织结构,检测了EGFR、TGF-β(TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3)、AQP-2在肾中的表达。结果表明:红腹锦鸡肾脏主要由许多肾单位、集合管和少量结缔组织组成。肾单位是肾脏功能结构的基本单位,它由一个肾小体和一个与其连接的上皮性肾小管构成。血管球由一团迂回盘曲的毛细血管丛构成,结构简单;肾小囊足细胞的突起与毛细血管内皮细胞及基膜紧密相贴,三者构成肾小体的滤过屏障;近端小管由单层立方上皮组成,上皮细胞游离面有许多微绒毛,细胞界限不明显,侧面有许多指状突起彼此交错,质膜内褶较少;远端小管上皮细胞基底面有丰富的质膜内褶;集合管上皮细胞有明细胞和暗细胞两种类型;近端小管上皮细胞呈EGFR、TGF-β免疫反应阳性,集合管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性。EGFR、TGF-β、AQP-2可能发挥着不同的功能,对肾单位的构筑、肾小管和集合管结构的稳定以及肾脏水的平衡等可能有重要的调节作用。     

2种方法在血清β2-微球蛋白检测中的效果对比

目的:探讨散射免疫法和荧光免疫层析法在血清β2-微球蛋白中的检测效果对比观察及精确度。方法:选取2016年10月-2017年8月我院收治的肝肾功能损伤患者88例,对患者分别应用散射免疫法以及荧光免疫层析法进行检测。对比两组方法血清β2-微球蛋白的检测结果、灵敏度、特异性以及精确度。结果:检测结果方面,荧光免疫分析法患者的检测率明显高于散射免疫法,漏检率明显低于散射免疫法(P0.05);荧光免疫层析法的灵敏度、特异性以及诊断符合率明显高于散射免疫法(P0.05);各项指标水平方面,患者血清β2-微球蛋白、肌酐、尿酸以及尿素等指标的水平明显高于正常水平(P0.05);精确度方面,荧光免疫层析法批间、批内的精确度明显高于散射免疫法(P0.05)。结论:对患者应用荧光免疫层析法检测血清β2-微球蛋白,有较高的检测符合率、灵敏度以及准确度,能够满足临床检测过程中的要求,进而有利于患者的诊断和治疗,临床上应当进一步推广应用。     

Smad2 与TGF-β1 基因在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:通过检测Smad2与TGF-β1基因在胰腺癌中的表达,初步探讨它们与胰腺癌临床病理的关系。方法:采用免疫组织化学pv-9000法检测50例胰腺癌组织和10例正常胰腺组织中Smad2与TGF-β1的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理的相关性。结果:Smad2与TGF-β1在胰腺癌组织中的表达水平显著高于正常胰腺组织,两组之间存在显著差异(P<0.05)。在胰腺癌组织中,Smad2与TGF-β1的表达在胰腺癌不同分期中存在显著差异(P<0.05)。结论:Smad2与TGF-β1在胰腺癌中高表达,二者联合可作为反映胰腺癌临床分期的生物学指标。     

β2-微球蛋白mRNA低表达在肝细胞癌免疫逃逸中的作用

目的：研究肝细胞癌（HCC）组织中人白细胞抗原（HIA）I类分子轻链β2-微球蛋白（β2-m）在肿瘤免疫逃逸中的作用,探讨肝硬化背景对肝癌组织内β2-m的mRNA水平的影响。方法：RT—PCR法检测40例肝癌和癌旁组织中β2-m的mRNA水平,并从不同角度进行分析。结果：肝癌组织中β2-m基因mRNA水平显著低于非癌组织,肝硬变背景下肝癌组织内β2-m的mRNA水平低于无肝硬化背景的肝癌组织。结论：肝癌组织中β2-m基因mRNA水平下调,可致肝癌细胞表面HIA—I类分子低表达,这一变化与肿瘤细胞的免疫逃逸相关;HCC病人的肝硬变背景在这一机制中可能起到了某种程度的促进作用。     

人白细胞介素2受体β(IL-2RB)基因真核表达及与JAK1的相互作用的检测北大核心

[目的]构建含人白介素2受体β(IL-2RB)基因的真核表达质粒p ENTER-IL-2RB-His,并在293T中进行真核表达,并用免疫共沉淀检测JAK1与IL-2RB在细胞内的相互作用。[方法]在Hela细胞中提取人总RNA,通过RT-PCR获得人IL-2RB的基因全长,并将其克隆至真核表达载体p ENTER-His中。经PCR克隆,双酶切、测序鉴定后,将重组质粒p ENTER-IL-2RB-His转染至293T细胞中。免疫印迹法检测不同时间点的IL2RΒ蛋白(24 h、36 h、48 h)在293T细胞中的表达,用免疫共沉淀检测JAK1和IL-2RB蛋白之间的相互作用。[结果]经PCR克隆、双酶切、测序鉴定质粒克隆正确。免疫印迹可见61 k Da的目的蛋白。共同转染JAK1和IL-2RB的质粒,免疫印迹可见分别为133 k Da和61 k Da的目的条带。[结论]成功获得IL-2RB基因全长,成功构建p ENTER-IL-2RB-His真核表达质粒,并在293T细胞中成功表达,随着时间的推移其表达量增高。免疫共沉淀可以检测到JAK1和IL-2RB两者的蛋白相互作用,这为下一步研究JAK1和IL-2RB这一对蛋白的相互作用的作用方式及作用机制奠定了基础。     

血清β2-MG、Cys-C及肾功能相关指标在肾病综合征中的水平及临床意义分析

摘要 目的：分析血清β2微球蛋白（β2-MG）、胱抑素C（Cys-C）及肾功能相关指标[24 h尿蛋白排泄率（UPE）、尿素（BUN）、肌酐（SCr）]在肾病综合征中的水平及临床意义。方法：选择我院自2019年3月至2022年3月收治的180例肾病综合征患者作为观察组,另选同期的180例健康体检者作为对照组。检测所有受试者血清β2-MG、Cys-C及肾功能相关指标;根据观察组患者治疗转归情况,分为转归组和未转归组,使用多因素Logistic回归分析血清β2-MG、Cys-C及肾功能相关指标与肾病综合征患者治疗未转归的关系,通过ROC下面积（AUC）评价血清β2-MG、Cys-C及肾功能相关指标对治疗未转归的预测效能。结果：观察组血清β2-MG、Cys-C、UPE、BUN、SCr水平均高于对照组（P＜0.05）;未转归组血清β2-MG、Cys-C、UPE、BUN、SCr水平均高于转归组（P＜0.05）;经多因素Logistic回归分析,血清β2-MG、Cys-C、UPE、BUN、SCr均是肾病综合征患者治疗未转归的独立预测因素（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血清β2-MG、Cys-C、UPE、BUN联合SCr预测肾病综合征患者治疗未转归的AUC为0.910。结论：血清β2-MG、Cys-C及肾功能相关指标与肾病综合征密切相关,联合预测患者治疗未转归的效能较好,值得临床予以重视应用。     

CysC,mALB和尿BGM联合检测在2型糖尿病早期肾损中的临床价值

目的:探讨CysC、mALB和尿BGM联合检测在2型糖尿病早期肾损中的临床价值。方法:选取2010年11月至2013年6月我院内分泌科收治的130名2型糠尿病患者,根据空腹血糖值的不同程度将其分为A、B两组,A组72例,B组58例,另选取同期在我院体检的年龄、性别等资料与之匹配的64名健康者设为C组。分别对其CysC、mALB和尿BGM进行测定,并进行对比分析。结果:通过分析可知,A组和B组的Cys C分别为(3.29±1.09)mg/L、(2.86±1.05)mg/L,相对于C组的(0.87±0.99)mg/L,均明显升高,但A组升高更加明显;A组、B组、C组的mALB分别为(37.36±4.82)mg/L、(36.55±4.31)mg/L、(6.61±3.84)mg/L,B组高于A组,C组高于A组和B组;三组的BGM中,以A组最高,为(634.15±55.24)μg/L,B组其次,为(626.92±48.18)μg/L,均高于C组的(57.12±11.75)μg/L;Cys C、mALB、BGM等阳性指标的检出率分别为76.15%、77.69%、72.31%,而Cys C、mALB、BGM联合检测的检出率为93.85%,明显高于其他单指标检测。且P0.05,差异具有统计学意义。结论:对CysC、mALB和尿BGM进行联合检测对2型糖尿病早期肾损患者具有较高的检出率,相对于单指标检测,敏感性更高。