响应面法优化土茯苓多糖除蛋白工艺

为了优化土茯苓(Smilax glabra Roxb.)多糖溶液除蛋白的工艺,采用Sevage试剂法除蛋白,在单因素实验的基础上,以多糖保留率和蛋白清除率为指标,使用响应面法对Sevage试剂法除蛋白工艺进行优化。结果显示,Sevage试剂法去除土茯苓多糖的最佳工艺为采用Sevage试剂:供试液=1:3、振摇强度8挡、振摇时间10 min、除蛋白次数5次,蛋白清除率为97.39%,多糖保留率为74.13%。优化后的除蛋白工艺重复性好,与理论值误差较小,可用于土茯苓多糖除蛋白。     

桑黄粗多糖除蛋白及抗肿瘤活性

旨在研究Sevag法除桑黄粗多糖中蛋白的最佳工艺,并通过噻唑蓝(MTT)细胞比色法测定除蛋白前后桑黄多糖的抗肿瘤活性。在单因素试验Sevag用量、氯仿与正丁醇体积比、萃取次数、震荡时间的基础上,设计正交试验,经过方差分析,确定Sevag法除桑黄粗多糖蛋白的最佳方案;并且对除蛋白后多糖与粗多糖进行体外抗肿瘤实验。Sevag法除桑黄粗多糖蛋白的最佳工艺:Sevag用量50 mL、V(氯仿)/V(正丁醇)=3、最佳萃取次数6次、最佳振荡时间20 min,在此条件下,多糖的得率为64.8%。体外细胞试验表明除蛋白后多糖与粗多糖对肿瘤细胞EC109和SiHa的抑制率没有明显差异。     

六妹羊肚菌多糖部分理化性质及抗氧化活性研究

分离纯化人工栽培的六妹羊肚菌子实体多糖,对其结构和抗氧化活性进行研究。采用水提醇沉法提取六妹羊肚菌子实体多糖(MSP),采用DE-52纤维素柱和Sephadex G-100进行多糖的分离纯化,借助HPGPC和HPLC测定多糖分子量及单糖组成。通过DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用,评估其体外抗氧化活性。构建H_2O_2介导的氧化压力损伤的PC12细胞模型,评估其基于抗氧化的神经保护作用。结果显示,六妹羊肚菌水溶性多糖平均分子量为287 588 Da,单糖组成为甘露糖,葡萄糖和半乳糖,占比约为9∶1∶6。六妹羊肚菌多糖具有优良的自由基清除活性,同时,能够通过重塑SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶系活性,缓解H_2O_2诱发的氧化压力的细胞损伤,抑制PC12细胞凋亡。涉及通路为Bax/Bcl及Caspase。六妹羊肚菌水溶性多糖具有优良的抗氧化活性,表现出一定的神经保护作用。     

芜菁中性多糖对PC12细胞氧化损伤保护作用机制的初步研究CSCD

以H_(2)O_(2)诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,研究芜菁中性多糖(neutral polysaccharide from Brassica rapa L.,BRNP)对PC12细胞氧化损伤保护及初步作用机制。采用CCK-8法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)检测H_(2)O_(2)对PC12细胞氧化损伤的保护作用;JC-1法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞线粒体膜电位的影响;Western blot法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,BRNP对PC12细胞无明显细胞毒性;H_(2)O_(2)的造模浓度和时间分别为300μmol/L、4 h;BRNP在一定程度上可减轻H_(2)O_(2)对PC12细胞的氧化损伤;BRNP可降低H_(2)O_(2)对PC12细胞线粒体膜电位的损伤;以不同剂量BRNP干预PC12细胞后,Bax、Caspase-3蛋白表达水平均有显著降低(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,BRNP能够改善H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化应激损伤及保护其细胞功能,其作用机制可能与抑制细胞内LDH生成、提高抗氧化酶活性及其凋亡蛋白表达水平有关。     

三角帆蚌多糖的微波辅助提取及脱蛋白工艺

运用微波辅助处理、热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白的方法提取制备三角帆蚌多糖。在单因素实验基础上,运用正交实验对三角帆蚌多糖微波辅助提取及Sevag法脱蛋白的工艺参数进行优化。结果显示:三角帆蚌多糖微波辅助提取的最优条件为:水料比15 mL/g、提取温度50℃、微波处理时间150 s、微波功率1080 W。在此条件下,多糖的提取得率为4.06%。三角帆蚌多糖Sevag法脱蛋白的最优参数组合为:正丁醇与氯仿体积比0.20、正丁醇-氯仿混合液用量占多糖溶液的体积百分比20%、脱蛋白振摇时间10 min、脱蛋白次数8次。在此条件下,多糖的蛋白去除率、多糖保留率分别是52.24%和65.13%。     

响应面法优化玫瑰茄粗多糖提取工艺及其抗氧化活性的研究

利用响应面法优化玫瑰茄粗多糖的提取工艺条件,测定粗多糖的抗氧化活性。按照Box-Behnken中心组合试验设计原理,以玫瑰茄粗多糖的得率为响应值,在单因素试验的基础上,进行响应面分析试验,考察料液比、提取时间和提取温度对得率的影响。玫瑰茄粗多糖最佳提取工艺条件为：料液比1∶26 (g/mL)、提取时间3.1 h、提取温度90℃,在该最优条件下所得玫瑰茄粗多糖的得率为14.41%,与预测值接近;玫瑰茄粗多糖对DPPH、羟基、超氧阴离子自由基具有一定的清除作用。研究结果为玫瑰茄粗多糖的研究、开发和利用提供了理论基础。     

响应面法优化金刷把多糖提取工艺

利用响应面法优化金刷把多糖的提取工艺。在单因素试验的基础上,选择提取温度、提取时间、料液比为自变量,以多糖提取率为响应值,进行Box-Benhnken中心组合实验设计,应用响应曲面分析方法优化提取条件,得到金刷把多糖最佳提取工艺条件如下:提取温度95℃,提取时间2.5 h,料液比1∶20 g/m L,此时金刷把多糖提取率的理论预测值为4.62%,最优条件下多糖得率的实验值为4.42%,与理论值的相对误差为4.3%。经过响应面法优化提取工艺,提高了提取率,适用于金刷把粗多糖的提取。     

贵州野生甜藤多糖的提取与脱蛋白方法研究

以贵州野生甜藤干粉为原料,通过单因素试验,再通过正交试验优化甜藤多糖提取工艺,并采用Sevag法、TCA法、Sevag-TCA法、HCl O4法进行脱蛋白方法研究。结果表明,甜藤多糖最优提取工艺为:以水为溶剂,料液比1∶50,超声功率70 W,水浴温度70℃,超声提取时间110 min,提取2次;HCl O4法脱蛋白效果最佳,经3次脱蛋白处理后蛋白脱出率为94.78%,多糖损失率为15.14%,该法用于脱除甜藤植物多糖中的蛋白质,工艺简单,成本低,具有一定应用价值。     

响应面法优化太白贝母粗多糖超声波提取工艺研究

对太白贝母粗多糖提取工艺的研究,为太白贝母的深入综合利用提供依据。采用超声波提取太白贝母粗多糖,在单因素试验基础上,利用响应面法对提取工艺参数进行优化研究。建立料液比、时间、超声温度之间的数学模型,通过典型性分析得出最优工艺条件为:提取时间为16 min,提取温度75℃,料液比为1∶15,总糖的含量为0.461%。试验表明,响应面法对太白贝母粗多糖提取条件的优化是可行的,可用于实际预测。     

药用植物三七和金银花多糖提取工艺优化与比较

以野生植物三七、金银花为材料,采用热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白制备多糖,探讨最佳提取工艺。结果表明,浸提温度和醇沉浓度对金银花多糖提取结果影响较大,其最佳工艺为100℃浸提3 h,氯仿萃取2次,70%乙醇沉淀;影响三七多糖提取的因素顺序为醇沉浓度提取时间提取次数料水比,最佳提取工艺组合为1∶20的料水比提3 h,提取3次,醇沉浓度为80%。根据正交试验结果,金银花粗多糖最高提取率为3.05%,三七粗多糖最高提取率为15.96%,云南文山三七与河南巩义产金银花相比含有较多的多糖。     

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究*

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚—硫酸法测得多糖A1糖含量为82.9%。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量Mw=142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl∶Gla∶Glc=1∶1.102∶2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

Deproteinization of gellan gum produced by Sphingomonas paucimobilis ATCC 31461

Deproteinization is a technical bottleneck in the purification of viscous water-soluble polysaccharides. The aim of this work is to provide an appropriate approach to deproteinize crude gellan gum. Several methods of deproteinization were investigated, including Sevag method, alkaline protease, papain and neutral protease. The results revealed that Sevag method had high deproteinization efficiency (87.9%), but it showed dissatisfactory recovery efficiency of gellan gum (28.6%), which made it less advisable in industrial applications. The deproteinization by alkaline protease was demonstrated in this work for the first time, indicating alkaline protease was preferred in the deproteinization of crude gellan gum with high polysaccharide recovery (89.3%) and high deproteinization efficiency (86.4%).     

酶法脱蛋白提取大枣多糖工艺的研究

讨论了从提取环磷酸腺苷后的枣汁中提取枣多糖的最佳工艺条件,包括枣汁浓缩4倍,加无水乙醇调枣汁中乙醇体积分数为60%,醇沉5 h;木瓜蛋白酶脱蛋白效果最佳,木瓜蛋白酶液与枣汁的体积比为0.4∶ 1,温度60℃、pH5.0,酶解90 min,蛋白脱除率可达91.8%;AB-8树脂脱色,脱色率为73.64%,多糖得率为94.4%.红外光谱显示,提取的多糖与常规方法提取的多糖成分相同.     

雪松松针多糖超声波酶法提取及其抗氧化性

为优化雪松松针多糖超声波酶法的提取工艺,并研究多糖结构及其抗氧化性。通过响应面法分析确定最佳提取参数为:3. 0 g松针粉末,液料比20∶1(m L∶g),提取温度80℃,超声功率560 W,超声时间47 min,纤维素酶用量12 FPU/g原料,提取两次,多糖得率高达10. 39%。采用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振光谱等对松针多糖进行了结构表征,松针多糖以β-糖苷键为主要连接方式,并由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和半乳糖等单糖组成。体外抗氧化性研究结果表明:松针粗多糖对羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力远高于纯化多糖,呈现出良好的量效关系,粗多糖对·OH和DPPH·的半抑制浓度IC50分别为0. 47 g/L和0. 076 g/L。     

超声波及脱蛋白处理对猴头菌子实体多糖提取效果的影响

本研究以猴头菌子实体为供试材料,在采用水提醇沉法进行多糖提取的过程中,系统研究了超声波和脱蛋白处理两个关键工艺环节对多糖提取效果的影响。研究结果表明：采用超声波辅助处理可提高猴头菌多糖提取率,降低多糖的纯度,使部分由蒸馏水洗脱获得的HEFP-α组分与全部0.1mol/L NaCl洗脱获得的HEFP-β组分经Sephacryl-S400洗脱后的曲线的小峰面积增加,也使主峰处的吸光值出现偏移。3种脱蛋白方法中,复合法对蛋白的除去效率最高,但多糖的保留率最低;亚铁氰化钾-乙酸锌法操作简便且蛋白除去率与多糖保留率均较高,但会使HEFP-β-2组分的含量和回收率降低;Sevage法蛋白脱除效率最低,多糖组分的保留率相对较高,且柱洗脱后发现经Sephacryl-S400凝胶柱分离后获得的主峰整体峰值较高,该方法较为适合多糖活性组分未知时的蛋白脱除。这一研究结果将会为该类大型真菌子实体的大分子生物活性物质的提取以及相关产品的开发提供重要的参考依据。     

Purification of polysaccharides from a biofilm matrix by selective precipitation of proteins

The objective was to obtain the polysaccharide fraction present in the extracted polymeric matrix of a biofilm by differential precipitation of the protein content. This was tried by pH adjustment and by addition of trichloroacetic acid (TCA). The best yield of protein precipitation was with 20% (w/v) TCA, with more than 97% of the protein removed and without affecting the amount of polysaccharides in solution.     

皱皮木瓜多糖的分离、纯化及抗氧化活性研究

为了研究木瓜多糖的提取、分离、纯化与抗氧化活性,采用水提醇沉法提取皱皮木瓜中的多糖,得多糖Ⅰ;利用Sevag法除去多糖中的蛋白质后得多糖Ⅱ;以30%H_2O_2脱除色素后再次醇沉得到精制多糖Ⅲ;透析除去小分子后利用AB-8大孔树脂进行分离以水、30%、50%、70%和95%乙醇洗脱,其中水洗脱部分多糖为Ⅳ。用苯酚-硫酸法测定多糖含量。多糖Ⅰ得率为9.83%,多糖含量(纯度,下同)为64.45%;脱蛋白后多糖Ⅱ中多糖含量为78.23%;经脱色后多糖Ⅲ含量达88.39%;大孔树脂水洗脱部分多糖Ⅳ含量为89.74%。以DPPH(2,2-二苯基-1-苦肼基)清除率和Fe~(3+)还原力方法测定木瓜多糖的抗氧化活性,木瓜多糖均体现出一定的抗氧化作用,呈浓度依赖性增强,其中多糖Ⅰ、Ⅱ表现出更好的作用。