转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫几种主要酶系活性的影响

研究了表达Cry1Ab杀虫蛋白的转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis (uenée) 幼虫解毒酶、保护酶和中肠蛋白酶活性的影响,测定比较了取食转Bt基因玉米后幼虫体内α-乙酸萘酯酶、乙酰胆碱酯酶、谷胱甘肽S-转移酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活力。结果表明,取食转Bt基因玉米48 h后亚洲玉米螟幼虫体内的α-乙酸萘酯酶、谷胱甘肽S转移酶活力明显低于对照;而乙酰胆碱酯酶活力显著高于对照,在取食48 h、60 h和72 h的活力分别是对照的2.00、1.50和2.50倍。保护酶系、中肠总蛋白酶、弱碱性类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性在取食48 h后明显受到抑制;但强碱性类胰蛋白酶的活性显著高于对照,取食48 h、60 h和72 h的活力分别是对照的4.00、1.67和1.33倍。乙酰胆碱酯酶和强碱性类胰蛋白酶可能与亚洲玉米螟对Bt的抗性有关。     

抑制剂存在下不同种群烟粉虱乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布及其与抗药性的关系

为了探讨烟粉虱Bemisia tabaci不同种群个体乙酰胆碱酯酶敏感性差异及其与抗药性的关系, 我们选用室内饲养的烟粉虱SUD S敏感品系和6个田间抗性种群, 采用酶标板酶动力学法测定了各品系 (种群）乙酰胆碱酯酶对抑制剂的敏感性反应以及抑制剂存在时各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布。结果表明: 在抑制剂浓度为300 μmol/L时, 敏感品系乙酰胆碱酯酶的活性基本上被完全抑制, 可以明显地区分敏感品系与田间抗性种群。在抑制剂浓度为2 000 μmol/L时, 各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布差异明显, 其中ZZ-R种群和FZ-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布相似, 大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在1.00~1.80 mOD/min之间; SM-R种群和ND-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布也相似, 大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在0.40~1.00 mOD/min之间; LY-R和NP-R种群大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分别分布在1.00~1.60 mOD/min和0.80~1.20 mOD/min之间。各抗性种群乙酰胆碱酯酶高残余活性 (大于1.00 mOD/min）个体频率与对敌敌畏的抗性水平之间具有明显相关性, 相关系数为0.86 (P<0.05）。考虑到乙酰胆碱酯酶对抑制剂作用不敏感是一些昆虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性的重要机制之一, 建议可以将乙酰胆碱酯酶对敌敌畏的敏感性作为烟粉虱抗药性生化检测的一个参考指标。     

响应面法优化AB-8大孔树脂纯化玉米须总黄酮的工艺

本研究采用超声波法提取玉米须总黄酮,继而研究AB-8大孔树脂纯化玉米须总黄酮的最佳工艺。以动态吸附率为评价指标,考察上样液流速、上样液浓度、上样液pH对玉米须总黄酮动态吸附的影响,以动态洗脱率为评价指标,考察洗脱液浓度、洗脱液用量对玉米须总黄酮动态解吸附的影响。在AB-8大孔树脂单因素试验的基础上,应用响应面法优化了玉米须总黄酮的纯化工艺条件。研究表明,最佳纯化工艺条件:上样液浓度0.03 mg/mL、上样液流速0.50 mL/min、洗脱液浓度91%。在此工艺条件下,玉米须总黄酮洗脱率为87.90%,与理论值基本吻合。该工艺稳定、可行,可用于玉米须总黄酮的分离纯化。     

辣木叶总黄酮响应面法微波萃取工艺优化及其体外降糖效果观察

利用响应面法优化微波萃取辣木叶总黄酮工艺。选取乙醇浓度、微波功率、提取时间、液料比为影响因素,总黄酮得率为评价指标。在单因素实验的基础上,通过4因素3水平Box-Behnken中心组合试验建立黄酮得率的二次多项式回归方程,研究以上因素对总黄酮得率的影响。结果表明最佳提取工艺条件为:乙醇浓度58%,微波功率397 W,提取时间8 min,液料比59∶1,该条件下,总黄酮得率为3.45%,与预期基本相符。采用Hep G2细胞研究辣木叶总黄酮体外降糖效果,检测该细胞24 h的葡萄糖摄取量。结果表明:在高糖环境下,辣木叶总黄酮能促进Hep G2细胞对葡萄糖的消耗;相同质量浓度下,经微波萃取的总黄酮降糖活性较回流提取得到的强。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法酶法超声波法乙醇/硫酸铵双水相萃取法水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法酶解法超声法水提法乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

新疆棉铃虫对溴氰菊酯和硫丹 抗性的生化机理研究

通过生物测定和生化分析研究了新疆棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)敏感种群和室内筛选获得的抗性种群对硫丹和溴氰菊酯的反应及其α-乙酸萘酯酶和乙酰胆碱酯酶的动态活性反应。结果表明,筛选后新疆棉铃虫对硫丹和溴氰菊酯产生的抗性倍数分别为13倍和66倍。两个抗性种群的α-乙酸萘酯酶和乙酰胆碱酯酶比活力均高于敏感种群。相应杀虫剂预处理后,α-乙酸萘酯酶酶活力受到抑制。抗性种群的α-乙酸萘酯酶对底物的亲和力高于敏感种群,但Vmax低于敏感种群。抗性种群的乙酰胆碱酯酶对底物的亲和力显著低于敏感种群,Vmax比敏感种群高。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,两个抗性种群都有一条特异性酶带,其迁移率相近,且均可被甲基对氧磷抑制。因此推测,α-乙酸萘酯酶参与了新疆棉铃虫对硫丹和溴氰菊酯的抗性,具有代谢和阻断作用;乙酰胆碱酯酶对抗性的产生也起到了重要作用。     

锁阳原花青素提取方法及抗氧化和抗糖基化研究北大核心CSCD

为比较不同提取方法对锁阳原花青素得率、抗氧化性和抗糖基化活性的影响,本研究分别采用超声波法、乙醇/硫酸铵双水相萃取法、水提法、微波法和酶解法提取锁阳中原花青素,用香草醛-浓盐酸法测定原花青素含量。采用DPPH·清除能力和·OH清除能力衡量其体外抗氧化能力,采用牛血清白蛋白(BSA)-葡萄糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙醛酸(MGO)模拟反应体系评价原花青素抗糖基化活性。结果表明:微波法提取得率最高,可达15. 00%,提取时间短,仅为19 min。不同提取方法对DPPH·清除能力依次为微波法>酶法>超声波法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法>水提法;不同提取方法对·OH清除能力依次为:微波法>酶解法>超声法>水提法>乙醇/硫酸铵双水相萃取法。微波法制备原花青素在牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应中均有最高抑制率;但抗氧化和抗糖基化活性无相关性。     

甲酸乙酯及甲酸对离体玉米象乙酰胆碱酯酶及酯酶活性的影响

研究甲酸乙酯和甲酸对离体玉米象Sitophilus zeamais（Motschulsky）酯酶和乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制作用,结果表明甲酸乙酯对离体的玉米象酯酶和AChE没有抑制作用,并且甲酸对玉米象酯酶和AChE的抑制中浓度远远高于甲酸乙酯对玉米象的致死中浓度,说明甲酸对玉米象这两种酶的抑制作用不是甲酸乙酯杀虫的主要机理。     

木麻黄凋落物化学成分及其生物活性的研究

利用多种柱色谱和高效液相色谱相结合的方法从木麻黄(Casuarina equisetifolia)凋落物的乙酸乙酯提取物中分离得到7个单体化合物,通过波谱分析结合理化性质鉴定化合物结构分别为:3β-(p-hydroxy-trans-cinnamoyloxy)olean-12-en-28-oicacid(1),3-O-(E)-coumaroylerythrodiol(2),casuarmondtol(3),alnusdiol(4),山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(5),4″-反-香豆酰基-山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(6),山柰酚(7),其中化合物3、4、6和7为首次从该植物中分离得到。分别采用MTT法、Ellman法和PNPG法对单体化合物的体外细胞毒活性、乙酰胆碱酯酶抑制活性和α-糖苷酶抑制活性进行测试,测试结果表明,化合物1和6具有细胞毒活性,化合物1~4和6具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物1和3~5具有α-糖苷酶抑制活性。     

两种不同方法制备的黑木耳多糖性质比较

本研究以黑木耳子实体为材料,对比了壳聚糖絮凝法制备的絮凝多糖HJD-1和传统水提醇沉法制备的醇沉多糖HJD-2的表观结构、α-葡萄糖甘酶抑制活性以及体外抑制肿瘤细胞增殖的活性。结果表明：（1）壳聚糖絮凝法制备粗多糖得率均值为4.76%,是醇沉法的2.17倍;醇沉法制备多糖的损失率为33.87%,是絮凝法的1.36倍;（2）絮凝多糖HJD-1和醇沉多糖HJD-2的表观评估及复溶性结果分析显示：絮凝多糖HJD-1为亮白色透明晶体,色泽均匀,颗粒规整;醇沉多糖HJD-2为棕褐色,颗粒状,有砂质感,前者相较后者的复溶性更好;（3）对α-葡萄糖甘酶抑制活性以及体外抗肿瘤能力结果分析表明：在相同浓度下,壳聚糖絮凝法制备黑木耳多糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果优于醇提法;絮凝多糖HJD-1对HepG2细胞的增殖抑制作用强于醇沉多糖HJD-2。     

超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究

应用超声波技术,以大米草为原料提取黄酮类化合物,设计正交实验,研究乙醇浓度、料液比、超声处理温度和提取时间对总黄酮提取效果的影响,分析得出最佳提取工艺条件。并测定大米草黄酮体外抗氧化活性。结果表明:大米草总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,提取时间20 min,料液比1∶30(g·mL-1),提取温度45℃。影响大米草黄酮提取率的主次因素是:料液比乙醇浓度提取温度提取时间。大米草黄酮总抗氧化活性和抗超氧阴离子活力随着浓度的增加逐渐增加,呈明显的量效关系,并且能有效清除氧化脂质(MDA)。     

酶辅助法提取透骨草中总黄酮及抗氧化性研究

本文采用纤维素酶辅助法提取透骨草中总黄酮,即先用纤维素酶酶解透骨草,再用乙醇回流法提取透骨草中的总黄酮。分别固定提取剂乙醇浓度为70%,料液比为1∶20 g/m L,初步探究了纤维素酶浓度、酶解p H、酶解温度、酶解时间四个单因素对透骨草总黄酮提取率的影响。设计正交实验确定了酶辅助法提取透骨草中总黄酮的较佳条件:纤维素酶浓度为2 U/m L、酶解p H=4.5、酶解温度为45℃、酶解时间2 h,总黄酮提取率为1.27%。本文初步探究了透骨草总黄酮提取液对羟自由基的清除活性,对照实验结果表明透骨草提取液对羟自由基清除活性要高于相同浓度的芦丁与二丁基羟基甲苯。     

阿维菌素对甘蔗绵蚜解毒酶系活性的影响

采用叶片浸渍法测定了阿维菌素对甘蔗绵蚜的毒力,并用分光光度计法检测了不同浓度药剂处理后活虫体内羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性的变化。结果表明,阿维菌素对甘蔗绵蚜的LC50为2.400×10-2mg·mL-1。甘蔗绵蚜体内β-NA羧酸酯酶活性高于α-NA羧酸酯酶,随着阿维菌素处理质量浓度的升高,α-NA羧酸酯酶活性逐渐升高,当质量浓度升高到4.500×10-2mg·mL-1时,活性达到最大,随后开始缓慢下降,而β-NA羧酸酯酶的活性总体呈上升趋势,说明甘蔗绵蚜体内β-NA羧酸酯酶的活性与阿维菌素的质量浓度可能存在一定的相关,β-NA羧酸酯酶活性的升高可能会使甘蔗绵蚜对阿维菌素产生抗性。甘蔗绵蚜体内乙酰胆碱酯酶的活性在阿维菌素处理质量浓度为2.250×10-2mg·mL-1时最高,而在处理质量浓度为4.500×10-2mg·mL-1时则降至最低,后又随阿维菌素处理质量浓度的加大而缓慢上升,乙酰胆碱酯酶的活性与阿维菌素的质量浓度不存在线性相关。     

超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究北大核心CSCD

应用超声波技术,以大米草为原料提取黄酮类化合物,设计正交实验,研究乙醇浓度、料液比、超声处理温度和提取时间对总黄酮提取效果的影响,分析得出最佳提取工艺条件。并测定大米草黄酮体外抗氧化活性。结果表明:大米草总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,提取时间20 min,料液比1∶30(g·mL-1),提取温度45℃。影响大米草黄酮提取率的主次因素是:料液比>乙醇浓度>提取温度>提取时间。大米草黄酮总抗氧化活性和抗超氧阴离子活力随着浓度的增加逐渐增加,呈明显的量效关系,并且能有效清除氧化脂质(MDA)。     

藏药穹代尔中内生真菌的分离及其次级代谢物的生物活性研究

从藏药穹代尔(攀茎钩藤,Uncaria scandens)的内生真菌中筛选对单胺氧化酶及乙酰胆碱酯酶具有抑制活性的提取物,并对高活性提取物进行化学成分的鉴定。采用组织切块法分离内生菌,发酵、萃取、甲醇回流提取法得到待测提取物,酶标法测定酶活性,波谱解析法鉴定结构。从穹代尔组织中共分离到9株内生真菌,检测发现3株内生真菌发酵提取物具有一定乙酰胆碱酯酶抑制活性,其抑制率在50%以上。通过分子生物学方法及形态学分析对活性菌株QDE-6进行了菌种鉴定,鉴定为黑曲霉属(Aspergillus sp.)真菌。从内生真菌QDE-6的次级代谢产物中分离鉴定了5个化合物,分别是Aspergiketone(1)、Gliotoxin(2)、Pseurotin A2(3)、Brevianamide F(4)、Pseurotin A1(5)。相比其他化合物,化合物3抑制率为51. 67%,具有较高的抗单胺氧化酶活性,化合物4抑制率为42. 76%,具有较高的抗乙酰胆碱酯酶活性。可作为进一步研究藏药穹代尔中内生真菌及开发药物的基础。     

5,5′-联硫-2,2′-双硝基苯甲酸及其有关化合物对乙酰胆碱酯酶的别构效应

5,5'-联硫-2,2'-双硝基苯甲酸(DTNB)及其有关化合物TNB、TNB-Tch都是黄姑鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的别构效应剂: 1.TNB非竞争性地抑制、而DTNB则激活该酶水解乙酰硫代胆碱和丁酰硫代胆碱的活力。对水解乙酰胆碱及α-萘酚乙酯的活力皆无影响。2.TNB-Tch比TNB具有更强的抑制作用。且对该酶水解乙酰胆碱、乙酰硫代胆碱及α-萘酚乙酯的活力皆有抑制作用。抑制类型与作用底物有关。底物在外周的结合能解除其抑制。3.钙离子可以解除TNB和TNB-Tch的抑制作用,而箭毒亦能与之对抗。对蛇毒乙酰胆碱酯酶,除了极低浓度(<10μM)DTNB和TNB有微弱的抑制作用外,TNB-Tch以及较高浓度的DTNB和TNB都具有强烈的激活作用。而对猪脑尾核乙酰胆碱酯酶的活力皆无影响。     

5,5′-联硫-2,2′-双硝基苯甲酸及其有关化合物对乙酰胆碱酯酶的别构效应

5,5'-联硫-2,2'-双硝基苯甲酸~*(DTNB)及其有关化合物TNB~(**)、TNB-Tch~(**)都是黄姑鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的别构效应剂:1.TNB 非竞争性地抑制、而DTNB 则激活该酶水解乙酰硫代胆碱和丁酰硫代胆碱的活力。对水解乙酰胆碱及α-萘酚乙酯的活力皆无影响。2.TNB-Tch 比TNB 具有更强的抑制作用。且对该酶水解乙酰胆碱、乙酰硫代胆碱及α-萘酚乙酯的活力皆有抑制作用。抑制类型与作用底物有关。底物在外周的结合能解除其抑制。3.钙离子可以解除TNB 和TNB-Tch 的抑制作用,而箭毒亦能与之对抗。对蛇毒乙酰胆碱酯酶,除了极低浓度(<10 μM)DTNB 和TNB 有微弱的抑制作用外,TNB-Tch 以及较高浓度的DTNB 和TNB 都具有强烈的激活作用。而对猪脑尾核乙酰胆碱酯酶的活力皆无影响。     

基于微量筛选模型的48种中草药提取物乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选及评价

采用微量筛选模型考察48种中药提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性。采用不同极性溶剂对中药材进行提取,采用微量筛选模型对不同浓度提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行考察,并采用Origin8.0计算其IC50值。结果表明,几种中药材的不同极性溶剂(水、80%乙醇、乙酸乙酯、石油醚)提取物有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。其中黄柏、元胡的80%乙醇提取物,丹参的乙酸乙酯提取物的抑制率较高。当上述提取物在实验体系中的终浓度为76.92 mg/L时,抑制率分别为66.72±0.02%、52.67±0.04%、46.84±0.03%,其IC50值分别为295.12、229.09、1202.26 mg/L。本研究结果为从中草药中快速筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂提供了方法和数据支持。     

体外模拟消化对鸡爪槭叶多酚稳定性及其自由基清除和α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响

本文旨在通过研究鸡爪槭叶多酚提取物在体外模拟口腔和胃肠道消化过程中总酚、总黄酮和缩合单宁含量,及其DPPH·、ATBS~+·清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性的变化,阐述鸡爪槭叶中的多酚类化合物在人体消化过程中主要活性成分组成和活性的变化。研究结果表明,体外模拟口腔和胃消化过程会降低消化产物中总黄酮含量,但对酚类和缩合单宁类化合物的含量无显著性影响(P0.05);肠消化过程会大大降低样品中活性成分的含量,实验组样品中总黄酮、总酚和缩合单宁含量的损失率分别为99.26%、52.95%和100%。口腔和胃部消化会降低样品的自由基清除能力和α-葡萄糖苷酶活性抑制能力,但不显著。肠道消化会使样品的抗氧化和酶抑制活性急剧降低,在测试浓度范围内,DPPH·和α-葡萄糖苷酶活性抑制能力损失率达100%,清除ATBS~+·的IC50值增加了1.88倍,且实验组和p H组样品间不存在显著性差异(P0.05)。总之,胃肠道消化会降低鸡爪槭叶多酚的稳定性及其抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性,且主要发生在肠道消化阶段,p H环境的改变是其主要影响因素。     

微波提取香水莲花总黄酮的工艺研究

该文研究了微波法提取香水莲花总黄酮的工艺。采用比色法测定黄酮的含量。利用单因素实验和正交实验考察了乙醇浓度、微波功率、微波时间、料液比对黄酮得率的影响,确定了最佳工艺为:用70%的乙醇溶液,微波功率250W,提取时间40 min,液料比25∶1,提取的总黄酮得率最高。