南五味子药材UPLC指纹图谱及一测多评法研究

建立南五味子药材超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和6种木脂素类成分一测多评法(QAMS),为南五味子药材质量标准提高提供参考。采用UPLC法建立南五味子药材指纹图谱,运用聚类分析(HCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱进行分析;以五味子酯甲为内参物,建立五味子酯丙、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素和五味子酯丁的一测多评法,并与外标法(ESM)测定结果对比,判断方法的准确性。14批南五味子药材指纹图谱确定了15个共有峰,通过对照品比对指认了其中7个成分,分别为原儿茶酸、五味子酯丙、五味子酯甲、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素、五味子酯丁,其指纹图谱相似度均在0.95以上;通过聚类分析(HCA)和正交偏最小二乘法-判别式分析(OPLS-DA)可以将南五味子药材分为4类,峰1(原儿茶酸)、峰2、峰4、峰6、峰7(五味子酯乙)、峰8、峰9、峰12、峰15共9个成分是导致产地差异性的主要标志物。一测多评法与外标法测定的五味子酯丙、五味子酯乙、安五脂素、五味子甲素和五味子酯丁含量结果无显著差异。所建立的方法简便、可靠,为南五味子药材质量评价提供参考。     

五味子属植物木脂素类资源的研究

本文调查了15个省区71个样品的15种五味子属植物。应用高效液相色谱法,对8种木脂素有效成分在五味子属植物中的含量进行了分析,这8种木脂素提五味子醇甲(schizandrol A)、醇乙(schizandrol B)、酯甲、酯乙(gomisinC,B)、五味子酚(schizanhenol)、甲素(deoxyschizandrin)、乙素(γ-schizandrin)及丙素(schizandrin C),同时对12种五味子的醇提物进行了主要药理作用的比较。根据研究结果,对各种五味子的质量作出评价以及可供开发利用的意见。     

华中五味子降转氨酶成分的研究

从华中五味子中分离得6种结晶成分,并确定了它们的化学结构。其中酯甲、乙、丙及丁经药理和临床试验证明有降低血清GPT作用,去氧五味子素及酯戊无效。用电子显微镜观察酯甲对小鼠四氯化碳中毒后肝细胞亚微结构的影响,认为肝细胞的损伤受到保护,酯甲对肝细胞无直接损害作用。氚标记醇甲口服后很快吸收,在肝内从脂溶性迅速转化为水溶性代谢物,主要经肾排泄。提纯大鼠肝GPT酶蛋白,免疫家兔后,用抗原抗体反应证明酯甲的降酶机理可能与抑制肝内GPT活力有关。     

基于HPLC-ELSD指纹图谱和多成分定量的浙贝母与湖北贝母质量差异研究CSCD

建立浙贝母、湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱,结合多成分定量分析,比较两种贝母属药材的差异。采用Waters ACQUITY HSS T3(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%三乙胺溶液为流动相,流速为1.1 mL/min,梯度洗脱;柱温为38℃;蒸发光散射检测;建立浙贝母和湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱,通过化学计量学方法和5种生物碱类成分的含量测定比较浙贝母和湖北贝母的差异。结果显示,浙贝母指纹图谱标定7个共有峰,而湖北贝母有8个;指认出其中6个峰,分别为伊贝辛、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、异贝母甲素、湖贝甲素,其中湖贝甲素为湖北贝母的专属性成分;HCA和PCA均能很好地区分浙贝母和湖北贝母,OPLS-DA共找到4个差异性标志物,含测结果显示,浙贝母中贝母素甲的含量明显高于湖北贝母,而贝母辛、贝母素乙和异贝母甲素的含量则明显低于湖北贝母。该方法可以有效鉴别浙贝母和湖北贝母质量的差异性,为其质量控制提供参考。     

基于五味子甲素与乙素的秦岭地区野生华中五味子的潜在空间分布

华中五味子(Schisandra sphenanthera)为我国三级保护野生药材物种, 在秦岭地区分布较广。采集秦岭地区19个样地307个采样点的华中五味子样本, 使用HPLC方法检测果实中五味子甲素和乙素含量, 基于模糊数学原理建立其与气候、土壤和地形三大类15个评价因子之间的隶属函数, 利用最大信息熵模型确定各评价指标权重, 使用加权平均法并参照GIS空间分析确定基于五味子甲素和乙素的秦岭地区野生华中五味子的潜在空间分布。研究结果显示, 秦岭地区华中五味子不适宜生境面积占研究区总面积的11.40%; 适宜生境面积占50.63%; 高适宜生境面积占37.97%, 主要集中在陕西南部、甘肃东部、河南西部、湖北神农架林区及其周边海拔800–2 000 m的山区。研究结果表明, 基于GIS与模糊数学构建的生境适宜性评价模型可以准确地对秦岭地区华中五味子生境适宜性作出科学且综合性评价, 并可量化适宜生境面积和空间分布, 为华中五味子野生抚育GAP基地选址和建设提供数据支撑, 为保护和可持续利用华中五味子野生资源提供参考。     

五味子科药用植物亲缘学初探

五味子科Schisandraceae隶属于双子叶植物门木兰亚纲Magnoliidae八角目Illiciales, 全球分布约60种, 包括两个属: 五味子属Schisandra和南五味子属Kadsura, 间断分布于亚洲东南部和北美东南部。本文归纳了中国五味子科植物两大类活性成分--木脂素和三萜的分布规律、传统疗效和现代药理活性, 并对中国五味子科的药用植物亲缘学进行了初探。联苯环辛烯类木脂素(I)集中分布于五味子科植物, 可以被认为是五味子科植物的特征性化学成分, 除了传统的保肝作用外, 这类化合物中很多具有潜在的抗氧化、抗肿瘤和抗HIV活性, 一些联苯环辛烯类的木脂素, 尤其是在八元环C-6、C-9位上具有羟基或者酯化取代具有更好的抗HIV和抗肿瘤活性; 而螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素(II)绝大多数存在于南五味子属, 其特殊的螺苯骈呋喃环及其钙拮抗、抗凝血和抑制血小板聚集的活性, 不仅初步说明了民间南五味子属药用植物藤茎具有较强活血化瘀药理作用的活性物质基础, 也提示在对南五味子属的药材质量标准研究中, 可以考虑以此类成分作为定性定量指标。五味子科植物中木脂素成分的分布规律提示, 在演化程度上五味子属植物较南五味子属植物更原始。环菠萝蜜烷类三萜在五味子属和南五味子属均有分布, 尤其是A环开环的环菠萝蜜烷类三萜(II)在抗HIV和抗肿瘤活性方面具有很好的潜力, 而结构更进化的7/7/5/6型三萜内酯(IV)显示了很强的细胞毒活性, 目前只在南五味子属的长梗南五味子K. longipedunculata中发现。从五味子属的小花五味子S. micrantha和狭叶五味子S. lancifolia中分离得到的多个成环复杂且高度氧化的类三萜内酯中也发现具有抗肿瘤和抗HIV潜力。     

北五味子及其不同炮制品中五味子甲素 和乙素的含量测定

目的:测定北五味子及其不同炮制品中五味子甲素、五味子乙素的含量。方法:采用高效液相色谱法,Spherisorb 10ODS1(4.6mm×250mm,10μm),以甲醇-水(70:30)为流动相,检测波长为254nm。线性范围0.1~0.5μg,相关系数为0.995.平均回收率为100.3%和100.4%,RSD=0.87%和2.85%(n=5)。结果:五味子甲素和乙素在生品、醋炙、炒制、酒炙、蒸炙、蜜炙品中的平均含量分别为0.13%,0.064%,0.052%,0.064%,0.11%,0.13%和0.21%,0.298%,0.238%,0.302%,0.216%,0.214%。结论:方法准确,快速,重现性好,可用于五味子各种炮制品的质量评价。     

短葶飞蓬总咖啡酸酯和灯盏乙素含量的空间变化

依据嵌套分层设计原理制定野外调查取样方案,以药用资源植物短葶飞蓬不同产地93个自然种群310份植株样品的灯盏乙素和咖啡酸酯含量的嵌套方差分析,探讨次生代谢有效成分含量在产区间的空间变化。结果表明:短葶飞蓬有效成分含量存在空间差异,最低含量产区的总咖啡酸酯和灯盏乙素含量分别只是最高含量产区的52.1%和41.8%,但不与产地间的空间距离远近完全一致;同一产地短葶飞蓬总咖啡酸酯和灯盏乙素含量有一定的年际差异,但高含量产地与低含量产地是相对稳定的;作为优质药材的基本产地单元,自然地理区划单元比行政区划单元更科学;短葶飞蓬总咖啡酸酯和灯盏乙素含量与植株含N量呈极显著负相关,符合"碳/氮营养平衡假说"的预测,但植株含N量的变化只能解释短葶飞蓬总咖啡酸酯和灯盏乙素含量不同产区间约30%的变异。植物药材有效成分含量的空间变化是药用植物地区间遗传变异和生长地环境生态因子变化共同作用的结果,用自然地理区划单元为产地单元更客观。确定药材的"优质产地"可作为保障药材有效性的科学管理途径之一。     

芪术胃安颗粒剂制备工艺优化选择

通过不同制备工艺的研究,确定对芪术胃安颗粒剂的最佳提取工艺。方法采用水提取－醇沉淀、乙醇回流提取,以氏甲甙甲和延胡索乙素为指标成分,采用双波长扫描、紫外分光光度法测定黄芪甲甙及延胡索乙素含量。结果：水提取－醇沉淀法与乙醇回流法的优化结果比较,两种提取工艺的黄芪甲甙,延胡萦乙素含量均无显著性差异。结论：从生产实际出发,芪术胃安颗粒剂提取工艺应选用乙醇回流法即乙醇浓度为５０％,回流温度为９０℃,回流时     

HPLC法测定神安颗粒中五味子醇甲含量的研究

以高效液相色谱法测定神安颗粒中五味子醇甲含量,建立神安颗粒多指标质量控制体系中脂溶性成分的控制指标。采用Kromasil C18色谱柱,流动相为甲醇-水(60∶40),检测波长为250 nm,流速为1.0 m L/min,柱温为室温,进样量为10μL。结果五味子醇甲进样量在0.15~6.0μg范围内与峰面积积分值线性关系良好(R2=1),平均回收率为97.38%(RSD=2.05%),测定神安颗粒中五味子醇甲含量约为1.30 mg/g。本方法简便、快捷、专属性强、重现性好,可用于神安颗粒天麻苷类成分的质量控制。     

不同产地川佛手中8种化学成分的分析与评价

建立HPLC法同时测定不同产地川佛手中木犀草素、6,7-二甲氧基香豆素、莨菪亭、5,7-二甲氧基香豆素、7-羟基香豆素、橙皮苷、槲皮素、阿魏酸8种成分含量的方法。采用Thermo BDS HYPERSIL C18(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0. 2%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱,流速1 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。在该色谱条件下,川佛手中8种成分分离良好,平均加样回收率为91. 22%～96. 52%,RSD <5. 0%。不同产地的川佛手中8种成分含量存在差异,部分成分之间存在相关性,样品聚为3类。产于四川省宜宾市长宁县老翁镇的川佛手质量最优。该方法可为川佛手的资源开发利用、质量控制以及安全评价提供参考依据。     

Simultaneous determination of ten active components in traditional Chinese medicinal products containing both Gegen (Pueraria lobata) and Danshen (Salvia miltiorrhiza) by high-performance liquid chromatography

In order to facilitate the quality control of Traditional Chinese Medicine (TCM) products containing both Gegen (Pueraria lobata) and Danshen (Salvia miltiorrhiza), a new and simple HPLC method for the simultaneous determination of 10 active components in these products has been developed. The chromatographic separation was carried out on a C(18) column eluted with a mobile phase consisting of 0.1% acetic acid in water and 0.1% acetic acid in acetonitrile with gradient elution. The eluent was monitored by a photodiode array UV detector at a wavelength of 250 nm for Gegen components including puerarin, daidzein 8-C-apiosyl-glucoside, daidzin and daidzein, and at 270 nm for Danshen components including danshensu, protocatechuic aldehyde, salvianolic acid B, cryptotanshinone, tanshinone I and tanshinone IIa. Excellent chromatographic separation was achieved for all studied compounds with good linearity (r(2)> 0.999) over the studied concentration ranges. The developed method has been applied to the simultaneous determination of the 10 studied compounds in commercially available products containing both Gegen and Danshen. The TCM product samples were extracted by sonication with a mixture of methanol:water (80:20) containing 0.5% acetic acid. Extraction recoveries for all studied compounds were in the range of 96.01-106.18%. The intra-day and inter-day variations were less than 7.25 and 5.44%, respectively, for all studied compounds. The developed method has not only proved to be effective in the simultaneous determination of the 10 components, but also provides a convenient quality control approach for TCM products containing both Gegen and Danshen.     

Quality control and producing areas differentiation of Gardeniae Fructus for eight bioactive constituents by HPLC–DAD–ESI/MS

Gardeniae Fructus (G.Fructus), the fruit of Gardenia jasminoides Ellis (Rubiaceae), is a commonly used traditional Chinese medicine (TCM) that has been used for the treatment of hepatitis, jaundice, hypersonic, diabetes and hematuria. Numerous researches have demonstrated that the major active constituents in G.Fructus were responsible for the majority of medical effects of this fruit and their quantification were important for the quality control of G.Fructus. However, in the current quality control standard, only geniposide was used as characteristic marker of G.Fructus, which could not reflect the overall quality of this fruit. In order to identify more chemical makers for improving the quality control standard and evaluate producing areas differentiation of G.Fructus, in the present study, a novel and sensitive high-performance liquid chromatography–diode array detector coupled to an electrospray tandem mass spectrometer (HPLC–DAD–ESI/MS) was developed for the simultaneous determination of 8 major constituents, including geniposidic acid (1), chlorogenic acid (2), genipin-1-β-gentiobioside (3), geniposide (4), genipin (5), rutin (6), crocin-1 (7), crocin-2 (8) in G.Fructus. Moreover, chemometric analysis techniques with principal component constituent analysis (PCA) and cluster analysis (CA) involved were introduced in statistical analysis of 8 investigated constituents in the 34 batches samples to discriminate the samples from different producing areas.The results indicated that the contents of the 8 major bioactive constituents in G.Fructus varied significantly among different producing areas. From results of the loading plot from PCA analysis, genipin-1-β-gentiobioside may have more influence in discriminating the sample from different producing areas, and which was found to be the most abundant bioactive component besides geniposide in all the 34 batches samples, suggesting that it should be added as chemical marker for further investigation on the pharmacological actions and the quality control of G.Fructus.     

High-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry for the simultaneous determination of multiple active components in Sheng-Mai San, a prescription of traditional Chinese medicine

An advanced and reliable HPLC-MS method was developed for the simultaneous quantification of eight active components (ginsenosides Rf, Rg(2), Rg(3), Rh(1) and Rh(2), gomisin A, methylophioponanone B and schizandrin) in Sheng-Mai San, a traditional Chinese medicine. The elution of multiple components was performed using a C(18) column with stepwise gradient elution. The detection of individual analytes was monitored by electrospray MS scanning from 300 to 1000 m/z in the positive ion mode, with the limits of detection of these components ranging from 0.06 to 1 microg/mL at a signal-to-noise ratio of > or =5. The intra- and inter-day accuracies ranged from 95.1 to 104.4%, and the overall precision was less than 9.3%. The recoveries of the analytes were > or =96.6%. The method was validated and found suitable for the determination of active components present in Sheng-Mai San preparation.     

海南黎药海巴戟多糖含量测定及其测量不确定度评估

研究和探讨海南黎药海巴戟多糖含量,并对多糖含量测量过程中引入的不确定因素进行评估。采用苯酚-硫酸法测定海巴戟药材中多糖含量,并根据苯酚-硫酸法建立数学模型,找出影响不确定的因素,最终确定测量结果的合成不确定度和扩展不确定度。以D-葡萄糖作为对照品,浓度在0.002 5～0.012 5 g/L范围内线性关系良好(R~2=0.999 4),重现性试验RSD=1.84%,4 h内显色稳定,加样回收率为98.05%(n=9,RSD=2.32%);16批海巴戟药材多糖含量为5.53%～12.63%,其多糖含量测定方法的合成不确定度为0.029 4～0.093 8,扩展不确定度为0.059 0～0.187 6。影响测量不确定度的主要因素有称量、浓度配制和吸光度。本研究建立的海南黎药海巴戟多糖含量测定方法适应性广、灵敏度高,若将测量结果不确定度纳入标准制定有助于对海巴戟药材含量分析方法的建立和质量标准的制定,有利于对海巴戟药材资源的开发。     

云南使君子仁油中挥发性成分的GC—MS分析

采用醇提和乙酸乙酯萃取使君子仁油,用固相微萃取技术对油中的挥发性成分进行GC-MS定性和定量分析。结果表明：使君子仁油的挥发性成分中含有52种精油成分,鉴定出29种化合物,其中蚁酸、乙酸、柠檬烯、甲苯的含量较高,分别为1．65％、6．51％、2．41％、2．75％。使君子仁油中所含挥发性成分大多为有毒和刺激性化合物,为保证用药的安全性,在直接食用种仁驱虫时必须熟食,禁止生食,避免发生中毒现象。     

HPLC 法测定不同来源槐角中槐角苷含量

目的:建立HPLC法测定槐角中槐角苷含量测定方法并检测不同来源槐角中槐角苷的含量。方法:Luna 5u C18(2)100A柱(250 mm×4.60 mm,5μm),柱温为35℃,流动相为甲醇-乙腈-1%冰醋酸(40:5:55),流速为1.0 ml/min,检测波长为260 nm。结果:槐角苷质量浓度在14.58 mg/L～53.46 mg/L范围内呈良好的线性关系,回归方程为y=110353x-274717(r=0.9999),平均回收率为99.5%,RSD为1.27%;不同来源槐角中槐角苷含量范围4.27%～8.78%。结论:该方法简便、快速、灵敏、可靠;不同来源的槐角中槐角苷含量有较大差异,其中以陕北黄土高原品种含量最高,可为槐角的质量保证提供依据。     

不同产地女贞子化学质量特征分析

通过分析不同产地女贞子化学质量特征,为女贞子质量控制标准的完善提供依据。本实验采用高效液相色谱法(HPLC)分析了不同产地女贞子药材中女贞苷、特女贞苷和红景天苷的含量,建立了可以表征女贞子整体化学质量特征的HPLC指纹图谱,并利用相似度、主成分及聚类分析三种方法对指纹图谱特征进行分析。结果表明,不同产地女贞子中三种成分含量变化规律有差异。指纹图谱结果显示,虽然不同产地女贞子的化学成分种类一致,但整体质量特征具有一定差异,其中女贞苷、红景天苷及其他未知成分均作为主要因子参与了这种差异的表达。各产地女贞子的质量特征相互交叉,无明显区域性。因此,不同产地女贞子化学质量特征存在差异,现行的评价指标并不能真实反映其差异,其质量控制标准有待进一步完善。     

Effect of Fructus schisandrae syrup on bronchial asthma mice model

Purpose

To investigate the effect of Fructus schisandrae syrup on bronchial asthma mice model.