凝胶上测定糖蛋白的荧光标记法

凝胶上测定糖蛋白及含糖酶是研究它们的性质和纯度的一种有效的方法。文献中报告的方法,有的不够灵敏,有的则非常麻烦。我们约在20年以前合成了一种荧光酰肼:dansyl glycyl hydrazide(DNS-Gly-NHNH_2),用以     

固相酶制备与应用的一些研究

在天然情况下,有的酶分泌在细胞外;有的则存在于细胞内。细胞内的酶,有的以溶于水的形式存在于细胞浆内;也有一些酶存在于细胞的细微结构上,在正常情况下不溶于水。不溶于水的酶经过一定处理,也能成为水可溶的酶;水可溶酶经过处理也可变为水不可溶的酶。经过这种处理的酶称为固相酶。近年来,固相酶的研究有了迅速的发展。     

关于酶促反应速度与酶促反应的初速度的教学

酶促反应速度是酶促反应动力学中的一个基本概念。一定条件下，酶催化反应的活力大小要由该反应条件下酶促反应速度来反映和确定：酶促反应速度越小，酶活力越小；反之，酶促反应速度越大，酶活力也越大。在研究底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂、抑制剂等因素对酶活力的影响时，都必须测定酶促反应的速度。为了排除实验中存在的一些干扰，一个酶的酶促反应的速度要在酶促反应进行的初期测定，即测定所谓的酶促反应的初速度。在教学过程中，学生不易弄清楚酶促反应速度与酶促反应的初速度之间的关系。我们发现：当一般地问起酶反应速度在何时测定时，绝大多数学生都会回答在酶促反应的初期；而当问起酶促反应动力学中的v-[S]曲线(图1)上的酶促反应初速度在哪里和为什么时，却有相当一些学生指出在曲线的原点处做切线，切线的斜率就是；有的则指出是与1/2vmax相应的位置的速度值；个别的则指出是与vmax相应的位置的速度值。只有极少数学生指出曲线上的每一点相应的速度值都是酶促反应初速度所在。实际上，正确的答案应为曲线上的每一点相应的速度值均为该底物浓度[S]处的酶促反应初速度值。     

限制性内切酶BamHI、EcoRI、PstI的分离纯化

限制性内切酶是核酸研究工作的重要工具酶,它的纯度直接影响基因分离,基因克隆以及序列分析等实验结果。为了获得品种繁多、纯度达到要求的酶,人们在分离纯化技术上作了不少努力。目前在分离限制性内切酶方法上以     

大豆尿素酶水解尿素实验

酶是活细胞制造的具有催化功能的蛋白质。中学生物学教材已涉及到酶的基本知识,如果结合课堂教学能安排小型的酶实验,可以帮助学生加深对生物催化剂——酶的本质和特性的认识。大豆尿素酶水解尿素实验具有方法简便、反应速度快、效果明显等特点,便于在课堂上进行。具体方法如下:     

介绍与养蜂业有关的酶

酶是生物催化剂,分布于一切生物的活细胞内,参加机体的各种化学反应。在蜂花粉、蜂蜜、王浆、幼虫和蜜蜂体内均有不同种类和数量的酶、调节蜜蜂的生长和发育。与养蜂业有关的酶包括葡萄糖氧化酶、淀粉酶、转化酶、蛋白水解酶、脂肪酶、转氨酶、过氧化氢酶、磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶等等。这些酶有的来自蜜蜂的分泌腺,有的来自幼虫、花蜜或王浆中。     

野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化

为了提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆群体ＤＮＡ多态性的能力,随机扩增产物用限制性内切酶消化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物。结果发现：１．有的限制性内切酶能够消化野大豆群体ＤＮＡ的随机扩增产物,有的却不能。２．有的限制性内切酶消化无ＲＡＰＤ个体的扩增产物后能够产生多太性ＤＮＡ片段,有 内切酶不能产生。３．有的引物的无ＲＡＰＤ个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的ＤＮＡ片会面     

綠豆胰蛋白酶抑制剂的研究——Ⅵ.抑制剂、胰蛋白酶及其两种絡合物的免疫学特性

酶具有明显的专一活力。有的已被提純或結晶,有的一級結构已經闡明,因而在免疫化学中利用酶作为抗原,不仅有利于对抗原,抗体間作用机制深入了解,同时也为酶活性与抗原免疫活性間的关系以及酶,抗酶,底物三元体系相互作用的研究提供了新的課題。     

植物几丁质酶的结构与功能、分类及进化

近年来对几丁质酶的研究越来越深入,资料也愈来愈多。有的植物几丁质酶除具有几丁质酶活性,还具有其它的活性。典型的几丁质酶由N_端信号区、催化区和C_端延伸区组成,有的还有几丁质结合域。各功能域具有各自的功能。对植物几丁质酶的分类已经过多次改进,目前公认的是分成4组9个亚组。有证据表明植物几丁质酶在进化过程中有遗传转座现象,但具体进化过程还有待进一步确证。对几丁质酶与其它一些蛋白的关系的了解有助于理解几丁质酶的起源和进化。由于几丁质酶具有独特的抗真菌特性,因而几丁质酶基因成为目前抗真菌基因工程研究的热点之一。     

奇特的蛋白质

据估计生物界中的蛋白质可达 10 10 ～ 10 12 ,有的作为功能蛋白发挥着及其重要的生理功能 (酶蛋白、运输蛋白、运动蛋白、免疫球蛋白等 ) ;有的为不具活性功能的储藏蛋白 (鸟卵清蛋白、牛奶酪蛋白 )和结构蛋白 (毛发角蛋白、结缔组织中的胶原蛋白 )。其实除了这些蛋白质外尚有一类奇特的蛋白质 ,它们有的能发光 ,有的与抗冻有关 ,有的能提高酶的活性 ,有的与耐热性有关 ,有的有杀菌作用。1　绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白 ( GFP)是 Douglas等在 1992年最早纯化得到的能发光的蛋白质 ,因其独特的发光特性引起人们极大的兴趣 ;它能在长波紫外光…     

“探究pH对H2O2酶活性的影响”实验创新及优化

利用滤纸片上浮法分别测定平菇、杏鲍菇、金针菇、土豆和猪肝中的H₂O₂酶在不同pH条件下的酶活性,缩短实验时间、放大实验现象,提高了实验成功率。实验显示,H₂O₂酶的最适pH在7.0左右;真菌尤其是平菇中的H₂O₂酶活性远高于教材推荐的土豆和猪肝,是本实验的理想材料。     

"茎靠哪部分运输有机物"探究性实验教学设计

1　探究目的体验科学探究的一般方法 ,了解茎靠哪部分运输有机物。2　提出探究问题茎靠哪部分运输有机物。学生已经知道植物的茎具有输导作用 ,并进行了“探究茎对水分和无机盐的运输”,自然联想到有机物是靠茎的哪部分运输的 ?3　作出假设有机物是通过筛管运输的。4　设计实验学生分组讨论 ,团结合作 ,共同设计实验方案 ,在选材上 ,有的组选杨、有的组选柳、有的组选茉莉。在方法设计上 ,既受到教材的启发 ,又在教材基础上有大胆创新和超越。通过横向交流、集思广益 ,初步设计出实验方案 ,教师再帮助补充、完善 ,使实验设计科学 ,可行性强…     

介绍一种回收DNA片段和浓缩核酸稀溶液的方法

在核酸的结构与功能和遗传工程研究中,常常遇到由凝胶带上回收限制性内切酶酶切片段和大体积溶液中核酸(或片段)浓缩的问题。多年来,不少人,采用不同方法试图解决这一问题,但是,有的回收率不高(20-30％),有的回收后样品不能直接为酶作用,有的样品含量太低,不能满足研究需要。     

酶法提取桑葚多糖的工艺研究

利用纤维素酶从桑葚中提取桑葚多糖,通过单因素实验和L9(34)正交实验研究酶用量、酶解时间、酶解温度对桑葚多糖提取率的影响。实验结果表明:纤维素酶能够显著提高桑椹多糖的提取率,并且提取温度是最重要的影响因素,其次是酶解时间,酶用量在此实验范围内对测定结果的影响最小,提取的最佳工艺条件为:酶解温度45℃,酶解时间150 min,酶用量4.0 mL。     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅱ.肝细胞内乙型肝炎表面抗原的电子显微镜定位方法

本文介绍辣根过氧化物酶标记抗体对肝细胞内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的免疫电镜定位方法。电镜样品制备,可采用酶标免疫显色组织切片的再包埋、或直接利用超薄切片进行酶标免疫显色定位。对实验中应注意的一些问题进行了讨论。在电子显微镜下初步观察了HBsAg 阳性肝细胞中HBsAg 的分布和形态,并发现在光学显微镜下,辣根过氧化物酶标免疫定位HBsAg 完全为阴性部位的肝细胞中,有的细胞胞浆内或扩大的内质网池内,尚可见到少量散在的HBsAg 与酶标抗体的沉积物,提示电镜观察有更好的灵敏性。     

青霉素酰化酶固定化前后动力学行为的比较

在优化的固定化条件下,通过戊二醛交联直接将青霉素酰化酶固定化。在优化的环境条件下测定游离酶和两种固定化酶的动力学常数。结果表明,尽管固定化酶的米氏常数增大,但产物抑制作用减弱,裂解青霉素的实验结果表明,固定化酶更适合在工业上应用。     

温度对蛋白酶活性影响的实验探究

"探究影响酶活性的条件"是生物学必修1教材的基本实验之一,但教材上未给出有关温度对酶活性影响的具体实验方案。详细阐述了探究温度对酶活性影响的实验过程。研究对象选用底物蛋白和蛋白酶,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对反应后的样本进行跑胶实验。由于在不同温度和时间下蛋白酶活性强弱不同,使得底物蛋白被切割的条带在聚丙烯酰胺凝胶上显示出的粗细不同,据此判断酶活性的强弱。实验结果验证了"酶的活性随着温度的升高而加快;当达到最适温度后再升温,酶的活性逐渐降低,继续升高达到一定温度后,酶完全失活"的结论。     

盲点的检查与测量

中学《生理卫生》课本安排了一个测定盲点的实验,其目的是为了证明视网膜上感光细胞是产生视觉的结构基础,明确盲点在视网膜上的位置. 在做此实验过程中,有的教师反映测不出盲点,并询问盲点的位置在视网膜上的鼻侧或颞侧,原因何在?现就这方面问题,作扼要的介绍.     

壳聚糖纳米磁性微球固定脂肪氧合酶的研究

实验采用溶胶凝胶法制备了纳米磁性Fe3O4,并用壳聚糖对颗粒2四川大学,生命科学学院,四川成都表面进行了表面修饰得到壳聚糖纳米磁性微球复合载体,再以戊二醛为交联剂将脂肪氧合酶固定在复合载体上,并测定了不同因素对游离酶和固定化酶活性的影响;实验表明,微粒在电镜观察下呈亮黑色球状,直径约为150nm,并具有良好的磁性,固定在载体上酶的含量约为7.6%,游离酶的最适温度为30℃,最适p H8.0,而固定化酶的最适温度为30℃,最适p H9.0,当H2O2浓度为12.0 g/L时,游离酶和固定化酶的活性最强;实验结果表明通过交联的方法成功将脂肪氧合酶固定在了纳米磁性四氧化三铁颗粒上,并表现出了较好的活性。     

唾液酸苷酶的催化机理及水解与合成寡糖进展

唾液酸苷酶(EC.3.2.1.18)是一类重要的糖苷水解酶,在动物和微生物中广泛存在.该类酶催化寡糖或糖缀合物上非还原末端唾液酸水解,具有重要的生物学功能,如参与溶酶体降解代谢物、癌症发生、微生物致病等多种生理和病理过程.除了水解活性外,有的唾液酸苷酶还具有转糖基活性,能够以唾液酸单糖或糖苷为糖基供体,催化唾液酸转移到受体分子上,一步合成寡糖和糖苷化合物.这种合成活性对于唾液酸相关糖链的大量获得具有重要意义,有利于推动该类寡糖的基础研究及其在食品和医药中的应用.本文综述了唾液酸苷酶的结构和催化机理、生理功能、转糖基作用及其在寡糖合成中的应用.