大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的克隆、表达及初步纯化

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）的佐剂活性。从大肠杆菌中调出LTB的原始基因,将该基因克隆、构建pET21b—LTB表达载体、转化大肠杆菌B121（DE3）进行表达,并对表达产物进行初步纯化;经DNA测序、SDS—PAGE、ELISA检测,结果表明成功构建了能够稳定表达可溶性LTB的菌株,并获得初步纯化LTB的方法。为今后LTB的研究及应用奠定了基础。     

大肠埃希菌不耐热肠毒素双突变体的表达及活性研究

为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK⁶³/G¹⁹²基因片段, IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡。结果表明：制备的突变体LTK⁶³/G¹⁹²的基因片段经酶切和测序发现,所构建的表达载体pLTK⁶³/G¹⁹² 阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换;经SDS-PAGE电泳检测,野生型LT及双突变体均表达出约33.0 ku和13.0 ku的两条蛋白带,与LTA、LTB亚基分子质量相吻合;经Western bolt检测,两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应;双突变蛋白的酶活性和毒性与野生型LT相比酶活性和毒性都有所降低;突变体LTK⁶³/G¹⁹²能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高抗新城疫病毒的IgG和IgA。说明LTK⁶³/G¹⁹²是一个良好的免疫佐剂。     

肠毒原性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)基因探针的研制

经氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心分离纯化重组质粒pMMO 30 DNA 琼脂糖凝肢电泳回收的1．TDNA—HindII片段,用DNA缺口转译技术制备a-32p标记的LT基因探针,与标准ETFC(LT+)杂交为阳性,与非ETEC杂交则无同源性。从腹泻儿童和腹泻病猪粪便中分离的、经兔肠段结扎试验和免疫沉淀测定LT呈阳性的EFEC,与基因探针杂交呈现阳性：而且一个单菌落在硝酸纤维素滤膜上裂解的DNA印迹,与探针杂交可以进行放射自显影。如果采用不同的杂交条件,还可以鉴删测定ETEC的LT基因和霍乱弧菌的CT基因,一次可以进行几百个菌落的测定。结果表明,该探针可以用于实验室诊断和流行病学调查。     

产肠毒素大肠杆菌肠毒素LT,ST融合的研究进展

产肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）肠毒素ＬＴ与ＳＴ融合是ＥＴＥＣ多价疫苗候选株研制的一项重要工作,ＬＴ与ＳＴ的化学偶联研究已证明融合后可使小分子的ＳＴ获得免疫原性成为完全抗原,而基因融合对构建多价疫苗则是更重要的手段。本文着重介绍了近年来对ＬＴ与ＳＴ基因融合的研究,特别是一些影响基因融合效果因素的基础性研究。这些都为候选株的研制提供了研究手段和依据,并对广泛的基因融合研究具有理论意义。     

大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及其纯化保存策略

编码完整大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的基因被引入pET11c形成pET11-LT,该质粒在E.coli BL21(DE3)中得到较高效率的表达,约46mg/L。用D(+)Immobilized galactose柱可以在很宽的pH范围(pH7.3～10.4)内用多种方法对LT进行纯化且保持其结构完整。溶于TEAN(pH7.3)或碳酸盐缓冲液(pH10.4)的LT,冻干后保存于4℃,可长久保持其完整结构,此为保存LT的较好策略。与GM1结合实验、CHO细胞及Patentmouse毒性检测实验证明纯化的LT具有生物学活性。     

霍乱毒素和大肠埃希菌肠毒素的免疫调节作用

一般都知霍乱毒素和产毒性大肠矣希菌（大肠杆菌）不耐热肠毒素具有很强的免疫原性,这些细菌肠毒素的Ｂ亚单位尚有促进免疫耐受性的免疫调节作用,现综述这些有关分子调节白细胞群体的机制。     

重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建

从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %～ 99.71%和 97.5 8%～ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。     

大肠杆菌耐热肠毒素在细菌表面的呈现

为了探讨CS3菌毛呈现载体用于呈现立体表位的可行性,选择大肠杆菌耐热肠毒素（ST）作为靶蛋白,通过全细胞ELISA,电镜技术来检测重组蛋白的表达,结果显示重组蛋白以杂合菌毛的形式得到了表达,并保持有CS3载体蛋白的抗原性,初步表明ST在细菌表面得到呈现,CS3菌毛呈现载体可用于立体表位的呈现。     

抗肠毒素原性大肠艾希氏菌腹泻口服菌苗的发展

<正>肠毒素原性大肠杆菌(ETEG)引起的腹泻是一个重要的卫生问题,特别是在发展中国家以及到这些地区的旅游者。医院和临床基础研究证明,发展中国家急性腹泻病例10～50%为ETEC所致,平均约20%为5岁以下儿童,较老的年龄组也稍高。而且,从工业化国家到发展中国家旅游的人当中的急性腹泻病例已经证明至少有1/3-1/2病原是ETEC。 ETEC引起的病情程度由无脱水现象的轻皮腹泻至霍乱样疾病不等。在发展中国家,5岁以内的儿童之中每年都有许多断续遭受1-3次ETEC引起的腹泻。虽然大多数ETEC感染症状相当轻微,但在发展中国家儿童中ETEC腹泻每年在10亿人次     

细胞因子作为DNA疫苗佐剂的研究进展

细胞因子是机体细胞(主要指免疫细胞)产生的一类具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子,在体内能激活免疫活性细胞,对免疫应答的产生和调节有重要作用。近年来,大量研究表明细胞因子可作为DNA疫苗佐剂来增强疫苗的免疫效果。简要综述了细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂的研究进展。     

大肠杆菌耐热肠毒素1型的结构与其受体的研究进展

对大肠杆菌耐热肠肠毒素１型（ＳＴ１）及其受体结构功能和它们相互作用机制的研究,不仅是研究类似ＳＴ１等小肽类毒素作用机制的基础,而且对于人们研究细胞膜上信使传递途径也是一种有效的手段。本文就近几年大肠杆菌ＳＴ１的分子结构,尤其是ＳＴ１分子内二硫链及其三维空间构型与功能关系的研究,ＳＴ１受体的性质,纯化以及ＳＴ１与受体相互作用机制研究等方面的进展作了介绍。     

新型疫苗佐剂的研究进展

与传统的灭活或活体疫苗相比,由基因工程重组抗原或化学合成多肽组成的现代疫苗往往存在免疫原性弱等问题,需要新型的免疫佐剂来增强其作用。尽管传统的铝盐佐剂是目前唯一全球公认的人用佐剂,但存在激发细胞免疫应答能力差等不足,因此,需要研发更为安全有效的人用新型佐剂,尤其是安全无毒、能够刺激较强细胞免疫应答的佐剂,以及适合粘膜疫苗、DNA疫苗和癌症疫苗的免疫佐剂。分析阐述了新型佐剂研究状况和佐剂发展方向,并进一步对新型佐剂的临床前和临床试验研究以及已批准上市的新型疫苗佐剂进行了综述。     

百白破疫苗新型佐剂的研究进展

百白破疫苗作为中国婴幼儿计划免疫的重要组成部分,可以同时预防由百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风梭菌感染引起的疾病。百白破疫苗中所含抗原需经脱毒处理,需添加佐剂以提高其免疫原性。目前已上市的百白破疫苗基本以铝佐剂为主。多项研究表明,铝佐剂在免疫持久性和安全性等方面存在一定局限。现就近年来对百白破疫苗新型佐剂的研究进展进行汇总,并为未来新型百白破疫苗的应用提供科学依据。     

新型疫苗佐剂的研究进展

近年来,核酸疫苗、基因工程疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗的研究取得快速的发展,但这些疫苗与传统的灭活或活体疫苗相比,往往存在免疫原性差等问题,因此需要佐剂来增强其作用.佐剂已被证明是疫苗中的关键成分,佐剂种类众多,尚无统一的分类方法,目前应用最多的佐剂是铝佐剂和弗氏佐剂,但随着新型疫苗的开发,新型佐剂的开发必不可少.根据目...     

大肠埃希菌异质性耐药的研究进展

大肠埃希菌(Escherichia coli)是人类和动物中常见细菌病原体,E.coli已对多种抗菌药物产生耐药,且由于抗菌药物选择压力越来越大,致使菌株的适应性和致病性更强,耐药的传播更快、定植率更高,给全球流行病学和临床治疗带来极大的挑战。近年来,E.coli的异质性耐药(heteroresistance,HR)相关研究相继被报道,异质性耐药是指细菌中的同源亚群对某种抗菌药物表现出不同的敏感性,是敏感菌进化为耐药菌的中间阶段,不同于完全耐药,异质性耐药在临床上不易及时检出,常导致临床抗菌药物治疗失败。因此,为有效防控E.coli感染及耐药的演变,深入剖析E.coli异质性耐药的流行特征及可能的机制尤为重要,本文就E.coli的异质性耐药研究进行了梳理,并对异质性耐药从表型特征、检测方法和可能的机制等方面进行了概述。旨在加强对E.coli异质性耐药的认识和研究,以期为全面了解E.coli耐药过程及发生机制、优化抗菌药物使用策略、减缓完全耐药菌种的出现提供参考。