淡水涡虫的采集和室内长期饲养

东亚三角头涡虫（Ｄｕｇｅｓｉａｊａｐｏｎｉｃａ）因其分布广泛、结构典型,是动物学实验的常用材料。本文介绍一种在室内长期饲养涡虫的简便方法。１三角头涡虫的采集三角头涡虫对水质和水温较敏感,多生活于清凉洁净的淡水溪流中,白天由于喜欢藏于水中石块或其它物体...     

我国三角头涡虫的种名为何要更正

“我国的淡水涡虫”一文(见《生物学通报》1989年第9期)发表后,有的读者对我国三角头涡虫的种名更改问题尚不理解。本文就此进一步说明。三角头涡虫属涡虫是一类种类最多和分布最广泛的三肠目淡水亚目涡虫,迄今全世界已经发现该属涡虫79种,它们遍布于南北两半球的大多数地区。欧洲三角头涡虫(Dugesia gonocephala(Duges,1830))是欧美动物学家较早在欧洲和非洲发现的一种涡虫。历史上有一段时间,人们曾经以为世界许多地方的其它种三角头涡虫也是欧洲三角头涡虫,这种情况也发生在亚洲。日本涡虫专家饭岛魁和镝木外岐     

涡虫的采集培养和切割再生方法

迄今,我国的淡水涡虫已发现七种,其中最常见的是东亚三角头涡虫(Dugesis iaponicua),分布于香港、台湾、昆明直到吉林省境内,和细形山地涡虫(Phagocato vivida),分布于大、小兴安岭和长白山一带。七种淡水涡虫都喜生于冷泉溪流的石下。采集涡虫时,途中要防止水温的骤升。制作切片的涡虫采集,需将涡虫用稀酸杀生,鲍氏液固定,然后放酒精中带回。用带盖的塘瓷盘加水培养涡虫,既接近生境,便于实验操作和换水,又能使涡虫较好的生殖和产卵。切割再生实验,既能定向地培育出双头、双尾、多头和多尾的畸型涡虫,又能增加超常数眼涡虫出现的频率。     

鲁中山区东亚三角头涡虫有性生殖过程研究初报

于2005年3-5月、9～11月对生活于鲁中山区的东亚三角头涡虫（Dugesia japonica）的有性生殖过程进行了研究,发现鲁中山区东亚三角头涡虫1年只有1次有性生殖过程。卵囊产出的高峰在4月,卵囊孵化与种群密度最高峰在5月,其有性生殖过程与温度、食物、虫体大小密切相关。经实验观察1个卵囊最多能孵出涡虫幼体10条,最少3条。     

珞珈山东亚三角头涡虫群体遗传多样性贫乏的RAPD证据

无脊椎动物是在生物多样性中占优势的类群,生物多样性研究还未受人们重视。遗传多样性研究是生物多样性研究的重要方面,采用RAPD技术分析了取样于武汉大学珞珈山的一个东亚三角头涡虫群体,该群体多态位点比例为11.3%,遗传相似度0.9505～1.0000,平均遗传相似度为0.9784,Shannon多样性指数为0.180,UPGMA聚类分析显示该群体分为两个大的分支,各项参数显示该群体的遗传多样性贫乏。根据RAPD分析结果,该东亚三角头涡虫群体遗传多样性贫乏与其周围生境退化有关,也可能与东亚三角头涡虫具有无性生殖和有性生殖这一独特的繁殖方式相关。     

淡水三肠目涡虫的染色体研究进展

三肠目(Tricladida)淡水亚目(Paludi-cola)属于扁形动物门涡虫纲,共分四个科:三角头涡虫科(Dugesiidae)、扁平涡虫科(Planariidae)、树枝肠涡虫科(Dendrocoe-lidae)和洞穴涡虫科(Kenkiidae)。全世界已经发现35个属387种。除洞穴科涡虫尚未     

Cu~(2+)胁迫条件对涡虫体内过氧化氢酶活性的影响

实验以0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0mg·kg- 1 4种质量浓度的CuSO4 溶液培养东亚三角头涡虫(Dugesiajaponia) 4 8h后,提取其体内蛋白质并测定其过氧化氢酶(CAT)的活性。测定结果:涡虫体内蛋白的CAT酶活性依次为12 .5 9、2 3.74、18.37、18.72ū·mg- 1 。以自来水(实验室常规培养方法)为对照,其相应的酶活性为18.78ū·ｍｇ- 1 。实验结果表明:低浓度下Cu2 + 刺激CAT酶活性增加,而在高浓度下,由于涡虫耐受力的存在而使涡虫的CAT酶活性维持在正常水平(与对照组差异不大)。当Cu2 + 浓度达到4mg·kg- 1 时所培养的涡虫不到2 4h全部死亡。     

适于涡虫基因组DNA快速制备的改良的CTAB法

提取得到高质量的DNA样品是进行分子生物学研究的必要前提。为了找到一种适用于提取涡虫基因组DNA的常规方法,我们以东亚三角头涡虫为材料,分别用改良的CTAB法、SDS法、SDS-蛋白酶K法对涡虫的基因组DNA进行了制备,并对3种方法制备的涡虫基因组DNA进行了检测与比较。根据比较结果,我们认为改良的CTAB法最适合于涡虫基因组DNA的快速制备,为涡虫的分子生物学研究打下了基础。     

我国的淡水涡虫

扁形动物门的代表动物是涡虫纲的三肠目淡水(三肠)亚目涡虫。这类涡虫全世界发现了近40属和近400种,它们归属于4个科,即三角头涡虫科(Dugesiidae)、扁平涡虫科(Planariidae)、洞穴涡虫科(Kenkiidae)和树枝肠涡虫科(Dendrocoelidae)。它们遍布于全世界各地的泉溪、湖沼、池塘、水井和洞穴水中。它们的分布区域极不均衡,北半球的温带、亚寒带地区较多,其中仅分布于贝加尔     

东亚三角涡虫DjPLCβ4基因克隆及在胚胎发育中的组织特异性表达

磷脂酶C的β亚型(PLCβ)在突触传递和可塑性的调节中发挥着重要作用。东亚三角涡虫Dugesia japonica作为首次出现三胚层的两侧对称动物,是研究发育和进化的重要模式生物。为了研究DjPLCβ4基因在东亚三角涡虫胚胎发育不同阶段的表达,通过RT-PCR和RACE技术克隆并验证了DjPLCβ4 cDNA的功能与表达图谱。结果显示,DjPLCβ4基因全长3 245 bp,编码969个氨基酸。系统进化树显示,东亚三角涡虫与其他物种的PLCβ4亚型聚群,并位于两侧对称动物的基部,可能是PLCβ4的原始类型。通过整体原位杂交技术研究DjPLCβ4基因在胚胎中的时空表达,DjPLCβ4基因最开始表达于胚胎发育的第3阶段,阳性信号主要位于胚胎咽及胚带;随着发育,胚胎孵化出幼虫,DjPLCβ4基因主要表达于神经原基和中枢神经系统。综上所述,东亚三角涡虫DjPLCβ4基因参与胚胎神经原基的形成和分化。     

PFOS对再生东亚三角涡虫抗氧化酶活性的影响

为了探究全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)对再生涡虫抗氧化酶活性的影响,以再生中的涡虫作为实验材料,采用酶活性的测定的方法来探究PFOS对再生中东亚三角涡虫中抗氧化酶活性的影响。结果表明,PFOS刺激涡虫产生应激反应。在再生早期,PFOS胁迫会造成涡虫的氧化损伤和脂质的过氧化,并表现出随着PFOS浓度的升高,涡虫氧化损伤程度加剧的趋势;再生5 d时,机体产生抗氧化的反应来消除体内的氧自由基;在再生的后期,由于涡虫对药物的耐受作用,涡虫的抗氧化反应不显著。     

中国淡水三角涡虫(Dugesia sp)的染色体研究(Ⅰ)

利用空气干燥法对不同产地淡水三角涡虫的染色体进行了研究。核型分析表明：河南淇县鱼泉三角涡虫(Dugesia sp)和浙江杭州龙井三角涡虫(Dugesia sp)体细胞中有16条染色体,为二倍体,核型公式为2n=2x=16=16m,均为具中部着丝粒染色体;河南济源不老泉三角涡虫(Dugesia sp)有24条染色体,为三倍体,核型公式为2n=3x=24=24m,亦全部由中部着丝粒染色体组成。上述3个产地淡水三角涡虫染色体的形态较为接近。北京樱桃沟三角涡虫(Dugesia sp)的体细胞染色体数目为24,为三倍体,核型公式为2n=3x=24=22m 2sm,由中部和亚中部着丝粒染色体组成,其中第2、4号各有一条染色体属于亚中部着丝粒染色体。研究结果表明：4个产地三角涡虫的体细胞染色体数目存在较大差异,包括二倍体(2n=2x=16)和三倍体(2n=3x=24),染色体基数属于x=8类型。     

涡虫室内养殖新方法

三角头涡虫(Dugesia)由于其结构典型,分布广泛．一直是动物学实验和科学研究的重要材料。之前,人们所介绍的饲养涡虫的方法中,大多是营造阴凉的条件,在实验室内用特制的装置饲养涡虫。经探究,我们在家庭内用鱼缸混合养殖涡虫和热带鱼,连续7年获得了成功。     

p53同系物Djp53在涡虫胚基早期发育阶段的组织特异性表达及其在再生中的作用

为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10天和成虫的实质组织中表达较弱．RNA干扰后的RT-PCR检测显示,Djp53表达量显著下降,涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷．由此推断,东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段,通过调节多功能干细胞的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成,是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因,并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞的维持具有重要的作用.     

东亚三角涡虫Rab蛋白cDNA序列的克隆与生物信息学分析

通过构建东亚三角涡虫(Dujesia japonica)cDNA文库,随机挑选重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得1个三角涡虫新基因——Rab蛋白基因(DjR),涡虫Rab蛋白cDNA全长2 141 bp,开放性阅读框(ORF)621bp,编码206个氨基酸,相对分子量为23.1 kD,等电点6.59,属亲水性蛋白,主要定位于细胞质中,在氨基酸第20和21位之间有信号肽剪切位点。有8个磷酸化位点。含有小G蛋白家族5个保守的鸟苷酸结合区域。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他23个物种的相似性为53%-90%,且符合种属之间的进化关系。     

日本三角涡虫无性繁殖系Dugesia ZB-1的建立

目的建立来源于我国的日本三角涡虫无性繁殖纯品系。方法野外采集日本三角涡虫,之后在实验室进行切割损伤再生,通过不断地切割培养,建立日本三角涡虫无性繁殖纯品系。结果经过10年上万次实验,将来源于山东淄博地区的日本三角涡虫培养成为一个实验室可控条件下稳定生长的单切无性繁殖纯品系Dugesia ZB-1。结论 Dugesia ZB-1的建立,为开展后续相关实验,推动我国涡虫研究的进程及参与国际涡虫研究的竞争奠定了坚实的基础。     

东亚三角涡虫RhoA基因的原核表达及组织定位

为了表达东亚三角涡虫RhoA蛋白,采用温控表达载体pBV220-IL1,构建了原核表达重组质粒pBV220-IL1-RhoA,转化到E.coli DH5α中,利用42℃热激诱导表达,并进行了分离纯化和Western杂交鉴定,利用荧光免疫组织化学技术检测了在涡虫体内的分布。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白约为18 kDa,Western杂交结果显示是目的蛋白,荧光免疫组织化学结果表明RhoA蛋白在东亚三角涡虫神经系统处表达。     

日本三角涡虫神经系统的AChE组化定位

日本三角涡虫(Dugesia japonica)是探索再生机理常用的模式动物之一.本实验利用乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)组织化学定位整体日本三角涡虫神经系统,对其方法做了改进,取得理想效果.结果表明:1)日本三角涡虫的AChE阳性(DjAChE+)神经系统结构由中枢神经及其分支神经...     

15种直饮水对涡虫再生的影响

通过切割57条日本三角涡虫(Dugesia japonica),每条切割为四段,观察和比较了228个涡虫体段眼、头、尾和咽在15种市售直饮水中的再生过程。结果显示:(1)切割后的涡虫体段在矿泉水中,无解体现象的比例为66.6%;而在纯净水中为12.5%。(2)解体体段占涡虫体段总数的19.74%。(3)头部解体占解体总数的55.55%。头部解体大于50%的现象分布在纯净水,其中3种纯净水中的头段全部解体。本实验结果提示,长期饮用能使涡虫正常再生的市售矿泉水比较适宜。     

N,N-二甲基乙酰胺对东亚三角涡虫(Dugesia japonica)毒性效应的研究

N,N-二甲基乙酰胺(DMA)的大量应用导致其越来越多的进入环境.然而水环境中的DMA对水生生物的毒性尚不明确.通过急毒性、再生、抗氧化酶活力及彗星电泳试验.探讨DMA对东亚三角涡虫(Dugesia japonica)的毒性作用.研究发现,DMA处理涡虫24、48、72、96 h的半致死浓度(LC50)分别为27.7、18.4、10.7、6.7 g/L;浓度大于0.9 g/L的DMA会损伤再生组织,延缓涡虫完成再生;处理48 h后,DMA浓度为0～5 g/L时,涡虫体内过氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力呈上升趋势,大于5 g/L时酶活力开始下降,而过氧化氢酶(CAT)活力在DMA浓度小于1 g/L时呈下降趋势,大于1 g/L后呈现上升趋势;DMA对涡虫DNA的损伤作用不明显,浓度达到10 g/L后才表现出遗传毒性(P<0.05).结果表明DMA对涡虫有明显的生物毒性,同时涡虫对DMA毒性的反应灵敏,可用于监测水环境DMA污染.