白喉毒素A链基因在植物中的表达能抑制蛋白质合成

利用原生质体瞬间表达系统证实,即使用大量蓖麻毒素A链基因DNA导入诸葛莱(Ory-chophoragmus violaceus)原生质体,其蛋白质合成仍不被抑制。但是诸葛菜和灰叶烟草(Nicotiana plumbagenifolia)原生质体的蛋白质合成却容易被表达的白喉毒素A链所抑制。用CaMV 35 S启动子和Kozak序列控制的白喉毒素A链嵌合基因DNA在3h内能完全中止灰叶烟草原生质体蛋白质合成,此期间蛋白合成总量仅为正常时5%左右。     

从带烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组启动子的负链RNA产生正链RNA

克隆了能在植物中表达白喉毒素Ａ链基因（ＤＴＡ）负链ＲＮＡ的基因ＴＣＤＴＡＮ,这个基因的读码框５′端上游带有ＴＭＶ外壳蛋白基因５′端上游６３１个碱基,它的ＤＮＡ和ＴＭＶ－ＲＮＡ共转化烟草原生质体后,能抑制同时导入原生持体的堪因的表达,ＣＡＴ基因表达的抑制,是ＴＣＤＴＡＮ基因产生白喉毒素Ａ链蛋白的结果,ＴＣＤＴＮＡ基因上ＴＭＶ外壳蛋白基因５′端上游片段,是产生白喉毒素Ａ链ｍＲＮＡ的必要条件,只有用多量     

抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

研究食管癌细胞中Plk1表达被抑制后对化疗药物敏感性的影响,为进一步研究开发基于Plk1食管癌分子靶向治疗奠定基础。化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入3代表性的食管癌细胞系;采用RT-PCR和蛋白质印迹法确认siRNA对Plk1表达的抑制效果;MTT分析观察抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗药物敏感性的影响。半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制所使用的3代表性食管癌细胞系中Plk1的表达,抑制程度约90%。MTT分析结果表明,siRNA抑制Plk1表达后,能显著提高3食管癌细胞系对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。由此证实,siRNA介导的Plk1表达抑制能显著提高食管癌细胞对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。     

p75NGFR在哺乳动物神经细胞中的表达及其在诱导细胞…

将人人胎儿工前脑提取的总ＲＮＡ用ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆在ＰＵＣ１２中的人神经生长因子低亲和力受体基因分两步克隆到逆转录病毒表达载体ＰＸＴ－１中,经ＰＡ３１７细胞体外包装后收集假病毒上清感染大鼠小脑神经细胞系Ｒ２,在ＲＮＡ转录和蛋白质合成水平获得了表达。转染Ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２细胞在去血清培养时可以诱导细胞高亡的发生,此凋亡可被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺抑制,表明Ｐ７５Ｎ     

重组人胰岛素研究的回顾和展望

胰岛素（ｉｎｓｕｌｉｎ）是由Ａ和Ｂ两条多肽链组成的蛋白质激素,Ａ链含２１个氨基酸残基,Ｂ链由３０个氨基酸残基组成,共有三个二硫键,其中两个连接Ａ链和Ｂ链,一个在Ａ链内。胰岛素是在胰岛的β细胞中被合成和分泌,随血液循环到达靶组织,通过与其专一膜受体结合表现出生理功能的。胰岛素用于临床已有７０多年［１］,由于它是治疗糖尿病的特效药物和糖尿病患者在人口中的比例相当高,所以对胰岛素的需求量很大。这是促使人们不断改进老工艺和采用新的科技成果生产胰岛素的动力。ＤＮＡ重组技术的出现为胰岛素的生产开创了新的途径。第一个重组ＤＮＡ分子［２］报道后不久,Ｕｌｌｒｉｃｈ等［３］,Ｉｔａｋｕｒａ及其同事（１９７８）以及Ｖｉｌ－ｌａ－Ｋｏｍａｒｏｆｆ等（１９７８）就相继报道了胰岛素在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达成功,成为最早在微生物中被表达的哺乳动物蛋白质之一。人胰岛素是第一个被投放市场的生物工程蛋白质药物［４］。十多年来,人们在胰岛素基因的制备,表达体系的选择和改进,表达产物的加工处理等方面进行了卓有成效的探索和研究。不仅实现了人胰岛素在微生物中的生物合成并推向市场,而且推动和加快了其他哺乳动物蛋白质基因工程的研究进程。     

p75NGFR在哺乳动物神经细胞中的表达及其在诱导细胞凋亡中的功能

将从人胎儿基底前脑提取的总ＲＮＡ用ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆在ｐＵＣ１２中的人神经生长因子低亲和力受体（ｐ７５ＮＧＦＲ）基因分两步克隆到逆转录病毒表达载体ｐＸＴ－１中,经ＰＡ３１７细胞体外包装后收集假病毒上清感染大鼠小脑神经细胞系Ｒ２,在ＲＮＡ转录和蛋白质合成水平获得了表达。转染了ｐ７５ＮＧＦＲ的Ｒ２细胞在去血清培养时可以诱导细胞凋亡的发生,此凋亡可被ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺抑制。表明ｐ７５ＮＧＦＲ诱导的细胞凋亡过程中有活跃的基因表达参与。     

钙与钙调素对柑橘原生质体抗冻性的影响

钙与钙调素对柑橘原生质体低温锻炼过程中抗冻力的获得有影响。加钙螯合剂或钙调素拮抗剂ＴＦＰ,能明显抑制柑橘原生质体抗冻性的表达。钙离子载体Ａ２３１８７可提高未经低温锻炼的原生质体抗冻力,但该作用在钙调素拮抗剂ＴＦＰ参入下则减弱,表明原生质体抗冻力的表达受钙和钙调素的调节。     

两个缺陷型TMV粒子在烟草中的互补表达

根据对ＴＭＶ高效复制和基因表达的顺式作用元件的分析,在体外重组包装了２个缺失型ＴＭＶ粒子：ＴＭＶＲＰ和ＴＭＶＣＰ。前者缺失了ＴＭＶ外壳蛋白ＣＰ基因的３′端及后序区域,后者缺失了大部分复制酶基因。把两者分别或共同电击感染烟草原生质体：１．用ＣＰ抗体进行免疫印渍检测,单独感染的原生质体内的ＣＰ在１６小时内无增加,而在共同感染的原生质体内,ＣＰ在感染２小时后就开始明显增加。２．用ＲＴ一两次ＰＣＲ法专一地检测新生负链ＲＮＡ的合成情况,在单独感染的原生质体内没有检测到,但在混合感染的原生质体内在感染１小时后就检测到ＣＰ基因特异的负链ＲＮＡ的形成,并用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交得到进一步验证。这些结果表明,复制酶缺失型ＴＭＶＣＰ内的ＣＰ基因不能表达,但可以在ＴＭＶＲＰ存在时,通过其所表达的复制酶互补作用得到复制从而有效表达．     

抗癌胚抗原嵌合重链与核心链霉亲和素基因的融合及表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单克隆抗体的重链可变区与人的恒定区（Ｃγ３） 连接, 制备抗癌胚抗原嵌合重链用于放免治疗及其他导向治疗, 可减少人抗鼠抗体反应（ＨＡＭＡ） 。为纯化及核素标记抗体, 将嵌合重链基因与核心链霉亲和素基因融合。融合基因在大肠杆菌得到高效表达, 表达量占菌体总蛋白的２４ ％ 。ＳＤＳＰＡＧＥ 和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为７０ ｋＤ, 与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。以ＨＲＰ标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹, 在７０ ｋＤ 处可见表达条带, 表明融合蛋白能特异性地与生物素结合, 使嵌合重链经生物素柱进行廉价纯化成为可能。表达产物在胞内主要以不溶性的包含体存在, 经变性和复性处理后, ＲＩＡ 表明表达产物具有结合其特异性抗原ＣＥＡ的能力。     

抗癌胚抗原嵌合重链与核心链霉亲和素基因的融合及 …

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单克隆抗体的重链可变区与人的恒定区（Ｃγ３）连接,制备抗癌胚抗原嵌合重链用于放免治疗及其他导向治疗,可减少人抗鼠抗体反应（ＨＡＭＡ）。为纯化及核素标记抗体,将嵌合重链基因与核心链霉亲和素基因融合。融合基因在大肠杆菌得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为７０ｋＤ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。以ＨＲＰ标记的生物素作为     

重组蓖麻毒素A链与几种天然单链核糖体失活蛋白的活性研究

采用ｐＥｘＳｅｃⅠ载体系统进行了蓖麻毒素Ａ链的原核表达,经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步纯化后,获得了纯度约８０％的重组蓖麻毒素Ａ链．将其与几种天然单链核糖体失活蛋白进行了超螺旋ＤＮＡ裂解研究和无细胞体系中蛋白合成抑制试验,结果表明,重组蓖麻毒素Ａ链具有类似于天然单链核糖体失活蛋白的活性,但两种测活方法之间没有明显的相关性     

芜菁原生质体的分离及绿色荧光蛋白的瞬时表达

目的：分离芜菁叶片原生质体,建立蛋白质在芜菁原生质体的瞬时表达系统。方法：以津田芜菁成叶为试材,酶解分离原生质体;通过PEG介导的转化,将编码绿色荧光蛋白（GFP）的瞬时表达载体转入原生质体中,用激光扫描共聚焦显微镜检测原生质体中GFP的表达情况。结果：分离出大量的津田芜菁原生质体,并获得了较高的转化效率,GFP在整个原生质体中都有表达。结论：建立了津田芜菁原生质体瞬时表达系统。     

对烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组RNA生成机制的进一步研究

用原生质体瞬间表达的方法证明,在烟草细胞中ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ的生成,不是通过核酸酶在基因组ＲＮＡ上直接切割,也不是通过在生成负链ＲＮＡ时预成性终止,再从这种负链ＲＮＡ终止部位起始产生的,ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ,是ＴＭＶ识别利用负链ＲＮＡ中间的亚基因组启动子后产生的,这个启动子位于外壳蛋白读码框５′端２５６碱基范围之内,但大于４８个碱基,虽然ＴＭＶ能利用单链的负链ＲＮＡ上的亚基因组启     

用毒蛋白控制植物病毒病害的基因工程设想

本文提出利用抑制植物蛋白质合成的毒蛋白基因读码框和植物病毒亚基因组启动子组成嵌合基因,预先在植物中表达负链RNA,在病毒侵染细胞中变为正链毒蛋白RNA,产生毒蛋白,迅速中止该细胞蛋白质合成,从而达到完全控制植物病毒病的植物基因工程工程设想。白喉毒素A链基因读码框是一种对多种植物有用的适合于本设想的毒蛋白基因读码框。烟草中负链毒蛋白RNA不会自动变为正链RNA。TMV外壳蛋白亚基因组是按BMV RNA_4的方式生成;它的启动子可以用作TMV的启动开关,使植物细胞中白喉毒素A链负链RNA特异地转变为毒蛋白mRNA。     

渗调物质和fluridone对离体花生胚蛋白质合成的调节

离体花生胚发育过程中,渗透调节物质提高了胚内源ＡＢＡ含量,促进了贮藏蛋白质花生球蛋白和伴花生球蛋白Ⅱ两个组分的合成,诱导和促进ＬＥＡ蛋白的合成,内源ＡＢＡ合成抑制剂ｆｌｕｒｉｄｏｎｅ抑制了渗调物质的作用。     

脱落酸和抑制剂对萌发花生子叶肽链内切酶和花生球蛋白降解的影响

脱落酸（Ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ,ＡＢＡ）抑制花生种子萌发的作用与核酸和蛋白质合成抑制剂的作用不同．ＡＢＡ（１００μｍｏｌ／Ｌ）在萌发零时施用,明显抑制肽链内切酶活性和同工酶表现以及花生球蛋白降解,萌发４８ｈ施用ＡＢＡ（１００μｍｏｌ／Ｌ）只降低肽链内切酶活性．ＡＢＡ的抑制作用不依赖于核酸和蛋白质合成．核酸合成抑制剂（３＇－脱氧腺苷,放线菌素Ｄ,５－氟尿嘧啶）和蛋白质合成抑制剂（亚胺环己酮）只能部分降低肽链内切酶活性,对肽链内切酶同工酶表现和花生球蛋白降解无明显影响．实验结果表明花生子叶肽链内酶不是在种子萌发过程中重新（ｄｅｎｏｖｏ）合成,文中讨论了肽链内切酶活性调节和花生贮藏蛋白降解的起始模式．     

油菜素内酯促进绿豆上胚轴伸长与蛋白质和核酸合成的关系

用饲喂蛋白质和核酸合成的放射性前体［３ Ｈ］－Ｐｈｅ、［３ Ｈ］－尿嘧啶和［３ Ｈ］－胸腺嘧啶证实了油菜素内酯（ＢＲ）能促进绿豆上胚轴的生长和蛋白质、ＲＮＡ 及ＤＮＡ 的合成。用蛋白质和核酸合成抑制剂（ＣＨ、Ａｃｔ．Ｄ、５－Ｆｕ）进一步探讨它们对上胚轴伸长的抑制作用与蛋白质、ＲＮＡ、ＤＮＡ 和ｍ ＲＮＡ 合成之间的关系。证明了上胚轴的伸长依赖于蛋白质和核酸的合成,尤其是依赖于ｍ ＲＮＡ 的合成。说明ＢＲ是在转录水平上调节基因的表达,进而促进上胚轴的伸长     

克鲁维酵母与酿酒酵母属间原生质体融合构建高温酵母菌株

通过ＰＥＧ诱导碘乙酸灭活呼吸缺陷克鲁维酵母原生质体与酿酒酵母原生质体融合,获得４５℃发酵产酒率高达８．７％的高温酵母菌株ＡＹ００６。线粒体缺失和氯霉素抑制可显著降低高密度原生质体回复抑制效应。对融合子菌落形态,同工酶性质和高温发酵等方面分析,融合株表达了耐温和高产酒率双亲优良性状,证实其杂种特征。     

渗调物质和fluridone对离体花生胚蛋白质合成的调节

离休花生胚发育过程中,渗透调节（简称渗调）物质提高了胚内源ＡＢＡ含量,促进了贮藏蛋白质花生球蛋白和伴花生球蛋白Ⅱ两个组分的合成,诱导和促进ＬＥＡ蛋白的合成,内源ＡＢＡ合成抑制剂ｆｌｕｒｉｄｏｎｅ抑制了渗调物质的作用。     

南瓜花粉萌发期间蛋白质含量及合成活力的变化

南瓜（Cucurbita moschata Duch.)花粉离体萌发过程中,由于壁蛋白及细胞质中部分蛋白质的释放,蛋白质含量有所下降,萌发过程中具有RNA及蛋白质合成活力,RNA合成活力随培养时间延长而下降,其大部分的合成活力可被α－鹅膏蕈碱所抑制。蛋白质的合成量随萌发时间延长而增长,合成活力几乎完全被亚胺环己酮抑制,为α－鹅膏蕈碱部分抑制,说明贮藏mRNA与新合成mRNA共同指导蛋白质的新合成,离体条件下,亚胺环己酮和α－鹅膏蕈碱抑制花粉管的生长,在整体条件下,亚胺环己酮抑制花粉萌发与花粉管生长,说明蛋白质和RNA的新合成对花粉管的持续生长是必需的。