半边旗二萜类成分PAG通过ROS诱导肝癌细胞凋亡的作用研究

探讨半边旗二萜类成分Pteisolic acid G(PAG)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及作用机制。用不同浓度的PAG处理HepG2细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;采用PI单染法检测细胞周期分布;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western Blotting检测细胞内mRNA和蛋白表达情况;采用DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,采用ROS抑制剂乙酰半胱氨酸(NAC)评价PAG细胞增殖抑制作用对ROS的依赖性。结果表明,在24 h、48 h和72 h时,PAG可剂量依赖性地抑制HepG2细胞的增殖(p0.05),IC_(50)分别为64.8μmol/L,38.5μmol/L和24.8μmol/L;用药24 h时PAG可剂量依赖性地使HepG2细胞阻滞在G_2/M期,同时增加HepG2细胞凋亡率(p0.05);PAG可剂量依赖性地降低HepG2细胞内Bcl-2 mRNA和caspase 3、PARP、Bcl-2蛋白的表达(p0.05),增加Bax mRNA和actived-caspase 3、cleaved-PARP、Bax蛋白的表达(p0.05)。当使用1 mmol/L的ROS抑制剂NAC预处理HepG2细胞时,PAG对HepG2细胞增殖抑制作用被显著阻断。上述结果表明,半边旗二萜类成分PAG可提高Bax/Bcl-2的基因和蛋白表达比值,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,该作用可能是通过升高细胞内ROS水平来实现的。     

A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其pHi和[Ca2+]i变化相关

以l临床用药剂量(30μmol/L)的顺铂处理敏感的人肺腺癌细胞A549和抗顺铂的A549/DDP细胞,在相同条件下培养.对培养不同时间的两株细胞DNA琼脂糖凝胶电泳分析的结果表明,前者在培养12h后即呈现DNA梯子,而后者在培养48h后却未见凋亡特征.用流式细胞计检测其凋亡峰也获得相似的结果.当测定与凋亡相关的生物化学和生物物理变化时发现对顺铂敏感的A549细胞的线粒体膜电势显著降低,胞内更加酸化且胞内钙离子浓度升高;而抗顺铂药物的A549/DDP细胞的线粒体膜电势和pH值却维持在相对较高的水平,而其胞内钙离子浓度随培养时间的延长下降.这些结果表明,抗顺铂的人肺腺癌A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其胞内的相对碱化和较高的线粒体膜电势,以及胞内钙离子浓度的降低相关.这些特性可能参与了A549/DDP的顺铂耐药性的调节.     

Ru-486、安宫黄体酮、环孢菌素、维拉帕米对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC 1/DDP耐药性的逆转

目的 在同一实验系统中比较Ru-486、MPA、VP、CsA对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP耐药性的逆转作用并对其作用机制进行探讨,为临床克服耐药提供参考依据.方法 采用MTT法从细胞代谢,DNA凝胶电泳从细胞凋亡方面系统观察比较DDP、Ru-486、MPA、VP、CsA 5种药物对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的影响及相互关系,检测上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内GSH-ST和GSH-Px活性的变化,并采用westernblotting以Bcl-2抗体为分子探针对上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内Bcl-2基因的表达进行测定对其逆转机制进行探讨.结果 1)Ku-486、CsA、MPA对COC1/DDP有直接抑制作用,其抑制率随浓度增高进行性升高,、而VP对COC1/DD,P没有直接抑制作用.和DDP联用时,Ru-486、MPA、VP、CsA都能显著增强COC1/DDP对DDP的敏感性,达到一定浓度后,可以完全逆转COC1/DDP对DDP的耐药性.这种逆转是通过抑制细胞代谢、诱导细胞凋亡的结果.2)单纯2.5μg/ml的DDP能使GSH-Px及GST活力上升,除VP外,Ru-486等药物可降低GSH-Px和GST活力,与DDP联用时亦如此.提示,Ru-486、CsA、MPA可以通过抑制GSH转移酶系统阻止对细胞损伤的修复而达到对耐药性的逆转.3)单独的DDP、Ru-486等药物非但对Bcl-2的表达没有抑制作用,反而促进了其表达,以MPA最甚.与DDP联用时,却出现了一个有趣的现象,即可以抑制Bcl-2的表达,Ru-486与DDP联用时Bcl-2的表达几乎完全被阻截.结论 :VP、Ru-486、CsA和MPA对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的耐药性有确切逆转作用.其逆转机制可能与降低GSH转移酶系统活性有关.当与DDP联用时可以通过降低Bcl-2蛋白表达来逆转耐药.     

姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜黄素联合顺铂对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素、顺铂和姜黄素联合顺铂处理人骨肉瘤细胞MG-63不同时间,通过MTT法检测其对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测其对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测其对MG-63细胞凋亡的影响。结果:单用姜黄素或顺铂均可以时间和浓度依赖性方式抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖。与空白对照组相比,单用10μmol/L姜黄素和2、4μmol/L顺铂可抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.05);而与姜黄素和顺铂单用处理相比,10μmol/L姜黄素分别与2、4μmol/L顺铂联合应用,可更显著抑制MG-63细胞的增殖,降低其克隆形成率并提高细胞凋亡率(P<0.01)。结论:姜黄素联合顺铂与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63细胞的增值,促进其凋亡,两药对骨肉瘤细胞的杀伤效应具有一定的协同性。     

A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其pHi和［Ca2+］i变化相关

以临床用药剂量(30 μmol/L)的顺铂处理敏感的人肺腺癌细胞A549和抗顺铂的A549/DDP细胞,在相同条件下培养.对培养不同时间的两株细胞DNA琼脂糖凝胶电泳分析的结果表明，前者在培养12 h后即呈现DNA梯子，而后者在培养48 h后却未见凋亡特征.用流式细胞计检测其凋亡峰也获得相似的结果.当测定与凋亡相关的生物化学和生物物理变化时发现对顺铂敏感的A549细胞的线粒体膜电势显著降低，胞内更加酸化且胞内钙离子浓度升高；而抗顺铂药物的A549/DDP细胞的线粒体膜电势和pH值却维持在相对较高的水平，而其胞内钙离子浓度随培养时间的延长下降.这些结果表明，抗顺铂的人肺腺癌A549/DDP细胞的抗凋亡特性与其胞内的相对碱化和较高的线粒体膜电势,以及胞内钙离子浓度的降低相关.这些特性可能参与了A549/DDP的顺铂耐药性的调节.     

纳秒脉冲电场对人卵巢癌顺铂敏感及耐药细胞的凋亡诱导效应及机制研究

利用纳秒脉冲电场(nanosecond pulsed electric fields,ns PEFs)治疗肿瘤具有潜在优势。该研究探讨了纳秒脉冲电场对体外培养的人卵巢癌顺铂敏感细胞COC1及顺铂耐药细胞COC1/DDP的生长抑制、凋亡诱导效应及其机制。CCK-8法分析显示,纳秒脉冲电场降低COC1及COC1/DDP细胞存活率,而且抑制效应呈明显时间依赖效应。流式细胞术检测结果结合Hoechst 33342荧光染色结果表明,纳秒脉冲电场可诱导COC1及COC1/DDP细胞发生凋亡。JC-1荧光染色及caspase-3蛋白酶活性检测表明,纳秒脉冲电场处理可引起COC1及COC1/DDP细胞线粒体膜电位降低及caspase-3活性增强。流式细胞术检测细胞周期显示,纳秒脉冲电场可将COC1细胞周期阻滞于S期。以上研究结果揭示,纳秒脉冲电场可以抑制COC1及COC1/DDP细胞增殖,诱导细胞凋亡,线粒体途径凋亡为其可能机制。     

2M3P灵菌红素粗提物对人食管癌Eca-109细胞抑制作用

采用MTT法考察了2M3P(2-甲基-3-戊基)灵菌红素粗提物对食管癌Eca-109细胞的增殖抑制作用,并通过Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明,2M3P灵菌红素粗提物对食管癌Eca-109细胞的增殖具有明显的抑制作用(P0.05),并表现为浓度和时间依赖性;2M3P灵菌红素粗提物作用食管癌Eca-109细胞24、48、72和96 h后的IC50分别为1026.3180、435.2020、267.7096μg/mL和64.0734μg/mL;粗提物对食管癌Eca-109细胞的诱导凋亡同样呈剂量依赖性,与顺铂(DDP)干预组相比其具有更显著的诱导凋亡作用。2M3P灵菌红素含量≥30%的粗提物对人食管癌Eca-109细胞具有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用。     

苦参素对人肝癌细胞顺铂敏感性的影响

[目的]观察苦参素注射液对人肝癌细胞株HepG2/DDP顺铂敏感性的影响,并探讨其机制。[方法]取人耐顺铂肝癌细胞株HepG2/DDP培养,每孔分装1.5×10^(6)个细胞。对照组加入2 mg/L顺铂,低、中、高剂量组分别加入2 mg/L顺铂+0.75 mg/mL苦参素注射液、2 mg/L顺铂+1.5 mg/mL苦参素注射液、2 mg/L顺铂+3 mg/mL苦参素注射液,均继续培养72 h。[结果]培养72 h后,对照组细胞贴壁生长状态良好,3剂量组均可导致细胞株形态学改变;3剂量组可提高增殖抑制率和细胞凋亡率(P<0.05),且高剂量组效果最佳[(25.55±3.24)%、(32.93±3.62)%、(39.32±4.15)%;(26.95±1.58)%、(34.36±3.07)%、(42.46±4.47)%](P<0.05);3剂量组均可降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平(P<0.05),且高剂量组效果最佳[(0.143±0.007)、(0.143±0.010)](P<0.05)。[结论]苦参素注射液可增强人肝癌细胞株HepG2/DDP顺铂化疗敏感性,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,且3 mg/mL苦参素注射液的效果更佳,推测与控制JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平有关。     

富含miR-30a的牛初乳组分通过抑制癌细胞自噬促进顺铂化疗的肿瘤消亡

本实验首次发现牛初乳中富含miR-30a.取牛初乳中富含miR-30a的组分处理用顺铂化疗的癌细胞,能显著地抑制癌细胞自噬,促进癌细胞凋亡:单独使用顺铂化疗18 h的癌细胞凋亡率为12.5%,而化疗的同时施加富含miR-30a的牛初乳组分18 h后癌细胞凋亡率为56.5%.用这种富含miR-30a的牛初乳组分饲喂顺铂化疗的荷瘤小鼠,能更有效地抑制肿瘤生长:化疗小鼠饲喂牛初乳组分后,肿瘤直径自6 mm缩小为4.5 mm,而单独用顺铂化疗的肿瘤直径约8 mm.因此富含miR-30a的牛初乳组分能增进化疗药物的疗效.施用牛初乳组分,还可减少化疗药物的用量:单独用顺铂处理细胞18 h需20 mg/L剂量,加牛初乳组分后10 mg/L即可取得明显凋亡效果;单独用顺铂化疗荷瘤小鼠10天每次需500μg,而添加富含miR-30a的牛初乳组分后,顺铂剂量减半即可明显缩小肿瘤.     

重组骆驼蓬脂转移蛋白对宫颈癌HeLa细胞化疗的增敏作用

[目的]研究重组骆驼蓬脂转移蛋白(recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)协同对宫颈癌He La细胞的抑制作用及可能的作用机制。[方法]四甲基偶氮咗蓝(MTT)法检测He La细胞生长的抑制率;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的变化情况。[结果]r Ph LTP与DDP联合应用后与相应的DDP组相比,对细胞生长的抑制率显著增强(P0.01),低浓度r Ph LTP联合2.5μg/m L顺铂对He La细胞的抑制率为(42.50±0.059)%,远高于高浓度顺铂(10μg/m L)对He La细胞的抑制率(36.88±0.134)%,细胞的凋亡率显著增加(P0.01),细胞内ROS极明显升高(P0.001)。[结论]r Ph LTP能够显著增强顺铂对He La细胞的化疗敏感性(P0.001),这种作用可能与r Ph LTP增强顺铂诱导细胞内活性氧的产生导致细胞凋亡有关。     

阿霉素联合顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡实验研究

目的:研究化疗药物阿霉素(ADM)联合顺铂(DDP)对宫颈癌CaSki细胞株的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的相互作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度阿霉素、顺铂单独和联合应用对宫颈癌CaSki细胞的增殖抑制作用;同时RT-PCR法在mRNA水平上检测Bcl-2和TNF-α基因表达量的变化。结果:两种药物单独应用均可抑制CaSki细胞的增殖,联合用药(<12μg/mL)时具有协同抑制作用并与各药物单一应用比较具有显著性差异(P<0.05);阿霉素、顺铂作用CaSki细胞后能上调TNF-α基因和下调Bcl-2基因的表达。结论:宫颈癌CaSki细胞在化疗药物阿霉素和顺铂两药联合作用下通过诱导TNF-α和Bcl-2 mRNA表达量的变化发挥协同抑制作用,同时TNF-α的高表达增强了化疗药物阿霉素和顺铂诱导肿瘤细胞凋亡的敏感性,其机制主要与凋亡诱导效应有关。     

单宁酸联合顺铂增强肝癌HepG2细胞IRE1-XBP1通路的激活水平

本文主要研究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)对肝癌HepG2细胞内质网应激IRE1-XBP1通路的影响。用180μM单宁酸、0.9μg/m L顺铂单独用药或者联合用药处理肝癌HepG2细胞24 h或48 h后,应用流式细胞技术测定HepG2细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR技术(q-RT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blot)技术检测IRE1α和XBP-1分子的表达水平。MTT结果显示,单宁酸和顺铂均能显著抑制HepG2细胞的生长,且均呈剂量性依赖;二者联合用药能够显著增加HepG2细胞的生长抑制率;流式细胞术结果显示,单宁酸与顺铂联合用药能够显著抑制HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡的发生;q-RT-PCR及Western blot结果显示,单宁酸与顺铂联合用药能显著上调细胞IRE1α和XBP-1的表达水平。结果表明单宁酸能够联合顺铂增强肝癌HepG2细胞内质网应激IRE1-XBP1通路的激活水平,提示IRE1-XBP1通路可能是单宁酸和顺铂协同抗肝癌HepG2细胞的分子机制之一。     

PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用

目的:探讨罗格列酮(ROZ)对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用.方法:20、50、100 μmol/LROZ作用LNCAP细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响.采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化.结果:ROZ(20μmol/L至100μmol/L)对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用,以100μmol/L浓度最为明显.ROZ(100μmol/L)作用72h后最高增殖抑制率达78.58%.流式细胞仪检测结果显示,LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势;100μmol/LROZ作用72h后凋亡细胞数达48.11%.与此一致,TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多,Western Blot检测显示,ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平.结论:ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用,有望成为前列腺癌患者新的治疗方法.     

雷公藤红素对FADU细胞增殖抑制和促进凋亡作用

目的:探索不同浓度雷公藤红素(celastrol)对下咽癌FADU细胞增殖抑制及促进其凋亡的机制。方法:用不同浓度(0μmol/L,1μmol/L,3μmol/L,5μmol/L)雷公藤红素作用于FADU细胞,倒置显微镜下观察雷公藤红素干预后细胞形态变化情况;CCK-8法检测不同时间段(24、48、72 h)药物干预后FADU细胞的增殖变化;流式细胞仪检测雷公藤红素干预24 h后细胞凋亡率变化;Western-Blot检测不同药物浓度作用24 h后FADU细胞PI3K信号通路中与凋亡相关的关键蛋白的表达变化情况。结果:与对照组相比,在倒置显微镜下FADU细胞形态明显改变,细胞数量明显减少,细胞边界模糊不清,漂浮细胞增多,而随着用药浓度的增加细胞的增殖能力被显著抑制,PI3K、AKT、P-m TOR、Bcl-2蛋白表达明显减少,并且肿瘤细胞的凋亡率明显增高。结论:雷公藤红素对FADU细胞具有显著的增殖抑制效果,同时能够促进细胞凋亡,其原理主要与通过下调PI3K信号通路凋亡相关蛋白的表达有关。     

顺铂诱导人宫颈癌细胞系P27表达及其超微弱发光测定的意义

目的:探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响.方法:选择人宫颈癌细胞系Hela分为两组,分别采用MTT比色法分析测定顺铂处理Hela细胞的浓度;免疫组化SP法分别检测Hela细胞中P27蛋白表达;流式细胞仪分析加药前后细胞周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测细胞的超弱发光强度.结果:顺铂处理Hela细胞48h的IC50值为3mg/L,当DDP浓度,在3mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P<0.001);流式细胞仪分析细胞周期可见与Hela细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少(P<0.01);从细胞调亡检测显示Hela与Hela+DDP相比,细胞凋亡率在不同时间点明显升高,在24h,48h,72h结果分别为(11.4±5.8、21.8±7.9、32.5±11.6)%.免疫组化结果显示Hela+DDP与Hela细胞相比细胞膜上P27蛋白高表达;在10-4mol/L鲁米诺及0.3%的双氧水(H2O2)条件下Hela细胞超弱发光强度高于用Hela+DDP细胞9P<0.001).结论:超弱发光能够快速、准确、有效地反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动,也可用于筛选敏感的化疗药物.     

康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养宫颈癌Siha细胞,分别将康莱特(浓度为1,2,4,6,8 mg/mL),顺铂(浓度梯度为1.5,3,6,9,12μg/mL),单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h用噻唑蓝(MTT法)检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测康莱特组和顺铂组细胞24h凋亡率,选取合适的药物浓度(康莱特6 mg/mL,顺铂3μg/mL),进行联合用药,加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果:①MTT法显示加药后两组的24h、48h,宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组(P0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。②联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P0.01)。结论:康莱特、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且康莱特联合顺铂的作用要显著高于单独用药,康莱特与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

伊立替康联合去甲斑蝥素对人胃癌细胞作用的考察及协同作用机制研究

研究了伊立替康(CPT-11)联合去甲斑蝥素(NCTD)对人胃癌细胞BGC-823增殖的影响及协同作用机制.分别利用CPT-11 30、60、90、120、150μmol/L,NCTD 30、60、90、120、150μmol/L和两药按上述浓度1∶1联用,以及两药上述浓度完全交叉组合作用BGC-823细胞24、48和72 h,并且以不同序贯方式作用BGC-823细胞24 h.MTT法检测BGC-823细胞的增殖,采用中效原理评价两药联合作用;流式细胞术测定CPT-11 60μmol/L、NCTD 60μmol/L和联合用药(60∶60)μmol/L,以及不同序贯方式作用BGC-823细胞24 h后细胞周期及凋亡的情况;Western blot法检测CPT-11 30、60μmol/L,NCTD 30,60μmol/L和联合用药(30∶30,60∶60)μmol/L作用BGC-823细胞24 h后Pdcd4和p53蛋白表达水平.结果显示:CPT-11及NCTD联合用药比单独用药对细胞增殖的抑制作用增强,IC50明显减小(P0.05),单独使用CPT-11或NCTD作用24、48和72 h时的IC50分别是联合使用时的2.83、3.15、2.19倍以及2.66、3.11、2.45倍,并且两药联合用药具有协同作用效应;两药合用24 h时先给CPT-11方案抑制作用优于先给NCTD方案,且优于同时给药方案(P0.05);CPT-11 60μmol/L作用24 h引起BGC-823细胞S和G2-M期阻滞(P0.01),NCTD 60μmol/L作用24 h引起细胞G2-M期阻滞(P0.05),并诱导细胞凋亡(P0.05),联合用药(60∶60)μmol/L作用24 h,主要引起细胞G2-M期阻滞(P0.01),与先给NCTD 6h方案及同时给药相比,先给CPT-11 6h方案主要引起细胞S期阻滞增加(P0.05)以及细胞凋亡增加;CPT-11 30、60μmol/L作用12 h后Pdcd4上调表达,p53下调表达(P0.05),NCTD 30、60μmol/L作用12 h后Pdcd4下调表达,p53上调表达(P0.05),联合用药(30∶30,60∶60)μmol/L作用24 h后Pdcd4及p53蛋白表达均上调(P0.05).上述结果表明:CPT-11联合NCTD对人胃癌BGC-823细胞有协同抑制作用,其机制主要是诱导细胞G2-M期阻滞,并与抑癌基因蛋白Pdcd4及p53上调表达有关;两种药物联用时序贯次序对联合作用有影响,先给CPT-11方案要优于先给NCTD方案及同时给药方案,其机制主要是引起S期阻滞增加以及细胞凋亡增加;抑癌基因蛋白Pdcd4与p53之间可能存在负调控关系.     

沉默MDR1基因表达逆转肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

本研究以A549/DDP细胞为实验对象,利用shRNA(short hairpin RNA)沉默MDR1基因,逆转人肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。构建3种靶向MDR1基因重组干扰载体,稳定转染A549/DDP细胞,qRT-PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blotting检测MDR1蛋白表达水平,MTT法检测细胞对顺铂的敏感性。结果显示成功构建了3种靶向MDR1的重组表达载体p2.1-1、p2.1-2和p2.1-3。3种干扰表达载体均能有效沉默A549/DDP细胞MDR1基因表达,其中p2.1-3对MDR1沉默效果最好,对mRNA和蛋白的沉默效率分别为51.47%和53.24%。转染p2.1-3的细胞对顺铂的IC50由(72.08±7.00)μmol/L降至(31.89±3.39)μmol/L,逆转率达到(67.60±5.70)%。这些结果表明靶向MDR1的重组干扰载体均能够有效抑制MDR1表达,其中p2.1-3干扰效果最佳并且能逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

姜黄素类似物EF24诱导A549细胞自噬及凋亡关系的研究

从细胞自噬及凋亡关系角度探讨姜黄素类似物EF24对人肺腺癌细胞（A549）的杀伤机理。选用不同浓度的EF24对体外培养的A549处理,采用MTT方法检查细胞存活率,吖啶橙染色观察细胞形态,蛋白质免疫印迹（Western blot）方法检测与细胞自噬及凋亡相关蛋白的表达及对AMPK-mTOR-S6K信号通路的影响。结果显示,EF24作用24 h的IC50为8.5μmol/L,对A549细胞生长抑制作用优于姜黄素,而接近顺铂。自噬及凋亡蛋白检测显示,在4μmol/L、8μmol/L时A549细胞以自噬为主,在16μmol/L时以凋亡为主;加入100 nmol/L自噬抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）后,细胞存活率同比升高。同时还发现,随着EF24浓度的增加,细胞内AMPK-Thr172磷酸化水平上升,mTOR-Ser2481、S6K-Thr389磷酸化水平的下调。由此可见,EF24可通过AMPK的激活下调mTOR-S6K途径抑制细胞生长,在EF24浓度4~8μmol/L范围内,自噬对凋亡起到促进作用。     

锰对PC12 细胞的增殖抑制与凋亡研究

目的:研究锰作用下PC12细胞的增殖抑制作用与凋亡相关的形态学、生化指标改变。方法:用200,400,600,800μmol/LMnCl2的培养液,分别作用对数生长期PC12细胞1,2,3,4d后,用MTT筛选锰的细胞毒性剂量;透射电镜观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl2对PC12细胞基因组DNA的影响。结果:MTT实验显示200-800μmol/L MnCl2作用4天对PC12有显著的抑制作用,呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl2作用4d对PC12的抑制率可达50%以上。600μmol/L MnCl2作用4d电镜可见细胞凋亡,同样条件下细胞DNA碎片化。结论:PC12细胞在锰作用下发生增殖抑制,原因是锰诱导PC12细胞凋亡。