大叶蛇葡萄无色花色素还原酶基因的克隆及其序列分析

无色花色素还原酶(LAR)是植物类黄酮合成途径中一个关键酶。本研究根据大叶蛇葡萄转录组测序得到了无色花色素还原酶(LAR)基因序列,通过RT-PCR技术克隆得到LAR基因cDNA全长,并对该序列进行生物信息学分析。结果表明:大叶蛇葡萄LAR基因cDNA全长为1 267 bp,包含一个长度为1 170 bp的开放阅读框,编码389个氨基酸,理论蛋白分子质量为42.38 kD,等电点为7.73。氨基酸多序列比对发现,该序列与同科植物葡萄等具有较高的同源性。生物信息学分析表明LAR为亲水性蛋白,不含信号肽,很可能定位于细胞质。本研究为进一步研究LAR基因的功能,阐明该基因在大叶蛇葡萄类黄酮合成路径中的作用提供了新的线索。     

一种提取葡萄芽中总RNA的方法

以葡萄品种‘Perletts‘‘(Vitis vinifera)冬芽为材料,研究了提取葡萄芽总RNA的方法,同时指出提取RNA时的注意事项。该方法具有可靠性高,易于大量制备,所提取的RNA质量高等优点。     

葡萄植株中白藜芦醇及葡萄素含量动态积累规律研究

对葡萄生长期间不同部位中主要活性成分白藜芦醇和葡萄素含量进行了分析,探索了活性成分代谢积累规律.以湖南省境内的主要葡萄品种红地球的主藤、侧藤、支藤、根、叶、叶柄为研究对象,从2010年4月到2011年1月考察了白藜芦醇与葡萄素含量的动态变化,采用超声波辅助甲醇提取法对实验材料进行白藜芦醇和葡萄素提取,以高效液相色谱法进行白藜芦醇和葡萄素含量测定来考察白藜芦醇和葡萄素在葡萄植株中动态变化的规律.结果表明:葡萄植株中不同部位白藜芦醇和葡萄素含量差异显著,主藤＞侧藤＞支藤＞根＞叶片≈叶柄;各部位白藜芦醇和葡萄素在生长期含量变化趋势是先升后降,尤其是葡萄素变化趋势很明显,白藜芦醇变化趋势较小,各部位芪化物含量在9～10月含量处于峰值.     

蚜虫中携带马铃薯卷叶病毒检测方法的改进

马铃薯卷叶病毒( Potato leafroll virus,PLRV)对马铃薯生产的危害极大,是一种极为重要的马铃薯病毒病。 RT－PCR是马铃薯卷叶病毒检测较为常用的方法,该方法检测准确率高、成本低、适用范围广。但在实际生产中其检测对象多为染病植株,对PLRV传播的主要介体桃蚜( Myzus persicae)的检测,则由于蚜虫体积小、RNA提取难度大、成本高、且不能复检,因而在生产中不能被广泛使用。该研究以马铃薯感病植株和带毒蚜虫为材料,利用改进的RNA提取方法从它们中提取到PLRV的RNA,并以CP 基因设计特异性引物,进行PCR检测。结果表明：该方法提取的RNA完整性好,可用于蚜虫中PLRV检测,且同样适用于对马铃薯感病植株的检测。另外,通过对田间有翅蚜和无翅蚜携带 PLRV 情况进行检测发现,无翅蚜 PLRV 检出率为100％,有翅蚜PLRV检出率也高达60％,证明该体系在生产中的实用性。该研究使用改进的RNA提取方法,提取蚜虫中RNA,并利用RT－PCR进行了PLRV检测,与以前的方法相比简单实用,可被应用于生产检测中。该研究结果为马铃薯生产中PLRV的防控提供了一种新的手段。     

一种大量提取红豆杉中总RNA的方法研究

旨在确定高质量红豆杉中总RNA的提取和纯化工艺条件。以湖南长沙红豆杉叶为材料,以Trizol和CATB两种植物RNA通用提取方法为基础,以RNA的浓度、OD_(260)/OD_(280)及OD_(260)/OD_(230)的比值为标准,考察提取方法、提取试剂、提取时间等因素对RNA提取率的影响,优化了红豆杉叶中总RNA的提取方法;通过对比PVP法、β-巯基乙醇法、高盐沉淀法、低浓度乙醇沉淀法、凝胶柱层析法五种不同纯化方法来探讨对红豆杉RNA的影响。考虑到成本的问题,选择使用Trizol法提取红豆杉总RNA,确定了较优的提取条件:红豆杉叶与Trizol提取液的作用体积确定为3∶40;裂解时间确定为5 min;氯仿与水液的作用体积确定为1∶5。实验表明凝胶柱层析法能显著的提高红豆杉总RNA的纯度并能得到富含mi RNA的小分子RNA。最终可得到浓度约为1 000μg/m L,OD_(260/)OD_(280)在2.00-2.20之间及OD_(260/)OD_(230)大于1.7的高质量RNA样品。与现有的提取方法相比,本方法提取的红豆杉总RNA具有很高的质量和纯度,且大大降低了提取成本,并首次实现了植物总RNA的大量提取。     

一种简单有效的植物RNA提取方法

在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse,建立了一种高效的植物RNA提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总RNA进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA。进一步以皂土法提取的18S rRNA为模板的RT－PCR结果分析表明, 用该法提取的RNA 能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的RNA提取方法。     

茶树叶片总RNA提取方法的比较研究

针对茶树叶片中富含多酚类物质的特点,以陕西地方茶树代表种质紫阳槠叶种的叶片为材料,比较了Trizol法、异硫氰酸胍法和改良SDS-酸酚法三种不同的总RNA提取方法。结果表明改良SDS-酸酚法能够从新鲜叶片、冷冻叶片和干燥叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,经检测28SrRNA亮度为18SrRNA的2倍,A260/A280值介于1.83～2.01之间。以鲜叶、冻叶和干燥叶片的总RNA为材料,进一步用于DDRT-PCR分析,均可获得清晰稳定的多态性结果。说明改良的SDS-酸酚法能抑制茶树叶片中多酚类物质对总RNA提取的影响,是一种适于茶树叶片总RNA提取的有效方法。     

两种适用于葡萄不同组织RNA提取方法的比较

以不同葡萄组织为材料对目前常用的2种总RNA提取方法一改良SDS法和CTAB-LiCl法进行研究。2种RNA提取方法中均不使用酚。采用这两种方法从葡萄不同组织中均成功地提取到RNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示28s和18SrRNA条带完整清晰。检测A260/A280 值分布在1．7-2．0之间,A260/A230值分布于1．9-2．3之间,说明RNA质量较高。管家基Actin和ACS5基因的检测表明2种方法所得RNA能够满足RT-PCR和基因克隆等研究需要。改良SDS法的RNA得率是CTAB-LiCl法的RNA得率的2～3倍,而CTAB-LiCl法获得的RNA纯度高。可以根据原料的数量和对RNA质量的要求来选取最佳提取方法。     

中国野生葡萄叶绿体分离及叶绿体DNA提取的研究

以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料,比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示:(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体,但与柱式植物叶绿体DNAout试剂盒相比,改良的高盐-低pH法得到的叶绿体浓度高、杂质少,更适合中国野生葡萄叶绿体分离。(2)柱式植物叶绿体DNAout试剂盒提取的cpDNA,其OD260/OD280在1.28~1.36之间,质量浓度为4.2~7.8ng·μL~(-1),质量低,不能满足后续测序要求;而改良的高盐-低pH法提取的cpDNA,其OD260/OD280值在1.84~1.90之间,质量浓度为2 514.4~4 133.7ng·μL~(-1),质量高,纯度好,能满足后续测序要求。研究表明,改良的高盐-低pH法能简便、快速获得中国野生葡萄完整叶绿体及高质量cpDNA,并且提取的cpDNA可满足后续测序要求,为葡萄属植物叶绿体基因组的深入研究奠定了基础。     

巨桉叶片总RNA提取方法比较

本研究以巨桉嫩叶为材料,通过试剂盒法、改良CTAB法和改良SDS法,进行巨桉嫩叶总RNA提取方法的比较试验,探讨适合巨桉嫩叶总RNA提取的方法。通过超微量分光光度计、凝胶电泳和RT-PCR对总RNA提取质量进行检验,结果表明:改良CTAB和改良SDS法均能获得高质量的总RNA,条带清晰,纯度高,效果稳定,均适用于桉树叶片总RNA提取。     

一种快速有效提取植物和真菌DNA和RNA的简易方法

本文利用一种真菌核酸的快速提取方法提取了3种真菌的DNA和RNA,并将该法略作改进用于烟草DNA和RNA的提取.同时,通过低温保藏试验评价核酸提取液和提取产物的稳定性和有效性;利用凝胶电泳、PCR和RT-PCR等方法比较分析核酸质量;并将提取效果与传统方法或试剂盒的提取效果进行比较,以分析其有效性.结果表明,改进后的提取方法是一种简单、方便和有效的实验方法,不仅可用于真菌也可用于植物DNA和RNA提取,用这种方法提取得到的DNA和RNA在低温保存条件下比较稳定,能较长时间保持其原有活性.     

一种简易快速高效提取麻疯树营养器官中RNA的方法

以麻疯树根、茎、叶为材料,用4种方法提取麻疯树中总RNA.琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,改良的张年辉法提取的RNA比张年辉法提取的完整性更好,时间更短,条件更粗放;试剂盒A提取的RNA多数降解;试剂盒B几乎不能提取其RNA.RT-PCR分析表明,以改良的张年辉法提取的根、茎、叶中RNA作模板也可成功地进行RT-PCR扩增.据此,我们认为用简易、快速、高效的改良张年辉法提取麻疯树根、茎、叶中RNA为最佳选择.     

猕猴桃RNA提取与RT-PCR

为了从富含多糖和多酚等物质的猕猴桃幼叶中提取和分离出高质量的RNA,用多个不同品种的猕猴桃叶为材料,比较了3种不同的RNA提取方法所提取的总RNA。结果表明,用胍-酚酸-DEPC法提取的RNA质量最好,提取率达到682.9~780.8μg?g(FW),其R值(A260?A280)接近1.90。用所提取的RNA样品进行RT-PCR,其扩增产物在琼脂糖凝胶上出现明显清晰的扩增cDNA带,说明RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR等分子生物学实验的基本要求。     

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较.结果表明,Trizoi法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法.     

苎麻不同组织总RNA的有效分离

从植物组织中提取总RNA是进行植物分子生物学某些方面研究的必要前提,通过选用5种不同的试剂,我们找到一种新的RNAplant分离试剂,可以很有效的提取苎麻叶、茎皮、雌花、果的RNA,且质量很好,可以进行cDNA的合成和RT—PCR等下游实验,并对不同试剂提取和多糖、多酚的去除进行了讨论．     

何首乌总RNA提取方法的比较及改进

目的：探讨不同提取方法对提取何首乌总RNA的质量影响,寻找适于何首乌成熟叶组织RNA的提取方法。方法：以何首乌成熟叶组织为材料,采用SDS／酸酚法、常规CTAB法及改良的TRIzol试剂法分别进行实验,并对所提取RNA的质量进行验证。结果：采用3种方法都能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的TRIzol试剂法能有效抑制次生物质的影响,提取的RNA产量可达70-110μg／g,纯度高于其他2种方法,D260nm／D280nm值为1．85～1．97。结论：改良的TRIzol试剂法操作简便,提取的RNA完整性和纯度较高,可以满足下一步实验的要求。     

葡萄品种DNA指纹数据库的构建及遗传多样性分析

利用SSR分子标记技术对314份葡萄品种进行了DNA指纹数据库构建和遗传多样性分析,为葡萄品种鉴定、亲缘关系分析和植物品种权保护提供科学依据。结果表明:9对引物共扩增出199个等位基因,多态性位点为199个,多态性比率达100%,每个标记检测到的位点数在17~31之间,平均为22.1个;多态性信息含量(PIC)值变幅在0.793~0.886之间,平均值为0.839。本研究发现3组同名异物品种和9组疑似同物异名品种,除此之外的290份品种中,70份品种仅需1对引物即可区分开,其余品种需要引物组合来实现品种之间的区分。最少选用8对引物即可完全区分开290份葡萄品种。最终利用8对多态性SSR引物构建了314份供试材料的DNA指纹数据库,聚类分析结果表明:263份二倍体供试材料可被分为真葡萄亚属和圆叶葡萄亚属两大类,而真葡萄亚属又被分为15个亚类。51份多倍体供试材料被分为3组,聚类结果与供试材料已知的系谱来源基本吻合。     

藓类植物RNA提取方法研究

根据提取RNA质量等方面比较了4种RNA提取方法提取东亚砂藓正常生长和干燥处理后的组织的总RNA的效果。结果表明改良的SDS法能提取高质量的RNA。该方法还可用于紫萼藓等藓类植物RNA的提取。     

显齿蛇葡萄提取物体外抑菌试验的研究

使用药敏纸片法、试管二倍稀释法测定了显齿蛇葡萄对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡沙门氏杆菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌等5种细菌的抑菌效果,结果表明:显齿蛇葡萄的根、茎、幼叶提取物对5种细菌均有抑菌作用,以幼叶提取物抑菌效果最强,说明显齿蛇葡萄具有广谱高效的抑菌作用,但不同器官的抑菌作用有较大的差别。     

几种提取木本植物中RNA方法的比较和改进

以胡杨、核桃和白梨的叶片和根为试材 ,以常用的Trizol法、改良的植物RNA提取法和热硼酸盐法 ,比较其提取总RNA的量和纯度。结果表明 ,热硼酸盐法效果最好。研磨样品时加入多聚聚乙烯吡咯烷酮 (PVPP) ,可有效地吸附色素类物质 ;纯化过程中沉降RNA时间调整为 1h ,整个提取时间可缩短至 2d。