S100A4基因在结肠癌中的表达及意义

目的：通过检测S100A4基因在结肠癌细胞系及结肠癌组织中的表达,探讨其与结肠癌的关系。方法：运用RT-PCR法检测不同结肠癌细胞系中S100A4基因的表达情况;通过原位杂交和免疫组化方法检测61例结肠癌标本中S100A4基因的表达。结果：结肠癌细胞系Lovo及HT29均有S100A4基因表达。S100A4蛋白和RNA在结肠癌中表达率分别为36．1％和34.4％,而在正常结肠组织中不表达（p〈0．05）。临床分期晚比临床分期早的患者S100A4表达明显增高（p〈0.05）;有淋巴结转移的患者比无淋巴结转移的患者S100A4表达明显增高（p〈0．05）。此外,S100A4表达还与肿瘤大小,病理学分级,肉眼分型等相关。结论：结肠癌中S100A4基因表达增高,而且与肿瘤的侵袭及转移密切相关,是判断结肠癌生物学行为及预后的有价值的指标。     

RHCG基因在非小细胞肺癌中的表达及对细胞增殖的影响

为了探讨Rh type C glycoprotein (RHCG)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响及可能的作用机制,本研究使用荧光定量PCR法检测12对NSCLC及癌旁组织样本中RHCG mRNA的表达水平及pcDNA3.1-RHCG质粒对A549细胞RHCG m RNA的表达;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;运用PI染色法检测细胞周期;使用免疫印迹法检p-PI3K、PI3K、p-AKT以及AKT蛋白表达水平。本研究发现,与癌旁组织比较,NSCLC中RHCG m RNA表达水平明显降低。RHCG过表达能抑制NSCLC细胞系A549细胞增殖能力。此外,RHCG过表达使A549细胞周期G1/S期转化发生阻滞。本研究还发现,RHCG过表达可下调A549细胞p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT水平。本研究表明,RHCG抑制NSCLC细胞增殖的作用与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

RNA干扰抑制癌胚抗原表达对结肠癌细胞增殖的影响

癌胚抗原（CEA）作为肿瘤标志物,在多种恶性肿瘤中高表达.为探索CEA在肿瘤发生发展过程中的生物学作用,本研究以结肠癌细胞株8307为研究对象,应用RNAi技术抑制CEA在8307细胞中的表达,观察其对8307细胞生长的影响.依据siRNA设计原则,设计合成靶向CEA的shRNA并克隆到pSilencer2.1-U6 neo载体中,成功构建了CEA shRNA表达载体,通过脂质体介导转染8307细胞,经G418筛选出抑制CEA表达的稳定细胞.RT-PCR、Western印迹分别检测CEA mRNA及蛋白表达水平,MTT及集落形成实验检测细胞增殖活性.实验结果显示,构建的CEA shRNA表达载体明显抑制CEA mRNA及蛋白水平的表达.MTT实验中,CEA表达下调的8307细胞生长活性降低,与对照组相比,抑制率达39%（P<0.05）,细胞集落形成能力也显著降低（P<0.05）.上述结果初步证明,构建的CEA shRNA表达载体能明显降低CEA的表达,并抑制结肠癌细胞增殖活性.     

苏芸金杆菌MS07A的Cry Ⅰ基因在大肠杆菌中的克隆及表达

分离了苏芸金杆菌库斯塔克变种MS07A(Bacillus thuringiensis var.kurstaki MS07A)的质粒,经HindⅢ酶解、凝胶电泳和Southern转移后,用DIGdUTP标记的质粒pES1的EcoR Ⅰ—F片段作探针进行DNA分子杂交,发现5.3、6.6和7kb左右的DNA片段含Cry Ⅰ基因。用Glass milk合并回收这些片段,克隆到pUC18的HindⅢ位点上并转化大肠杆菌JM109。通过菌落原位杂交、重组质粒的限制性消解等分析方法,选出带有Cry Ⅰ基因并能在大肠杆菌中表达其毒蛋白的转化子。初步生物测定结果表明。转化子TM48和TM76对松毛虫和菜青虫有毒杀活性。     

IL-4 和IL-12 在宫颈癌中的表达及对紫杉醇过敏的影响

目的:研究IL-4,IL-12在宫颈癌组织中的表达,探讨其对宫颈癌发生及术后对紫杉醇过敏的影响。方法:应用半定量逆反应-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测IL-4mRNA,IL-12p35以及IL-12p40 mRNA在正常宫颈组和宫颈癌组中的表达,并分析两者之间的相关性以对紫杉醇过敏的影响。结果:1.宫颈癌组中IL-4mRNA表达水平高于正常宫颈组,而IL-12p35和IL-12p40mRNA表达低于正常宫颈组,差异有统计学意义(P<0.05);2.在术后给予紫杉醇治疗的宫颈癌患者中,过敏组中IL-4mRNA的表达高于不过敏组;IL-12p35和IL-12p40mRNA则低于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体内IL-12降低和(或)IL-4升高可促进宫颈癌的发生发展增加紫杉醇过敏的发生率。     

IL-4和IL-12在宫颈癌中的表达及对紫杉醇过敏的影响

目的：研究IL-4,IL-12在宫颈癌组织中的表达,探讨其对宫颈癌发生及术后对紫杉醇过敏的影响。方法：应用半定量逆反应-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测IL-4mRNA,IL-12p35以及IL-12p40 mRNA在正常宫颈组和宫颈癌组中的表达,并分析两者之间的相关性以对紫杉醇过敏的影响。结果：1.宫颈癌组中IL-4mRNA表达水平高于正常宫颈组,而IL-12p35和IL-12p40mRNA表达低于正常宫颈组,差异有统计学意义（P〈0.05）;2.在术后给予紫杉醇治疗的宫颈癌患者中,过敏组中IL-4mRNA的表达高于不过敏组;IL-12p35和IL-12p40mRNA则低于后者,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：体内IL-12降低和（或）IL-4升高可促进宫颈癌的发生发展增加紫杉醇过敏的发生率。     

UHRF1在结肠癌中的表达及其与细胞增殖的关系

目的:探讨UHRF1(Ubiquitin-like with plant homeodomain and ring覱nger domains 1)在结肠癌组织中的表达,及其与结肠癌细胞增殖的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测62例结肠癌组织和癌旁正常对照组织的UHRF1表达,统计分析其表达和临床病理资料和预后关系。采用si RNA抑制UHRF1表达,分析其与细胞增殖的关系。结果:结肠癌组织中UHRF1高表达,癌旁正常组织低表达。62例结肠癌组织中33例UHRF1阳性,阳性率为53.2%。UHRF1表达与淋巴结转移、远处器官转移和Dukes'分期相关(P0.05)。高表达UHRF1结肠患者的生存时间明显较低表达者短(P0.05)。单因素分析显示淋巴结转移、远处器官转移、UHRF1和Dukes'分期与患者累积生存率相关(P0.05)。多因素分析显示UHRF1可作为结肠癌患者预后的独立危险因子(P0.05)。采用si RNA转染HCT116后,UHRF1表达显著降低,细胞增殖被抑制。结论:UHRF1参与结肠癌细胞增殖,与结肠癌患者预后密切相关。     

S100A4基因表达在肿瘤转移中的作用

肿瘤转移是细胞恶性的重要标志之一,有许多基因和因子都参与这一过程。对S100A4基因的研究发现,它可参与细胞周期调控、细胞增殖与分化、血管生成、细胞外基质重建等多种生命过程,调控细胞的生长和运动。在某些特定的肿瘤细胞内,它的表达含量的增加可促进肿瘤细胞发生转移,并与癌症的发生具有某些相关性,可能对人类癌症的发生具有预后作用。现就S100A4基因表达与肿瘤转移的关系进行初步的探讨,以期对癌症的临床诊断提供一些参考。     

REV3基因对结肠癌细胞遗传信息表达的影响

利用RNA干扰技术降低REV3基因在人类结肠癌细胞(SW480)中的表达, 以荧光实时定量PCR检测REV3表达量的降低情况, 选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞。运用细胞生长曲线、MTT、微核和姐妹染色单体交换等方法, 对实验组和对照组细胞进行细胞生长周期、增殖变化情况和遗传信息表达等指标的检测。结果显示: REV3低表达的结肠癌实验组细胞在细胞增殖以及细胞的微核和姐妹染色单体交换等遗传信息表达均明显低于结肠癌对照组细胞, 实验结果具有统计学意义(P＜0.05); 结肠癌的两对照组间(阴性和空白)的结果虽然有一定的差异, 但没有统计学意义。研究结果提示, REV3低表达时, 可能对结肠癌细胞(SW480)的生长与增殖产生影响, 并对微核和姐妹染色单体交换等遗传不稳定现象的产生有一定的抑制作用。     

血小板生成素基因在体内的表达及对造血祖细胞增殖活性的影响

探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律,以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录,先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积可持续４周以上．巨核祖细胞,粒系祖细胞都出现２周左右的增殖增长,长于血小板计数的升高,但红系祖细胞的变化不明显．这些结果显示,基因治疗过程中血小板计数等变化源于ＴＰＯ的表达及刺激,而在此期间一些调控机制被激活,对血小板形成的平衡发挥作用．     

小鼠B7-H4基因的真核表达及其对淋巴细胞增殖的影响

目的构建小鼠B7-H4胞外段的真核表达载体,观察其在体外对淋巴细胞增殖的影响,为深入研究B7-H4在T细胞活化及移植排斥反应中的作用提供实验材料。方法提取小鼠肺、脾脏总RNA,RT-PCR反转录cDNA,以此为模板,扩增B7-H4胞外段基因,将其导入pGEM-T Easy载体,构建TA-mB7-H4质粒。用XBaI和HindIII双酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。将测序证实的mB7-H4酶切后装入MYC-HIS-EGFP-N荧光表达载体中,构建B7-H4-EGFP真核表达载体,转化JM109感受态细菌,提取重组质粒,酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。同时构建control-EGFP载体。应用脂质体法将重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达B7-H4-EGFP的CHO细胞株,用MTT分析其分别对BALB/c小鼠、C57小鼠淋巴细胞和二者混合淋巴细胞增殖的影响。结果经测序证实,所克隆的小鼠B7-H4 cDNA和构建的重组质粒基因序列正确;转染的CHO细胞能稳定地表达跨膜型重组蛋白B7-H4;表达的B7-H4对淋巴细胞增殖具有明显抑制作用。结论成功构建了B7-H4真核表达系统,能表达有生物学活性的B7-H4分子,为进一步探讨B7-H4在T细胞活化和移植排斥反应中的作用奠定了基础。     

Wnt-5b在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞的影响

Wnt-5b是Wnt信号转导途径中一个重要的成员,其与Wnt-5a具有80%的同源性,目前国内对于其在肿瘤的表达与功能尚不十分清楚.通过免疫组化检测70例不同分化程度结肠癌和30例正常结肠组织中Wnt-5b的表达揭示,其在结肠癌组阳性率表达低于正常组,随肿瘤分化程度减低,有下降的趋势;蛋白质印迹法检测表明,Wnt-5b在高分化人结肠癌细胞株Caco-2表达量低于低分化人结肠癌细胞株RKO和正常人结肠细胞株NCM460;Wnt-5b可减低Caco-2中β-Catenin的表达,抑制细胞运动能力,增加细胞凋亡率.以上结果提示,Wnt-5b在结肠癌中很可能扮演抑制肿瘤的角色,与抑制β-Catenin的表达和肿瘤细胞的运动能力及促进细胞凋亡有关.     

Neuronatin在人体常见肿瘤中的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

目的:研究印记基因Neuronatin(NNAT)在人体常见肿瘤中的表达情况及其两种编码产物NNATα和NNATβ对肿瘤细胞增殖的影响。方法:运用组织芯片免疫组化技术对一些人体常见肿瘤及其对应正常组织中NNAT的表达进行系统检测;同时利用腺病毒载体技术,将NNATα和NNATβ分别导入人结肠癌细胞系SW620,并用实时细胞分析仪和平板克隆实验分析细胞增殖能力的变化。结果:①免疫组化结果显示:NNAT在食道鳞癌,结肠腺癌,直肠腺癌,胰腺腺癌,乳腺非特殊性浸润性导管癌,宫颈鳞癌,子宫内膜癌,膀胱移行上皮癌,肺鳞癌,皮肤鳞癌以及前列腺腺癌11种肿瘤组织,肾上腺,皮肤,睾丸,脑,骨骼肌,胰腺6种正常人体组织,以及慢性结肠黏膜炎与慢性肝炎2种炎性组织中呈阳性。②体外细胞增殖实验结果显示,NNATα对人结肠癌肿瘤细胞增殖有一定的抑制作用。结论:NNAT基因在多种人体肿瘤组织中表达,其α片段的表达对于结肠癌细胞系SW620增殖具有轻微抑制作用。     

NDRG1基因过表达对胆囊癌GBS-SD细胞增殖及凋亡的影响

为了探讨N-myc下游调节基因1 (NDRG1)过表达对胆囊癌细胞系GBS-SD细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其可能的分子机制,本研究采用脂质体介导的重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3瞬时转染人胆囊癌GBS-SD细胞,Western blotting检测NDRG1蛋白的表达;MTT比色法和流式细胞术分别检测细胞增殖和细胞周期;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。GBS-SD细胞转染pEGFP-NDRG1-N3重组质粒后经表阿霉素(0.4μg/mL)诱导其凋亡,采用Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotingt检测Bcl-2、Cleaved caspase-3和Bid蛋白的表达。MTT检测显示,NDRG1过表达组细胞在48 h和72 h的增殖速度均显著高于空载组和对照组(p0.05)。Transwell检测显示,与对照组和空载组相比,NDRG1过表达组细胞的侵袭和迁移能力明显增强。Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测显示,经表阿霉素诱导细胞凋亡后,空载组细胞的凋亡率最高,NDRG1过表达组细胞的凋亡率低于空载组,但显著高于对照组。Western blotting检测显示,与对照组和空载组相比,NDRG1过表达组细胞中Bcl-2的表达明显上调,而Cleaved caspase-3和Bid的表达明显下调。本研究表明NDRG1基因过表达可显著促进胆囊癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡,其分子机制可能是上调的NDRG1基因能有效调节与细胞凋亡相关基因的表达,从而发挥其介导作用。因此,NDRG1基因可能成为胆囊癌研究中一个新的治疗靶点。     

LATS1过表达对肺癌A549细胞增殖及周期的影响

通过过表达手段上调大肿瘤抑制因子1（1arge tumor suppressor gene 1,LATS1）基因在A549细胞中的表达,研究LATS1对A549细胞生长和细胞周期调控的作用。构建过表达LATS1基因的慢病毒载体,转染A549N胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后A549细胞中LATS1、YAPmRNA和蛋白的表达效率;流式细胞术检测细胞凋亡、周期情况：CCK-8检测细胞的增殖水平变化。结果发现,过表达LATS1慢病毒载体转染A549细胞株后,LATS1mRNA及蛋白表达水平高于未处理组及转染空载体组,YAPmRNA及蛋白表达水平低于未处理组及转染空载体组;过表达LATS1慢病毒转染后,A549细胞增殖率从第五天开始低于对照组（P〈0．05）,过表达组细胞G1期比例明显增高（P〈0．05）,凋亡率明显增加（P〈0．05）,差异均有统计学意义。以上结果提示,LATS1可通过下调YAP的表达水平促进A549细胞的凋亡,诱导G1期阻滞,降低细胞的增殖能力。     

siRNA抑制c-myc基因的表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的:利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响.方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对c-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA.通过阳离子聚合物jet-SITM-ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr转染细胞为对照.用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT-PCR法比较转染前后c-myc mRNA表达水平的变化.结果:细胞计数法结果显示,转染24h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48h后,抑制效率稳定.c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组.结论:体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖.     

木薯MeNINV4基因在原核细胞中的表达及优化

转化酶是植物中蔗糖降解过程的关键酶之一,可催化蔗糖不可逆地分解为葡萄糖和果糖,在植物生长发育、平衡碳水化合物及对逆境胁迫的响应等方面具有重要的作用。本研究利用从木薯中克隆到碱性/中性转化酶MeNINV4基因,将其重组构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组载体MeNINV4-pGEX-6p-1,并对其融合蛋白表达的IPTG诱导浓度、起始菌液浓度、诱导温度和诱导时间条件进行优化。研究结果发现:GST-MeNINV4融合蛋白的表达量在一定范围内随着IPTG诱导浓度、起始菌液浓度和IPTG添加时间的增加而增加。重组菌在OD_(600)为1.0左右,IPTG浓度为0.6 mmol/L,在37℃条件下诱导5 h后,重组蛋白的表达量达到最大值。本研究通过诱导目的蛋白在原核细胞中的表达并且优化表达条件,使目的蛋白在原核细胞中的表达量显著增加,为进一步研究目的蛋白的结构、功能及酶学特性等生物学功能提供理论依据。     

RTN4对于结肠癌细胞增殖的调控作用

2018年全球癌症统计调查显示,结直肠癌约占患癌新病例的12.1%。因此,寻找新的结肠癌发生有关的基因,发现新的治疗靶点显得尤为迫切。通过数据库分析发现,RTN4基因的表达水平与结肠癌患者生存率的相关性具有统计学意义。针对RTN4基因构建其干扰质粒,将慢病毒作为载体转染结肠癌HCT116细胞中构建敲低RTN4的结肠癌细胞系,最后检测了低表达后RTN4基因的细胞增殖。结果发现,敲低RTN4基因后显著促进了结肠癌细胞HCT116的增殖,研究通过Western blot观察敲低RTN4后HCT116细胞自噬通路相关蛋白p62和LC3的表达情况,发现与对照组相比较,敲低RTN4组LC3转化量（LC3-II/LC3-I）增多,而p62蛋白减少。研究分析了RTN4的潜在抑癌作用,发现敲低RTN4基因会显著增强结肠癌细胞的增殖能力,并且诱导自噬,说明RTN4可能与激活LC3/p62自噬途径有关。     

同型半胱氨酸对A7r5细胞增殖及MMP-9表达的影响

观察同型半胱氨酸（Hcy）对大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5细胞）增殖及对基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。0.25、0.50和1.00 mmol/LHcy分别作用A7r5细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;RT-PCR检测MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-9蛋白的表达。随着Hcy浓度的升高,细胞数目逐渐增多,体积增大,生长旺盛,呈增殖表现。不同浓度Hcy处理组MMP-9 mRNA及蛋白的表达均逐渐增加,各实验组与对照组差异均有统计学意义（P〈0.05）。同时显示正常对照组中MMP-9表达相对较少,为（3.60±1.42）%、（1.60±0.82）%。Hcy能促进A7r5细胞增殖,正常A7r5细胞中MMP-9表达较少;Hcy可诱导A7r5细胞MMP-9的表达,这一效应可能是Hcy致心血管疾病的分子机制之一。提示MMP-9可能成为干预心血管疾病的靶点。