磷脂酶C-γ_2对鼠成纤维细胞株迁移能力的影响

通过对敲除磷脂酶 C-γ1 基因的鼠成纤维细胞株及其转染磷脂酶 C-γ2 基因后的迁移指标的统计学分析 ,揭示出磷脂酶 C-γ1 和γ2 在 PDGF引起的细胞迁移信号传导中均有正调控作用 ,前者作用显著而后者作用微小 ,并且仅在磷脂酶 C-γ1 功能缺失的条件下方可发挥出来 ;同时进一步证明敲除磷脂酶 C-γ1 基因的细胞株中 ,未见出现磷脂酶 C-γ2 的代偿 ,说明磷脂酶 C-γ2 与 γ1 在功能上不可相互取代 ,反映了一种信号可由多种途径传导即细胞信号传导的交互性、冗余性     

磷脂酶C—γ2在鼠成纤维细胞株克隆形成中的作用

通过对敲除磷脂酶C－γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C－γ2基因后克隆形成能力的统计学分析揭示出磷脂酶C－γ2有显著的促克隆形成作用,磷脂酶C－γ1作用微小,但与磷脂酶C－γ2有协同作用,提示磷脂酶C－γ2与γ1有功能上有一定的交互性、冗余性,但不可相互取代。     

磷脂酶C—γ2对鼠成纤维细胞株迁移能力的影响

通过对敲除磷脂酶C－γ1基因的鼠成纤维细胞株及其转染磷脂酶C-γ2的迁移指标的统计学分析,揭示出磷脂酶C－γ1和γ2在PDGF引起的细胞迁移信号传导中均有正调控作用,前者作用显著而后者作用微小,并且仅在磷脂酶C-γ1功能缺失的条件下方可发挥出来,同时进一步证明敲除磷脂酶C－γ1基因的细胞株中,未见出现磷脂酶C－γ2的代偿,说明磷脂酶C－γ2与在功能上不可相互取代,反映了一种信号可由多种途径传导即细胞信号传导的交互性,沉余性。     

磷脂酶C-γ功能研究进展

磷脂酶C-γ(PLC-γ)被激活后,通过两种不同的活化机制催化水解PIP2,产生IP3和DAG。IP3和DAG分别介导钙离子从钙泵中释放以及激活蛋白激酶C,从而形成一个关键的跨膜转导信号组分。现已知道,PLC-γ在细胞周期、细胞转化、生长和发育、细胞凋亡以及调控细胞肌动蛋白骨架等生命活动过程中起着重要的调节作用。另外,PLC-γ与其他转导信号,如PKC、Ras、Ca^2 等存在cross-talk关系。     

拟南芥中磷脂酶Dγ2的低温信号转导作用途径分析

磷脂酶D(PLD)的磷脂降解功能和信号转导功能均能影响植物的抗冻性.本研究以PLDγ2基因被敲除的拟南芥突变体及其野生型为材料,进行低温驯化和冻害胁迫处理,随后由这两种植株的表型及其离子渗透率等来分析PLDγ2基因对拟南芥抗冻性.结果发现,经直接冻害处理后,PLDγ2敲除型的抗冻性与野生型基本一致;但经过低温驯化后的冻害处理,PLDγ2敲除型的抗冻性弱于野生型,即表明PLDγ2基因参与了低温信号转导作用.进一步的实验结果表明PLDγ2基因介导脯氨酸调控的可溶性物质调控途径和过氧化物酶(POD)活性调控的抗氧化系统途径;但是与低温信号激素ABA不在同一条信号转导途径.     

鼠重组磷脂酶D2腺病毒的构建及功能的初步研究

将磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D2基因及其功能缺陷点突变基因 (K75 8R)从真核表达载体pCGN中克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack CMV中 ;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组 ,成功构建磷脂酶D2重组腺病毒。该病毒颗粒感染人胚肾 2 93细胞 ,高效表达磷脂酶D2及其功能缺陷蛋白。这种表达对M3乙酰胆碱受体介导的细胞内磷脂酶D激活无影响。但磷脂酶D2功能缺陷蛋白对蛋白激酶C介导的胞内磷脂酶D激活有显著抑制作用 ;相反 ,磷脂酶D2蛋白有显著增强作用。结果表明     

缺失plcg1基因引起成纤维细胞PI—3K信号上调

磷脂酶C－γ1（phospholipase C－γ1,PLC－γ1）与磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3K）是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC－γ1在表皮生长因子（EGF）介导的细胞分裂信号中的代偿机制,用磷脂酶C（phospholipase C,PLC）特异性抑制剂U73122及PI－3K牧场划必抑制剂wortmannin处理剔除PLC－δ1基因plcg1(PLC-γ1^-/-）及野生型（PLC－γ1^ / )小鼠胚胎成纤维细胞,发现未经处理情况下两种细胞的克隆形成能力、细胞活力及EGF引起的DNA合成能力相似,且均可被U73122与wortmannin抑制,但与PLC－γ1^ / 细胞相比,PLC－γ1^－／－更依赖于PI－3K,而对PLC的依赖性却减小。Western印迹也表明EGF刺激后PI－3K的p85α亚单位酷氨酸磷酸化程度比野生型显著增高,PI－3K信号通路的激活出现上调,且PLC－γ1^-/-中无基近亲PLC－γ2的代偿表达。因此PLC－γ1^-/-中PLC－γ1的功能可能被PI－3K通路代偿,而PLC－γ2或其他PLC同工酶并不代偿其功能。结果表明EGF介导的信号能路的冗余性及PLC－γ1信号通路的可代偿性。     

农杆菌介导法获得转反义磷脂酶Dγ基因大麦

在含有反义磷脂酶Dγ基因（PLDγ）的根癌农杆菌介导下,以自然状态下生长的大麦作受体进行转基因实验。对获得的T1代种子进行抗生素筛选、PCR和PCR—Southern杂交鉴定,证实反义PLDγ基因已整合到大麦基因组中。通过对转基因植株的耐盐性鉴定,获得了一批可耐0．7％NaCl的植株。     

反义磷脂酶Dγ基因转化小麦的研究

目的:获得抗寒、耐盐等能力增强的小麦新种质或新品种。方法:利用穗茎注射法将含有反义磷脂酶Dγ基因(PLDγ)的根癌农杆菌菌液注入到春小麦富硒乌麦旗叶鞘内,T1代经田间表型选择筛选到10株变异株,通过特异PCR扩增和Southern杂交技术对获得的变异株进行分子检测,并对转基因植株进行耐盐性鉴定。结果:变异株均扩增出大小为430bp的目的片段,Southern印迹结果与其一致,证实反义PLDγ基因已经整合到小麦的核基因组中;6株转基因植株的抗寒力比对照显著增强,4株的熟期提早3～4d;在室内耐盐性筛选中,2株变异植株耐NaCl的能力比对照有不同程度的提高。结论:反义PLDγ基因在提高小麦的抗寒、耐盐性上具有很大的应用价值。     

磷酸脂酶C-γ1在人早期胚胎组织细胞中表达的免疫细胞化学研究

采用免疫细胞化学方法探讨了磷酸脂酶 C-γ1(PL C-γ1)在人早期胚胎组织细胞中的表达 ,发现在胚胎龄为 5 2 -76天的多种细胞中均有表达 ,以软骨、软骨膜及肌组织反应最强。结果提示 ,PL C-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。