无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株种子批传代稳定性研究

目的 检定无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株主代种子及工作种子,验证工作种子连续传代30代次的传代稳定性,为伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗无动物源工艺的建立提供前期研究数据。方法 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次,在《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)伤寒沙门菌检定要求的基础上,进一步应用16S rRNA基因序列分析、多位点序列分型(multilocus sequence type, MLST),并以伤寒主要抗原表位Vi抗原片段中毒力基因viaB区域为参考基因组,比对连续传代伤寒工作种子基因序列的遗传稳定性。结果 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次种子,表型鉴定结果均符合《中国药典》伤寒沙门菌检定要求;连续传代至第30代次,Vi抗原血清凝集效价、O抗原血清凝集效价均未发生明显变化;16S rRNA基因序列鉴定PCR产物大小在1 474～1 478 bp之间,与NCBI数据库比对鉴定均为肠沙门菌肠亚种伤寒血清型;MLST分型结果表明,疫苗用伤寒沙门菌Ty2株为ST1型,连续传代30代次ML...     

不同剂量伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗在小鼠体内诱导的抗体水平分析

目的研究伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗免疫效果及不同剂量伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗在小鼠体内诱导的抗体水平,以确定合适的免疫剂量。方法将150只清洁级NIH雌性小鼠随机分为5组,分别为A组(0.625μg结合疫苗组)、B组(1.250μg结合疫苗组)、C组(2.500μg结合疫苗组)、D组(2.500μg多糖组)及阴性组(10mmol/L PBS),每组30只;另领取10只为空白对照(不接种)。A、B、C、D组及阴性组小鼠经腹股沟皮下注射,剂量0.1 m L/只,每隔2周免疫1次,共免疫3次,每次免疫后第7天采血。采用ELISA检测小鼠血清抗体效价,同时对不同剂量伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗在小鼠体内诱导的抗体效价进行分析比较。结果与D组相比,A、B、C三组诱导的抗体水平与之均有统计学意义(P<0.05);A组与B组、A组与C组之间的抗体水平也具有统计学意义(P<0.05),而B组与C组之间的抗体水平无统计学意义(P>0.05)。说明与多糖疫苗相比,伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗能够诱导更高的抗体水平,且具有明显的剂次加强效应。同时证明1.250μg的伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗可诱导与2.500μg伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗相同的抗体水平。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗的两种免疫剂量在小鼠体内可诱导相同的抗体水平,在选择接种剂量时,可致免疫应答的无统计学意义的低剂量可能是较为经济和安全的选择。     

含有PspA家族1和2的双价结合疫苗具抗广谱肺炎链球菌菌株和伤寒沙门菌的潜力

正先前作者发现,无需添加佐剂,肺炎球菌表面蛋白A(PspA)与伤寒沙门菌Vi荚膜多糖结合可增强抗PspA的免疫应答。目前研究由PspA家族1或2的α螺旋区结合到Vi多糖组成结合物用于免疫小鼠,以检测它抗静脉注射的能致死的肺炎链球菌各种菌株的能力。包含PspA家族1成分的结合疫苗对PspA家族1菌株的攻击提供了良好的保护作用,但对PspA家族2菌株的攻击没有保护作用。同样,     

伤寒Vi多糖结合疫苗免疫小鼠后的抗体类型及动态分析

伤寒Vi多糖结合疫苗和Vi多糖疫苗分别免疫小鼠,分离血清,采用间接ELISA法测定不同时点血清中特异性IgA、IgM、IgG及其亚类(IgG1、IgG2a、IgG3)的抗体滴度。结果显示,免疫一针后,Vi多糖结合疫苗组的IgG抗体GMT值明显升高,第二针有加强效应(P<0.01);所测3种IgG亚型中IgG2a抗体滴度升高明显;Vi多糖和结合疫苗免疫小鼠后,血清中IgA和IgM抗体滴度均有显著升高,但无加强应答。显示Vi多糖结合疫苗在诱导小鼠血清IgG应答方面有加强效应。     

由霍乱毒素或其B亚单位与高分子量或低分子量的Vi组成的Vi多糖—蛋白接合物的免疫原性比较

<正>伤寒沙门氏菌引起的伤寒在发展中国家最为常见而且病情严重。接种伤寒沙门氏Vi荚膜多糖预防伤寒已在两个控制伤寒的随机双盲研究中得到证实。在5—44岁的儿童和成人中一次注射Vi,可提供大约70%的抗伤寒保护作用。在尼泊尔和南非德兰土瓦东部大约有75%的接种者Vi抗体效价升高4倍以上,Vi抗体的升高与Vi菌苗的有效率相似。 Vi是半乳糖醛酸(1→,)的线形同种聚合体,有与其它荚膜多糖特有的相同特性,即在动物和人类中重复注射并不引起加强应答。 接种Vi刺激产生的保护性免疫成份是血清抗体。两种试验结果证明,Vi抗体的临界水平可提供对伤寒的免疫保护作用。为了增强免疫原性,从而     

伤寒Vi-rEPA结合疫苗在小鼠中的免疫原性研究

以伤寒Vi多糖疫苗及结合物含量分别为20％、40％、60％的伤寒Vi-rEPA结合疫苗经皮下免疫小鼠后眼眶采血分离血清,用ELISA法测血清抗体浓度。血清抗体分析表明,伤寒Vi多糖疫苗和伤寒Vi-rEPA结合疫苗均有良好的免疫原性,但伤寒Vi-rEPA结合疫苗的免疫原性优于伤寒Vi多糖疫苗;伤寒Vi多糖疫苗无加强免疫应答效应,而伤寒Vi-rEPA结合疫苗有加强免疫应答效应;不同高分子结合物含量的伤寒Vi-rEPA结合疫苗免疫小鼠,其结合物含量为40％、60％的伤寒Vi-rEPA结合疫苗比结合物含量为20％的结合疫苗具有更好的免疫原性,而前二者的免疫原性无显著性差异。     

一种防止肺炎链球菌和伤寒沙门菌致病的双价疫苗

<正>在发展中国家的儿童中,肺炎球菌和伤寒沙门菌感染是两种主要疾病,对于伤寒,已上市的Vi多糖疫苗在2岁以下的儿童中是无效的,虽然据调查Vi结合疫苗已经在临床试验中是有效的,但它们目前只适用于少数地区。肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗对儿童是非常有效的,但受到一些限制,包括成本高和有限的血清型覆盖率,我们先前已经表明,由肺炎链球菌融合蛋白PsaA和与多糖结合的肺炎链球菌     

《伤寒疫苗的研究进展》一文读后感

在读了本刊(编者注《微生物学免疫学进展》2010,38(2):70-74)上的"伤寒疫苗的研究进展"综述之后,本文作者发觉R.Germanier创用的伤寒Ty21 a疫苗仍然在非、美、亚、欧4洲56个国家使用,不禁使我叹惜不止。Ty21 a疫苗是由伤寒杆菌有毒菌株Ty2衍生出来的可供口服的无毒疫苗,特别适宜于外出旅游时使用。成都生物制品研究所在20世纪80年代朱锦忠所长的支持和鼓励下,我们曾经使用过Ty21 a株试制成功活疫苗,并在四川、云南和江苏5个县作了38 000余人(未计入对照组人数)的现场效果考核,证实预防效果确凿,最高保护率达83.9%。可惜,随着朱所长以及几位主要人员去世或调职,人亡业息,这项产品从此在我国消失。本文只能作为一项历史记录保存。     

rOmpF和OMVs亚单位疫苗可有效预防家禽感染肠炎沙门菌

正肠炎血清型沙门菌仍然是人类沙门菌感染病最常见的血清型,可通过受污染的食品(特别是家禽产品)感染人体。研制肠炎沙门菌亚单位疫苗不仅可以保护鸡免受沙门菌感染,还能切断沙门菌传染源。本研究分别以重组表达的外膜蛋白F (rOmpF)和提取的外膜囊泡(OMVs)制备了两种肠炎沙门菌亚单位疫苗,并在鸡中进行了肠炎沙门菌攻毒试验。结果显示,制备的亚单位疫苗不仅能诱导鸡体内产生抗体,还能引起较强的细胞免疫应答。     

伤寒沙门氏菌Ty21α-霍乱弧菌杂交株口服菌苗的霍乱弧菌O-抗原在人体内的免疫迹象

<正>伤寒沙门氏菌Ty21a——一种安全有效的口服伤寒活苗苗——已被键议作为公认的外源性保护性抗原的载体。这种杂交株的称之为EX645的衍生林可产生霍乱弧菌Inaba株的O-抗原,最近显示出对用霍乱弧菌攻击的人类志愿者诱导低水平的抗临床霍乱的保护作用。尽管在口服EX645菌苗后产生强的局部性刺激和系统的体液抗-伤寒脂多糖(LPS)抗体应答,它们对霍乱弧菌O-抗原的应答却是低水平的。所观察到的抗霍乱弧菌攻击的低水平保护则属于不充足的局部抗体应答。     

伤寒沙门氏菌口服活菌苗Ty21a Vi抗原阳性突变株的组建及特性

<正>伤寒至今仍然是发展中国家的主要卫生问题,尤其在学令儿童中的发病率很高,据估计,全世界每年伤寒病例超过3000万,死亡病例约50万。灭活全菌体菌苗大约已经使用75年,尽管几个现场结果表明该菌苗有效,但因其产生不良反应的频率较高使之作为一种公共卫生措施使用而受到限制。 Germanier和Frer叙述了称之为Ty21a的伤寒沙门氏突变株,它缺乏UDP-葡萄糖-4表异构酶,当口服免疫人群时,Ty21a株显示出良好的可耐受性,该菌苗现场效果表明对人群提供了良好的保护水平(67～95%),口服肠溶衣制剂3次剂量投服后至少可提供为期4年的保护作用。 近年已对纯化Vi抗原的效力进行了两个现场考核。Vi抗原是一种α-1、4-2-脱氧-2-N-乙基半乳糖胺糖醛酸的同聚物,这种酸性多糖荚膜在伤寒病人的临床分离物中即使不是全部世是大部分的分离物中表达出来。通常Vi是一种毒力因     

携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现:①SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3 CD4 T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3 CD4 T细胞无明显改变;②SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示:携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式(结构以及磷酸化修饰)的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。     

肠炎沙门菌SPI1缺陷突变体诱导抗鼠伤寒和肠炎沙门菌攻击的交叉免疫

<正>本论文作者研究了疫苗接种过的小鸡对沙门菌感染的免疫应答,研究了沙门菌致病岛1(SPI1)减毒的肠炎和鼠伤寒沙门菌疫苗株的血清交叉保护能力。运用实时PCR定量白细胞介素IL1β、IL17、IL22,干扰素γ(IFNγ),诱导性一氧化氮合成酶(iNOS),免疫球蛋白IgM、IgA、IgY和Ig轻链的转录物,以及急性期应答包括生物素蛋白、血清淀粉样蛋白A、细胞外脂肪酸结合蛋白(Ex-FABP)、免疫应答     

伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性研究

目的评价伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液的稳定性,为该疫苗原液的制备、储存提供有力的数据支持。方法选取3批伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和2~8℃温度下,根据稳定性研究方案定期取样,对其主要评价指标(多糖含量、结合物含量、相对分子质量、鉴别试验)进行检测,评估疫苗原液的稳定性。结果伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液于2~8℃放置22个月,(25±2)℃放置52 w,(37±2)℃放置24 w时,各项主要评价指标均符合其质量标准的要求。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性良好,在2~8℃可稳定存放22个月。     

冻干伤寒Vi＋A群流脑二联多糖疫苗的研究

将现行伤寒多糖疫苗和A群脑多糖疫苗各1人份,联合后以乳糖为保护剂冻干,制备成1人份二联冻干疫苗。并对该疫苗进行鉴别试验、伤寒Vi多糖含量测定、A群流脑多糖磷含量测定、安全试验、冻干二联苗与单价苗Sepharose CL-4B柱层析图比较以及免疫保护效果、动物血清抗体滴度和稳定性试验。试验初步表明,该二联多糖疫苗是安全的,混合后不会引起各自的主要成份、免疫保护效果和抗体应答水平发生变化。即相互没有干扰。一年后各项指标检测表明稳定性良好。可以作为二联苗接种同时预防伤寒和A群汉脑所引起的传染。     

伤寒疫苗

伤寒热是革兰氏阴性细菌肠沙门菌亚种1 Typhi血清型(伤寒杆菌)感染引起的全身疾病。伤寒病人大体上可分两组,轻度组(无并发症伤寒)及具并发症组。无并发症伤寒的征象和症状相对非特异,报道频率变化大。典型症状是发热,头痛及腹痛或不适。疾病第一周发烧可上升到40℃。     

携带HBV包膜大蛋白DNA疫苗的减毒沙门菌在小鼠诱导免疫应答

探索一种简便、有效的乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫方法。将编码绿色荧光蛋白的真核表达质粒pEGFPN1转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,灌胃饲服BALB/c小鼠,流式细胞术检测出小鼠脾细胞内表达的绿色荧光蛋白;构建编码HBV包膜大蛋白的DNA疫苗pCIS1S2S,分别以SL7207为载体的口服途径或直接肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应,结果表明两种免疫途径均能在小鼠体内诱生细胞和体液免疫应答,但口服途径诱导免疫应答的强度明显强于肌肉注射途径。口服携带HBV DNA疫苗的减毒伤寒沙门菌可能代表一种简便、有效的治疗乙型肝炎的新方法。      

福氏志贺氏菌抗原基因在伤寒沙门氏菌Ty21a中的表达

我们以伤寒沙门氏菌半乳糖突变株（gal E) Ty21a为受体,以福氏志贺氏菌2a型甘露 醇阴性突变株CHI,为供体进行杂交。将CHI, 的抗原基因传递到Ty21 a菌体内,并使其表达。 利用载体Ty21 a穿透上皮细胞和在组织内的有 限繁殖能力,产生较强的免疫保护作用,有可能 解决痢疾菌苗的免疫效果问题。     

重组(汉逊酵母)乙型肝炎疫苗副反应和抗体应答观察

观察重组(汉逊酵母)乙肝疫苗免疫儿童的副反应和抗体应答。按0、1、6月免疫程序,分别应用2批重组汉逊酵母疫苗和2批重组酿酒酵母疫苗,免疫221名6至12岁儿童,其中汉逊酵母疫苗1批(A)接种102人,另一批(B)接种26人,重组酿酒酵母疫苗1批(C)和另1批(D)分别接种74和19人。观察每次接种后的副反应和全程免疫一月后(T7)的抗体应答。儿童接种汉逊酵母疫苗后副反应发生率低,有个别出现发热反应,但均低于37.8℃,且为一过性。T7时4组儿童抗HBs血清阳转率均在96%以上,GMT范围在229.98～338.83IU/L之间。免疫A批疫苗儿童组抗体滴度(GMT)显著高于免疫C批疫苗组(270.33、229.98IU/L;P<0.05)。汉逊酵母乙肝疫苗具有较好的安全性,免疫儿童抗体应答水平较高。     

表达乙型脑炎病毒E蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建

目的:构建表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株。方法:克隆JEV E基因,将其插入表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-E,将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鉴定重组菌E蛋白的表达,测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性,以及小鼠的免疫试验和血清中和试验。结果:酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE检测有目的蛋白条带;Western印迹证实表达的E蛋白能与猪抗JEV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用,安全可靠;小鼠口服重组菌免疫,ELISA检测产生了抗JEV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。结论:构建了能稳定表达JEV E蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-E),为研究乙型脑炎口服基因工程疫苗奠定基础。