显色基质鲎试剂法在人血白蛋白热原检测中的应用

为了对显色基质法测定人血白蛋白中的内毒素含量方法进行探讨。以内毒素,鲎试剂及显色基质,在一定的条件下反应释放出对硝基苯胺(PNA),溶液呈现黄色,于波长545nm处比色读数,其产色深浅与内毒素浓度呈线性关系,从而定量测定出检品中内毒素含量。结果表明标准曲线的线性相关系数r≥0.98,人血白蛋白经3.3倍稀释后无干扰作用。显色基质法与家兔法比较,有灵敏、快速、能定量、重复性好的特点,可用于人血白蛋白内毒素含量的测定。     

乙型肝炎人免疫球蛋白的稳定性研究

目的 考察乙型肝炎人免疫球蛋白的稳定性.方法 对乙型肝炎人免疫球蛋白成品进行(25±2)℃条件下为期6个月的加速稳定性试验和(6±2)℃条件下为期4年的长期稳定性试验,对考察的制品按2010版《中国药典》三部进行全面检测,检测其抗-HBs效价、蛋白质含量、纯度、pH值、分子质量大小分布(单体+二聚体)、麦芽糖含量、甘氨酸、无菌检查、异常毒性检查、热稳定性试验、热原检查、外观检查、鉴别试验等质量指标,用t检验分析各质量指标检测数据的变化趋势.结果 乙型肝炎人免疫球蛋白制品在进行加速试验后,单体+二聚体、抗-HBs效价值都有下降趋势.在进行长期试验后,除单体+二聚体有所下降趋势之外,其他各项质量指标的变化均无统计学意义.结论 乙型肝炎人免疫球蛋白的稳定性良好,在进行6个月的加速破坏性试验和4年的长期稳定性试验后,其质量仍能符合2010版《中国药典》三部的规定要求.     

人血白蛋白的分离及提纯研究进展

改进白蛋白工艺,加强产品稳定性及治疗对确保患者生命健康具有重要的意义,同时也节省企业资源,提高企业经济效益。目前国内血液制品发展面临较大的挑战,不仅受原材料血浆供应紧张的影响,同时缺乏自身产品多样性,因此对白蛋白分离及提纯工艺进行分析,提高人血白蛋白产品纯度,获得有效的血液制品是当前血液制品生产的重点及难点。本文将综述人血白蛋白分离及提纯的相关工艺要求,旨在为人血白蛋白的制备提供指导。     

人血浆Cohn法组分Ⅳ沉淀的综合利用研究

目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处理后进行SD法病毒灭活,得到上柱前料液,再依次采用阴离子交换层析、肝素亲和层析+α1-AT Select串联亲和层析、疏水层析以及分子筛层析后分别得到AT Ⅲ和α1-AT的纯品以及主要含有人血白蛋白的组分。对AT Ⅲ和α1-AT分别进行纯度、活性以及肝素亲和力等方面的检测,并评价其质量属性。结果采用此方法获得的AT Ⅲ纯度可达99%以上,比活达10 IU/mg以上,肝素亲和力达80%以上;α1-AT纯度同样可达99%以上,比活达1.5 PU/mg以上。结论本研究所述方法可成功将Cohn F Ⅳ中的AT Ⅲ、α1-AT以及人血白蛋白等几种目前最具备提取利用价值的蛋白进行有效的分离,在人血浆综合利用方面具有较高的利用价值。     

两株具有广谱抗菌性的缓征链球菌的安全性评价

目的通过动物实验对分离于健康儿童口咽部的2株缓征链球菌菌株4-2、4-19进行安全性评价,为呼吸道益生菌的制备提供安全依据。方法对SPF级昆明种小鼠灌胃给予含有菌株4-2和4-19的菌液,观察实验动物是否出现死亡、急性毒性体征、体质量变化、采食量变化、血清淀粉样蛋白A变化和细菌移位生长情况,并对结果进行统计学分析。结果给药后,未发现实验小鼠死亡及急性毒性体征,未观察到细菌移位生长情况,给予菌株4-2后雌性和雄性剂量组与对照组间差异没有统计学意义(F=0.697 0,P=0.567 0;F=1.289 0,P=0.312 0)。给予菌株4-2的1 d后,雌性小鼠低、中剂量组较其他组别体质量变化量小(F=4.402 0,P=0.019 0),雄性小鼠高、中、低剂量组体质量变化量小于对照组(t=-0.800 0,P=0.035 0;t=1.000 0,P=0.011 0;t=-0.800 0,P=0.035 0);给予菌株4-19的1 d后,雌性、雄性小鼠体质量变化量与对照组差异无统计学意义(F=2.024 0,P=0.151 0;F=2.507 0,P=0.096 0)。给予菌株4-2的7 d内,雌性小鼠中剂量组和低剂量组采食量大于对照组(t=0.171 4,P0.001 0;t=1.276 1,P=0.001 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=0.327 0,P=0.806 0);给予菌株4-19的7 d内,低剂量组采食量大于对照组(t=2.137 5,P=0.036 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=2.631 0,P=0.073 0)。结论菌株4-2、4-19在为期7 d的急性毒性动物实验中,未发现毒性表现,可用于呼吸道益生菌菌株的选择。     

水痘减毒活疫苗生产场地变更质量可比性研究

目的通过可比性研究证明水痘减毒活疫苗生产场地变更后质量的产品一致性。方法从生产用原材料、生产工艺、产品质量和稳定性等几个方面进行可比性分析,比较水痘减毒活疫苗生产场地变更前后产品质量特性。结果确认水痘疫苗生产车间场地变更前后原材料未发生改变;生产工艺未发生变化,部分工艺参数由于设备更新进行了调整但未对工艺控制造成影响;对工艺用水、疫苗质量、疫苗稳定性的关键质量指标进行统计分析,其中新车间生产的原液病毒滴度为5.0 lgPFU/mL、半成品病毒滴度为4.6 lgPFU/mL,成品中水分含量为1.0%~1.4%、病毒滴度为7.8~8.0 lgPFU/mL、热稳定性试验为6.8 lgPFU/mL与老车间同步生产的成品结果(原液病毒滴度为4.9~5.0 lgPFU/mL,半成品病毒滴度为4.5~4.6 lgPFU/mL,成品中水分含量为1.1%~1.3%、病毒滴度为7.8~8.0 lgPFU/mL、热稳定性试验为6.8 lgPFU/mL)相似,且均在2014年老车间相对应检测项目均值±3 SD范围内,新老车间成品中的牛血清白蛋白残留量和乳糖酸红霉素残留量差异均无统计学意义(t=1.50,P0.05;t=1.00,P0.05);加速稳定性试验和长期稳定性试验结果显示,新老车间同步生产的各3批水痘疫苗成品的数据稳定性一致,各项检测指标均符合相关规定要求;疫苗安全性均符合相关要求,新老车间同步生产的疫苗试验结果一致。结论水痘减毒活疫苗生产场地变更前后产品质量特性高度相似,场地变更未对产品的安全性和有效性产生不良影响。     

益生菌干预对肥胖小鼠肝脏miR-33 和miR-122表达的影响

目的探讨益生菌干预对高脂饮食诱导肥胖小鼠肝脏miR-33和miR-122表达的影响。方法 18只雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、肥胖组和益生菌干预组,每组6只,分别给予标准饲料、高脂饲料以及高脂饲料+益生菌合剂灌胃,自由采食及饮水,连续喂养6周。每周测量3组小鼠的体质量,6周后,留取小鼠血液样本采用全自动生化仪检测小鼠血脂,安乐法处死小鼠,留取小鼠肝脏样本Hair-pin RT-PCR法检测miR-33和miR-122的含量。结果与对照组小鼠相比,肥胖组小鼠体质量明显增加(t_(2周)=3.985,t_(3周)=4.751,t_(4周)=4.380,t_(5周)=4.728,t_(6周)=4.112,均P0.01);益生菌干预组小鼠体质量较肥胖组明显降低(t_(3周)=3.694,t_(4周)=4.415,t_(5周)=3.752,t_(6周)=3.392,均P0.01);肥胖组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白含量较对照组明显升高(t=10.850,t=7.024,均P0.01),益生菌干预组小鼠较肥胖组小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白含量降低(t=3.034,t=2.881,均P0.05),但与对照组仍有差异。与对照组小鼠相比,肥胖组小鼠肝脏miR-122的表达升高(t=9.170,P0.01),miR-33的表达降低(t=3.420,P0.05),益生菌干预组小鼠较肥胖组小鼠miR-122的表达降低(t=3.204,P0.05),miR-33的表达升高(t=2.070,P0.05)。结论益生菌干预能够影响高脂饮食小鼠肝脏miR-33和miR-122的表达,这可能是益生菌干预改善高脂饮食小鼠肝脏脂代谢的机制之一。     

引起重组白蛋白电泳检测假性结果的研究

目的:建立SDS-PAGE结合pH值变化对重组人血白蛋白电泳检测假性结果的分析方法。方法:采用还原SDS-PAGE(12.5%)和Native-PAGE(8%～25%),将包含重组人血白蛋白的发酵上清液的pH值分别调为4.0、5.0、6.0、6.5、7.5、8.0、9.0和10.0进行电泳分析。结果:在不同的pH值条件下,重组人血白蛋白会出现不同程度的降解。结论:包含重组人血白蛋白的发酵液中存在不同种类的蛋白酶,导致重组人血白蛋白的假性降解。     

重组人血白蛋白临床研究进展

人血白蛋白是人血浆中最丰富的蛋白质,具有许多重要的生理特性,用途广泛。目前主要以毕赤酵母作为宿主表达的重组人血白蛋白,开发了重组人血白蛋白的纯化技术,同时对重组人血白蛋白结构进行了分析,结果表明与人血浆白蛋白基本一致。临床研究结果表明重组人血白蛋白与人血浆白蛋白有着几乎相同的疗效和安全性。综述了重组人血白蛋白的性质结构分析及酵母表达系统;重点介绍了重组人血白蛋白在临床方面研究进展。     

BUCHI K-370自动定氮仪蒸馏程序相关参数的试验研究

为了分析BUCHI K-370全自动定氮仪相关参数即蒸汽力度,蒸馏时间的设置使之最适合生物制品中蛋白质含量的测定。分别选用蒸汽力度90%、80%,蒸馏时间190s、170s配对进行硫酸铵回收试验同时对每次回收试验后氨的残留量进行分析比较。再将选出的测定参数对人血白蛋白国家标准品中的蛋白质进行测定。采用蒸汽力度90%,蒸馏时间190s时硫酸铵回收率为100.08%,RSD最小,为0.28%,回收试验后氨残留量最小;且测得标准品的蛋白质含量与真实值对比无显著差异。结果表明采用蒸汽力度90%,蒸馏时间190s最适合生物制品中蛋白含量的测定。