人工软骨支架中TGF-β1缓释壳聚糖微球对ATDC-5细胞生长的促进作用

为了提高本课题组前期构建的Ⅱ型胶原蛋白-透明质酸-硫酸软骨素的人工三维软骨支架对软骨细胞生长的促进作用,采用乳化交联法以壳聚糖为原料,加入细胞转化生长因子TGF-β1,并通过真空冷冻干燥技术制备了包裹TGF-β1的壳聚糖微球。然后分别将其与空白壳聚糖微球整合进软骨支架中,并接种小鼠软骨细胞ATDC-5,通过观察细胞生长状态来评价缓释微球在人工软骨支架中对软骨细胞生长是否具有促进作用。结果显示所制得的壳聚糖微球球体表面光滑,分散均匀,直径在100 nm左右,吸水率良好可达983.73%±4.38%,抗酶解作用较强,第28天时降解率仅达到51.0%±1.8%。由TGF-β1累积释放曲线可知TGF-β1在开始的24 h内释放最快,之后逐渐减慢,在120 h之后进入平台期,具有缓释效果。MTT试验以及荧光染色试验充分表明,由Ⅱ型胶原蛋白、透明质酸以及硫酸软骨素构建的三维软骨支架适合ATDC-5细胞的生长增殖,并且壳聚糖微球对TGF-β1的缓释能够显著促进细胞的生长。     

青海大骨节病区小麦内生镰刀菌和硒对兔膝软骨细胞的影响

小麦内生镰刀菌5-5-1菌株是从青海大骨节病区穗期小麦籽粒中分离的一株优势内生镰刀菌,本试验通过采用干重法测定菌丝体生长量;MTT(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide)法检测软骨细胞存活率;甲苯胺蓝染色法和免疫组化染色法分别检测兔膝软骨细胞内蛋白聚糖(aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)的表达;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测软骨细胞内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白m RNA的表达水平,探讨了硒对5-5-1菌株生长的影响及不同硒水平下培养该菌株获得的发酵产物对兔膝软骨细胞有关指标的影响。结果表明,硒浓度在0.05~0.5 mg/L的范围内,对5-5-1菌株生长有促进作用,且呈浓度效应;低浓度硒条件下培养的该菌株发酵产物对软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的合成及其m RNA表达的抑制作用相对较小。由此推断适宜浓度硒具有促进镰刀菌生长的作用,但同时能够减轻其发酵产物对软骨细胞的损伤。     

壳聚糖和明胶材料对血管平滑肌细胞的作用

壳聚糖是一种具有发展前景的生物材料。研究了不同脱乙酰度壳聚糖、明胶及壳聚糖与明胶共混材料对血管平滑肌细胞生长的促进作用。在不同材料上培养细胞,采集培养后第1天和第5天的图像．在培养24、72、120h时做MTT实验。此外,还用酶联免疫检测(ELISA)方法测量了材料吸附细胞外基质蛋白的数量,探讨细胞外基质蛋白在血管平滑肌细胞与材料相互作用中所起的作用。结果表明脱乙酰度高的壳聚糖材料能较好地促进血管平滑肌细胞的粘附、铺展和生长,可能是一种具有一定应用前景的血管组织工程研究用材料。     

机械拉伸对血管平滑肌细胞粘附及生长的影响

通过自行研制的“四点弯曲梁”实验装置对血管平滑肌细胞（VSMC）加载培养,并结合显微形态观察和计算机图像处理系统测量细胞铺展投影面积、微管吸吮实验系统检测细胞与表面的粘附力、α-肌动蛋白(actin)免疫组化试验,了解细胞骨架发育和排列取向、流式细胞仪检测细胞动力学以及细胞生长行为等认识VSMC对应变刺激的响应.发现VSMC粘附铺展与实验时间正相关,细胞粘附力、铺展面积、单位面积粘附力4 h后实验组与对照组无显著性差异.VSMC内α-actin发育随加载时间延长呈增加趋势.细胞动力学检测实验组加载24 h后VSMC增殖活动受到抑制.VSMC可能通过调节细胞铺展行为、胞内应力纤维发育等主动机制,实现对机械拉伸的适应性改建.应变刺激有利于体外培养的VSMC维持收缩表型.     

用环境扫描电子显微镜研究Vero细胞在微载体上的生长

使用环境扫描电子显微镜(ESEM), 通过观察Vero细胞在Cytodex-3微载体表面上贴附铺展及增殖生长过程中的形态变化, 分析了细胞在微载体上的贴附与铺展的过程和行为; 考察了外源的层/纤粘连蛋白对细胞铺展形貌的影响, 发现细胞在微载体上的增殖生长以细胞群落延伸扩展的形式进行. 用ESEM图像计数法和结晶紫细胞核计数法获得细胞生长过程的细胞密度变化和生长曲线, 研究了接种密度对细胞生长过程的影响, 随着接种密度的增大, 细胞延迟期缩短, 表观生长速率增大, 细胞长满微载体表面所用的时间缩短. 在实验的血清浓度范围内(5%~10%), 血清浓度影响细胞的贴附, 随着血清浓度的增大, 细胞的贴附率增加, 从而影响整个生长过程.     

肝癌细胞与胶原蛋白Ⅰ裱衬表面粘附特性

本文以正常胎肝细胞的原代培养及肝癌细胞的传代培养为基础,应用微管吸吮技术在单个细胞水平上研究肝实质细胞癌细胞在胶原蛋白Ⅰ裱衬表面的粘附力学特性。实验将正常原代肝细胞与肝癌细胞进行对照,阐明肝癌细胞与胶原蛋白Ⅰ裱衬表面粘附行为的时间与浓度依赖性,结果表明肝癌细胞与胶原蛋白Ⅰ裱衬表面具有更强的粘附力。这一研究对肝癌转移的定量研究有方法学的参考意义。     

GGCX基因在兔骨关节炎软骨退变中的作用机制

通过将GGCX慢病毒转染软骨细胞,探讨骨关节炎患者软骨组织中γ-谷氨酰羧化酶(GGCX)基因过度表达对兔骨关节炎(OA)软骨细胞分化的影响及其机制。首先从OA兔体内分离软骨细胞,用茜素红染色标记软骨细胞。然后将分离的软骨细胞分为正常对照组、GGCX过表达组和载体组3组。编码GGCX的慢病毒用于过表达GGCX,流式细胞分析检测出病毒转染后细胞凋亡。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法用于检测GGCX、基质金属蛋白酶13 (MMP13)、Ⅹ型胶原、Ⅱ型胶原、肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素-1β。慢病毒编码GGCX提高了OA软骨细胞中中GGCS的表达水平,mRNA和蛋白水平都显著升高(p0.05)。GGCX过表达显著增加Ⅱ型胶原,而mRNA和蛋白水平均降低MMP13、Ⅹ型胶原、TNF和IL-1β表达(p0.05)。相对于载体,GGCX过表达抑制了OA软骨细胞的细胞凋亡。GGCX过表达可调节细胞外基质的平衡,促进软骨细胞蛋白多糖合成,这与细胞凋亡减少有关。     

牛蛙皮胶原蛋白酸提取条件优化及其对细胞生长和粘附性的影响

应用羟脯氨酸法测定了牛蛙皮胶原蛋白含量,通过正交实验对牛蛙皮胶原蛋白酸法提取条件进行了优化,并结合MTT法测定了胶原蛋白对细胞生长和粘附性的影响。结果显示,牛蛙皮胶原蛋白的含量约为45．1％;温度条件对提取率影响最大,其次依次为酸种、时间和浓度,最优组合为乙酸、1．5mol／L、37℃、24h;在低浓度时,牛蛙皮胶原蛋白对正常人类肝细胞的生长和粘附性无显著影响,当浓度升高到一定值时,对细胞生长和粘附性有显著促进作用。     

组织工程中细胞与生物材料相互作用研究进展

种子细胞、生物材料和生长因子是组织工程三要素.生物材料模拟体内细胞外基质,为细胞提供良好的生长附着环境,维持细胞的活力和功能.材料表面的理化性质和表面改性分子直接影响细胞的粘附、增殖、迁移和分化等细胞行为,进而影响细胞功能和组织再生效果.材料表面修饰分子是细胞表面粘附和生长的直接接触位置,因此细胞与生物材料表面修饰分子...     

规模化蛋白质相互作用的研究技术

蛋白质相互作用既是蛋白质执行功能的主要方式,也是细胞功能调控网络的结构基础。蛋白质间异常的相互作用及其连锁网络的紊乱是引起许多病理改变的原因。作为功能基因组和蛋白质组研究的重要内容,规模化蛋白质相互作用研究已成为近年国际上研究的热点之一。文章综述了当前规模化蛋白质相互作用研究中的常用技术和常用蛋白质相互作用数据库,研究者可根据研究需要和技术特点利用这些资源。     

Glutamate Receptor-interacting Protein 1 Protein Binds to the Microtubule-associated Protein

To identify the interaction proteins for the α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionate (AMPA) receptor subunit glutamate receptor-interacting protein 1 (GRIP1), GRIP1 interactions with microtubule-associated protein (MAP)-1B light chain (LC) were investigated. GRIP1 interacts with MAP-1A and MAP-1B in the yeast two-hybrid assay, as is indicated also by glutathione S-transferase (GST) pull-down and coimmunoprecipitation with MAP-1B LC antibody in brain fractions. These results suggest a novel mechanism for localizing AMPA receptors to synaptic sites.     

SARS冠状病毒核壳蛋白对蛋白翻译的影响

目的:研究SARS冠状病毒核壳蛋白(N蛋白)对蛋白翻译的影响。方法:构建N蛋白表达载体FLAG-pcDNA3-N,分别与FLAG-pcDNA3和表达荧光素酶的质粒共转染293T人胚肾细胞,通过检测荧光素酶的活性来判断N蛋白对细胞内蛋白翻译的影响;在体外翻译体系中检测N蛋白对体外翻译的影响。结果:构建了载体FLAG-pcDNA3-N,在293T人胚肾细胞内表达后,荧光素酶活性被抑制;在体外翻译体系中加入N蛋白,体外翻译被抑制。结论:SARS冠状病毒N蛋白抑制蛋白翻译。     

Protein Solubility and Protein Homeostasis: A Generic View of Protein Misfolding Disorders

According to the “generic view” of protein aggregation, the ability to self-assemble into stable and highly organized structures such as amyloid fibrils is not an unusual feature exhibited by a small group of peptides and proteins with special sequence or structural properties, but rather a property shared by most proteins. At the same time, through a wide variety of techniques, many of which were originally devised for applications in other disciplines, it has also been established that the maintenance of proteins in a soluble state is a fundamental aspect of protein homeostasis. Taken together, these advances offer a unified framework for understanding the molecular basis of protein aggregation and for the rational development of therapeutic strategies based on the biological and chemical regulation of protein solubility.Virtually every complex biochemical process taking place in living cells depends on the ability of the molecules involved to self-assemble into functional structures (Dobson 2003; Robinson et al. 2007; Russel et al. 2009), and a sophisticated quality control system is responsible for regulating the reactions leading to this organization within the cellular environment (Dobson 2003; Balch et al. 2008; Hartl and Hayer-Hartl 2009; Powers et al. 2009; Vendruscolo and Dobson 2009). Proteins are the molecules that are essential for enabling, regulating, and controlling almost all the tasks necessary to maintain such a balance. To function, the majority of our proteins need to fold into specific three-dimensional structures following their biosynthesis in the ribosome (Hartl and Hayer-Hartl 2002). The wide variety of highly specific structures that results from protein folding, and which serve to bring key functional groups into close proximity, has enabled living systems to develop an astonishing diversity and selectivity in their underlying chemical processes by using a common set of just 20 basic molecular components, the amino acids (Dobson 2003). Given the central importance of protein folding, it is not surprising that the failure of proteins to fold correctly, or to remain correctly folded, is at the origin of a wide variety of pathological conditions, including late-onset diabetes, cystic fibrosis, and Alzheimer’s and Parkinson’s diseases (Dobson 2003; Chiti and Dobson 2006; Haass and Selkoe 2007). In many of these disorders proteins self-assemble in an aberrant manner into large molecular aggregates, notably amyloid fibrils (Chiti and Dobson 2006; Ramirez-Alvarado et al. 2010).     

绿色荧光蛋白在蛋白质研究中的应用

绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）自发现以来,由于具有自发荧光等特性,在分子生物学和细胞生物学领域得到广泛应用。GFP作为一种报道分子,在研究蛋白质相互作用和构象变化、检测蛋白质表达、蛋白质和细胞荧光示踪中,起到了重要的作用。该文通过对绿色荧光蛋白特性的分析．介绍其作为荧光标记在蛋白质研究中的应用,并展望进一步的研究前景。     

Inhibition of Protein Synthesis Alters Protein Degradation through Activation of Protein Kinase B (AKT)

The homeostasis of protein metabolism is maintained and regulated by the rates of protein biosynthesis and degradation in living systems. Alterations of protein degradation may regulate protein biosynthesis through a feedback mechanism. Whether a change in protein biosynthesis modulates protein degradation has not been reported. In this study, we found that inhibition of protein biosynthesis induced phosphorylation/activation of AKT and led to phosphorylation of AKT target substrates, including FoxO1, GSK3α/β, p70S6K, AS160, and the E3 ubiquitin ligase MDM2. Phosphorylation of ribosomal protein S6 was also modulated by inhibition of protein biosynthesis. The AKT phosphorylation/activation was mediated mainly through the PI3K pathway because it was blocked by the PI3K inhibitor {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"LY294002","term_id":"1257998346","term_text":"LY294002"}}LY294002. The activated AKT phosphorylated MDM2 at Ser¹⁶⁶ and promoted degradation of the tumor suppressor p53. These findings suggest that inhibition of protein biosynthesis can alter degradation of some proteins through activation of AKT. This study reveals a novel regulation of protein degradation and calls for caution in blocking protein biosynthesis to study the half-life of proteins.     

蛋白质间相互作用技术的研究近况

蛋白质间相互作用技术的研究近况黄翠芬叶棋浓（军事医学科学院生物工程研究所,北京１００８５０关键词：蛋白质,相互作用,技术ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎ┐ＰｒｏｔｅｉｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＨｕａｎｇＣｕ...     

蛋白质二硫键异构酶相关蛋白A的表达及性质的研究

克隆了Aspergillus niger T21中的蛋白质二硫键异构酶相关蛋白A（PRPA）基因,并将它插入pET23b表达载体。在E. coli中表达时,PRPA占菌体总蛋白的34%。经过超声破细胞、硫酸铵分级沉淀和离子交换层析获得了纯度大于90%的重组蛋白。PRPA有二硫键异构酶活性。在PRPA存在下,变性和还原的溶菌酶复性率和复性速度降低,电泳结果表明溶菌酶聚集增多。荧光结果表明PRPA表面有较多的疏水基团。     

植物磷胁迫蛋白和铁胁迫蛋白研究进展

综述了近十年来国内外有关研究植物磷胁迫蛋白和铁胁迫蛋白的文献。着重阐述了磷胁迫和铁胁迫条件下的植物蛋白质变化,如新的蛋白和新的多肽的特异产生,以及相关的分子生物学进展。