基于PCR的KRAS基因突变检测研究进展

体细胞基因的突变是癌症预后和治疗疗效预测的一类生物标记物,服务于分子靶向治疗。在化疗无效的结直肠癌患者中,针对EGFR的靶向治疗药物近年来取得了较为重大的进展。但携带有KRAS第2号外显子密码子12和13突变的患者对EGFR靶向药物耐药,其可作为EGFR靶向治疗的预测因子。本文就KRAS突变检测的研究现状作一回顾。     

EGFR突变种类与临床疗效关联

癌组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变是应用靶向药物EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）治疗的一个重要相关因素及预测指标。对其突变的检测可以指导TKI类药物（TKIs）的最佳应用。该种突变常出现在非小细胞肺癌（NSCLC）中,尤其是在亚洲女性、肺腺癌、非吸烟者中,与非小细胞肺癌患者对TKIs治疗的敏感性密切相关。本文旨在探讨利用EGFR基因的已知突变热点的相关知识选择适合不同分子遗传学背景的群体或/和个体的＂个体化＂治疗方案,最终达到延长肺癌患者生存时间和提高生活质量的双重目的。     

EML4-ALK 融合基因在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,分子靶向治疗以其特异性高、副反应轻的特点正日益受到关注。近年来临床研究发现EML4-ALK融合基因是除EGFR突变及KRAS突变之外的另-个重要的酪氨酸激酶抑制剂的作用靶点,该融合基因在年轻、不吸烟或少吸烟、腺癌、无EGFR和KRAS突变的非小细胞肺癌患者中发生率较高,且该融合基因阳性者对酪氨酸激酶抑制剂耐药,对于ALK抑制剂(如克唑替尼)则有良好的治疗反应,关于该药的临床试验表明:总有效率达57%(46例确定为部分缓解,1例确定为完全缓解),估计6个月无进展生存概率为72%,常见的副反应是1、2级胃肠道反应。该基因及该药的发现为非小细胞肺癌患者带来了希望。     

EGFR 突变种类与临床疗效关联

癌组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是应用靶向药物EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗的一个重要相关因素及预测指标。对其突变的检测可以指导TKI类药物(TKIs)的最佳应用。该种突变常出现在非小细胞肺癌(NSCLC)中,尤其是在亚洲女性、肺腺癌、非吸烟者中,与非小细胞肺癌患者对TKIs治疗的敏感性密切相关。本文旨在探讨利用EGFR基因的已知突变热点的相关知识选择适合不同分子遗传学背景的群体或/和个体的"个体化"治疗方案,最终达到延长肺癌患者生存时间和提高生活质量的双重目的。     

基于液体活检与二代测序解析肺腺癌患者靶向药耐药机制

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR TKI)是治疗非小细胞肺癌的一线药物,但在治疗过程中难以避免耐药性的产生.目前已知的获得性耐药机制主要包括EGFR T790M突变、HER2基因扩增、MET基因扩增、转分化等,并尚有15％～20％的患者的耐药机制不明.本研究发展了一种基于液体活检与高通量测序方式解析肺癌患者靶向药物耐药机制的方法.我们通过液体活检的方式取得了接受EGFR TKI治疗肺腺癌患者治疗前及EGFR TKI耐药后的胸腔积液样本,在对其中的肿瘤细胞进行富集后,通过基因组及转录组的高通量测序并结合生物信息学分析,解析耐药前、耐药后基因组变异以及基因表达的差异,进而探究该患者的靶向药物耐药机制,为制订新的治疗方案提供科学依据.     

EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者化疗和靶向治疗疗效的对比研究

目的:研究化疗和靶向治疗对EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者的临床疗效和患者生存率的影响。方法:选择2012年1月~2016年1月在重庆市肿瘤医院治疗的95例EGFR基因21外显子L858R突变的肺腺癌患者,按患者治疗方式不同分为化疗组(n=54)和靶向组(n=41)。化疗组患者采用一线化疗药物进行治疗,靶向组患者采用EGFR基因靶向制剂进行治疗。在完成一个周期治疗后,比较两组患者的近期疗效及治疗过程中不良反应的发生情况。对患者进行为期1年的随访,比较其生存情况。结果:(1)化疗组患者治疗后临床总有效率为92.59%(50/54),靶向组总有效率为73.17%(30/41),化疗组显著高于靶向治疗组(P=0.010)。(2)化疗组不良反应发生率为25.93%(14/54),靶向治疗组则为19.51%(8/41),组间比较差异无统计学意义(P=0.463)。(3)在随访过程中,化疗组患者有18例死亡,36例存活,患者生存率为例66.67%;靶向组患者有24例死亡,17例存活,患者生存率为41.46%,化疗组生存率显著高于靶向治疗组(P=0.014)。结论:对于EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者而言,采用化疗治疗的疗效明显优于靶向治疗,且二者安全性相当,化疗治疗的患者预后较靶向治疗者更好。     

肺鳞癌和肺腺癌FGFR融合基因的临床意义

目的:探讨肺鳞癌和肺腺癌FGFR融合基因状态及其临床病理意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和直接测序的方法检测2011年1月到2013年12月在我科行手术切除治疗的肺鳞癌和肺腺癌样本的FGFR融合基因,分析患者的临床病理学资料如性别、年龄、吸烟状况、肿瘤大小、病理类型、分化程度,并与对应样本的EGFR、KRAS、HER2、BRAF等常见驱动基因突变进行比较研究。结果:入组患者共512例,包括119例鳞癌和393例腺癌。FGFR融合基因的发生频率为1.2%(6/512),该分子亚型好发于病理证实为肺鳞癌(66.7%,p=0.029)、直径大于3厘米(83.3%,p=0.029)的男性(83.3%,p=0.028)吸烟患者(83.3%,p=0.038)。腺癌融合基因样本均含有实体病理亚型。结论:FGFR融合基因是肺鳞癌和肺腺癌的重要分子亚型,可能起驱动基因作用,具有该特征的肺癌亚群患者很可能将受益于FGFR靶基因研究与靶向治疗。     

结直肠癌分子病理特征与临床及预后的相关性

目的 探究结直肠癌（colorectal cancer,CRC）中错配修复（mismatch repair,MMR）蛋白表达和KRAS/NRAS/BRAF突变的临床特征和预后价值。方法 运用免疫组化及ARMS-PCR法检测694例CRC组织中MMR蛋白表达和KRAS/NRAS/BRAF突变情况，分析其临床特征及预后。结果 694例患者中, MMR蛋白表达缺失（deficient MMR, dMMR）62例（8.93%）, KRAS突变333例（47.98%）, NRAS突变31例（4.47%）, BRAF突变20例（2.88%）。dMMR状态在年龄<60岁，右半结肠，肿瘤长径≥5cm，隆起型，低分化及无淋巴结转移的患者中更常见。KRAS突变易发生于黏液腺癌中。NRAS突变在年龄≥60岁患者中更常见。BRAF突变在右半结肠，黏液腺癌及低分化组织中的检出率高，且其在dMMR肿瘤中的突变率较高。Kaplan-Meier分析显示：BRAF突变患者的总生存期（OS）明显低于KRAS/NRAS突变及完全野生型患者，且其无进展生存期（PFS）明显低于KRAS突变及完全野生型患者；MMR蛋白表达...     

LKB1在非小细胞肺癌可塑性及耐药反应中的重要作用及机制

LKB1(liver kinase B1)调控细胞增殖和细胞代谢。在非小细胞肺癌发病过程中,缺失LKB1的肿瘤细胞如何协调快速增殖和代谢应激这一矛盾目前尚不清楚。在该研究中,利用KrasG12D;Lkb1lox/lox(KL)小鼠模拟缺失LKB1的非小细胞肺癌的发病过程,发现KL肺腺癌和鳞癌具有不同的氧化还原水平,且活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)可以调控肺腺癌向肺鳞癌的转分化过程。进一步的研究发现,肺腺癌中氧化还原态失衡源于戊糖磷酸途径的失调和受AMPK-ACC信号轴调控的脂肪酸氧化通路的失活。有趣的是,类似的肿瘤异质性和氧化还原异质性同样存在于LKB1失活的临床肺癌样本中。在KL小鼠中进行临床前药理学研究发现,一部分肺腺癌可以通过转分化为肺鳞癌逃脱靶向细胞代谢的药物作用并获得耐药性。该研究揭示了氧化还原调控缺失LKB1的非小细胞肺癌可塑性以及药物响应的重要作用。     

EGFR在晚期肺腺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在晚期肺腺癌患者中的表达及其意义。方法收集60例晚期肺腺癌患者的胸腔积液及活检肺癌组织,采用免疫组化检测EGFR的表达,并探讨其表达与临床病理特征的关系。结果 EGFR在胸腔积液及肺癌组织中的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、63.3%(38/60),两者差异无统计学意义(P0.05)。结论 EGFR均高表达于肺腺癌胸腔积液及腺癌组织,且与年龄、性别、吸烟史、分化程度及肿瘤的大小无明显相关,可指导肺腺癌患者的靶向治疗。     

《胸肿瘤学期刊》：研究揭示中国肺腺癌人群热点基因突变谱

近日,国际肺癌研究协会举办的专业学术期刊《胸肿瘤学期刊》（Journal of Thoracic Oncology）在线发表了中科院生化与细胞所季红斌研究组与复旦大学肿瘤医院合作开展的最新研究成果,报道了中国肺腺癌人群中热点基因LKB1、EGFR和KRAS的突变谱。     

肿瘤靶向治疗在NSCLC中的应用

肺癌已成为21世纪威胁人类健康最主要原因之一,全球每年因非小细胞肺癌(NSCLC)死亡的人数超过100万人.传统的抗肿瘤药物极大改善了NSCLC患者的预后.由于缺乏选择性和很强的细胞毒性,多中心研究表明化疗方案疗效已经达到治疗平台,应致力于研发作用机制不同于化疗的药物.肿瘤靶向治疗通过针对特异性的靶点来杀死和抑制肿瘤细胞,避免了对正常细胞的伤害,已成为当前肿瘤研究的热点,并已在临床肿瘤治疗中取得了一定疗效.随着肿瘤分子生物学与细胞生物学的发展,人们对肺癌癌变、侵袭转移的分子机理以及生物信号传导通路的认识加深,新的靶向治疗药物不断出现.本文就近年靶向治疗技术的进展及分子靶向药物在NSCLC中的应用作一综述.     

非小细胞肺癌靶向治疗的临床前研究进展

针对表皮生长因子受体（EGFR）和血管生成（angiogenesis）信号通路的靶向治疗已经在晚期非小细胞肺癌的治疗上取得成功,但由于抗药性的存在,大多数晚期患者的生存时间仍然提高有限。继发性的EGFR T790M突变和原癌基因肝细胞生长因子受体（MET）的扩增被鉴定为两种主要的抗药机制。最近转化生长因子-β（TGF-β）/白介素-6信号通路被报道能介导选择性和适应性地对erlotinib的抗药。另一方面,Kras突变所致肺癌的靶向治疗方面也取得了一些进展。双重抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和促分裂素原活化蛋白激酶激酶（MEK）信号通路可导致Kras突变肿瘤的显著消退,联合抑制SRC、PI3K和MEK可使丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11（Lkb1）缺失,Kras突变的肺癌小鼠的肿瘤明显消退,抑制核因子-κB（NF-κB）信号通路导致p53缺失,Kras突变的肿瘤发展显著减慢。这些发现都为发展非小细胞肺癌患者的靶向治疗提供了有力的支持。     

EGFR突变与EML4-ALK融合共存的非小细胞肺癌的临床病理特征及治疗分析

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与棘皮动物微管相关样蛋白4与间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因共存(以下简称双基因异常)的非小细胞肺癌的临床病理特征及治疗策略。方法:回顾性收集并分析2012年1月至2016年12月我院收治的EGFR突变与EML4-ALK融合基因共存的非小细胞肺癌患者的临床资料及病理特点。结果:11例双突变非小细胞肺癌占医院同期入院非小细胞肺癌患者的0.68%(11/1620);男性6例,女性5例;年龄23-70岁,平均年龄51.6岁;11例患者均不吸烟;腺癌9例,肉瘤样癌2例;临床分期,ⅠA期3例,ⅡB期1例,ⅢA期1例,ⅢB期1例,ⅠV期5例;6例行手术治疗,4例使用传统化疗,最好疗效为稳定(SD),最长无进展生存期(PFS)为6月;5例患者使用表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKⅠ)治疗,使用EGFR-TKⅠ最好疗效为部分缓解(PR),PFS为3-23月,中位PFS为9月;截止2017年12月,死亡4例,11例患者的生存时间为1-67月,中位存活时间为21月。结论:EGFR基因突变与EML4-ALK融合基因共存型非小细胞肺癌临床少见,多见于不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者,双基因异常的非小细胞肺癌的靶向药物的治疗缺乏统一性,有待进一步研究,基于EGFR及EML4-ALK的磷酸化水平或肿瘤突变负荷选择靶向药物的个体化精准治疗是非常重要的。     

PTEN与P-糖蛋白在肺鳞癌与肺腺癌组织中的表达及其意义

目的通过检测突变型PTEN、P-糖蛋白在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达差异,探讨肺鳞癌和肺腺癌在肿瘤发生及预后方面出现差异的有关机制,并探讨这两种蛋白表达在肺癌病理临床方面的意义。方法利用免疫组织化学方法对65例肺癌患者手术切除的肺癌组织进行染色,镜下观察PTEN、P-糖蛋白的表达并分析其阳性表达率在肺鳞癌和肺腺癌组织中的差异及与这两种类型肺癌有关生物学行为之间的相关性。结果PTEN在肺腺癌组织中的表达明显高于肺鳞癌组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）。PTEN的表达随肿瘤分化程度降低而逐渐降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。P-糖蛋白在肺腺癌组织的表达率明显高于肺鳞癌,差异具有统计学意义（P〈0.05）。P-糖蛋白的表达在高分化肺癌组织中的表达明显高于低分化肺癌,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论PTEN在肺鳞癌和腺癌的演进过程中,可能起到一定作用,与肿瘤细胞,尤其与肺腺癌的的分化调节有关;P-糖蛋白表达可能与肺鳞癌、肺腺癌的耐药性有关,并可能是肺腺癌及高分化肺癌对化疗药物不敏感的原因之一。     

非小细胞肺癌EGFR-TKIs治疗及PET分子成像的研究进展

表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)信号转导通路在非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)中发挥重要作用,尤其胞内酪氨酸激酶结构域的突变状态决定了目前NSCLC的靶向治疗。针对EGFR突变的分子靶向药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epithelial growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)已开发并应用于NSCLC的治疗。在治疗过程中,EGFR的突变状态随时间发生动态变化,因此精准掌握EGFR的突变状态是靶向治疗方案制定、优化的关键。PET分子成像可在细胞和分子水平,对在体生物活动的发生、发展过程进行实时成像,使实时、在体揭示EGFR的突变状态成为可能。因此,多种以TKIs为前体标记放射性核素作为靶向肿瘤突变EGFR胞内段分子成像探针的研究逐渐增多。本文就EGFR-TKIs在NSCLC治疗及相关PET分子成像方面的研究进展进行综述。     

利用CRISPR/Cas9技术靶向KRAS或TP53突变抑制SW620细胞的增殖

摘要 目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑工具研究靶向SW620细胞系中KRAS或TP53突变对细胞增殖活性的影响。方法：针对SW620细胞中KRAS和TP53的突变位点设计sgRNA,并利用TIDE法检测sgRNA的切割效率。通过细胞增殖实验检测靶向KRAS或TP53突变后SW620细胞增殖活性的改变,并应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平的变化。结果：分别构建了靶向SW620细胞系中KRAS和TP53突变的sgRNA质粒,并通过TIDE分析验证了sgRNA的内源切割效率;细胞增殖实验及细胞凋亡检测显示,靶向突变的KRAS或TP53基因后,SW620细胞增殖活性明显减弱,凋亡水平明显升高（P<0.05）。结论：本研究基于CRISPR/Cas9技术实现了对SW620细胞系中突变的KRAS和TP53的基因编辑,发现靶向KRAS或TP53突变能够明显抑制SW620细胞的增殖活性并促进细胞凋亡,为结直肠癌相关靶点治疗提供了体外实验依据。     

基于WGCNA和SVM-RFE算法挖掘肺腺癌诊断和预后基因标志物

目的 肺癌是世界上最常见的癌症之一,在众多肺癌患者中,肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)的死亡率最高.基因表达谱的变化与肿瘤的发生和发展过程有关,通过识别与LUAD患者相关的诊断和预后基因标志物,可以为肺腺癌的预防和治疗提供理论依据.方法 本研究以肿瘤基因组图谱(The Cancer Gene ...     

肺癌的表皮生长因子受体分子靶向治疗与基因突变

肺癌分子靶向治疗近年来取得较大进展,特别是针对表皮生长因子受体（EGFR）分子靶向药物表现出确定的临床效果。临床应用表明,EGFR基因酪氨酸激酶域体细胞突变与非小细胞肺癌患者对酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼的敏感性相关,本文就相关的研究进行了简述。     

表皮生长因子受体基因突变对非小细胞肺癌脑转移患者生存期的影响

为了探究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因的突变对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脑转移患者生存期的影响,我们以2012年1月至2014年12月期间我院收治的123例非小细胞肺癌脑转移患者为回顾性研究对象,按治疗方案的差异分为放射治疗组(36例),化疗组(52例),放射治疗+化疗组(24例)、放化疗+靶向治疗组(13例),观察EGFR基因突变对不同治疗方案的非小细胞肺癌脑转移患者无进展生存期(progression-free-survival,PSF)和总生存期(overall survival,OS)的影响。我们发现,EGFR突变对非小细胞肺癌脑转移患者生存期具有显著影响,EGFR突变型患者生存期明显长于EGFR野生型患者,而基于EGFR突变的靶向治疗患者生存期明显长于辅助治疗患者,因此基于EGFR突变的靶向治疗可有效提升患者生存期。我们的研究为非小细胞肺癌脑转移患者的临床治疗提供了一定的理论依据。