斑玉蕈Hypsizygus marmoreus凝集素的部分性质和细胞凝集活性分析

斑玉蕈子实体经生理盐水抽提、30%~60%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析纯化得到斑玉蕈凝集素(HypsizygusmarmoreusLectin,简称HML)。HML经PAGE显示单一条带,SDS-PAGE测得亚基相对分子质量为34.2kD,SephadexG-100凝胶过滤测得相对分子质量为35kD,中性糖含量为7.2%,含有17种氨基酸,IEF-PAGE测得其等电点为8.15。该凝集素能凝集多种动物红细胞和人的A、B、AB和O血型红细胞,对兔红细胞的凝集作用可被甘露糖、半乳糖、N-乙酰半乳糖胺和岩藻糖所抑制。HML对热较敏感,经50℃处理10min,凝集活性下降明显,但对酸碱具有一定的稳定性,在pH5.0~8.0范围内较稳定。Β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。     

芦荟凝集素的分离、纯化和部分性质的研究

新鲜芦荟叶（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ Ｌ．ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｈａｗ．）Ｂｅｒｇｅｒ）于室温用低浓度ＮａＣｌ溶液提取。离心和透析后,经Ｎ－乙酰氨基葡萄糖０Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,分离纯化出芦荟凝集素（ＡＣＬ）。用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测表观分子量为３５ＫＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ出现两条色带;染色 ;宽带和较浅的罕带。亚基分子量分别为１５ＫＤ和２０ＫＤ。能专一性凝集兔血细胞和人血红细胞     

鲨活性成分及其分离和应用

我国海域分布有相当丰富的鲨资源,而鲨体内中具有许多重要的生理活性物质。本文概述了鲨体内的生理活性物质及其分离纯经技术和应用现状,并展望其开发利用前景。     

牛舌菌凝集素的分离、性质及细胞凝集活性

牛舌菌子实体经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和Sephadex G-100柱层析纯化得到牛舌菌凝集素(Fistulina hepatica Lectin,FHL)。FHL经PAGE显示单一条带,SDSPAGE测得其亚基相对分子质量为63．6KD,Sephadex G-100凝胶过滤测得相对分子质量为63KD,FHL中性糖含量为9．7％,IEF-PAGE测得其等电点为5．36。该凝集素对人的A、B、AB和O型血细胞具有凝集作用,对兔红细胞的凝集作用可被乳糖和N-乙酰半乳糖胺所抑制。氨基酸组成分析表明,FHL含有16种氨基酸,其中天冬氨酸和谷氨酸含量较高。FHL对热、酸具有一定的稳定性,经60℃处理10min,仍有较高的活性,在pH3．0～6．0范围内较稳定,但在碱性pH环境中(pH7．0～10．8),FHL的凝集活性下降明显。β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。抗肿瘤活性测定表明,FHL对HeLa细胞具有明显抑制作用。     

厚果鸡血藤凝集素的纯化及性质

从厚果鸡血藤（ＭｉｌｅｔｉａｐａｃｈｙｃａｒｐａＢｅｎｔｈ．）的种子中分离纯化出一种具强凝集活性和强促有丝分裂原的凝集素。种子经磨粉、浸取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００分子筛层析,即可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳＰＡＧＥ上均呈现单一蛋白染色带的凝集素纯品,分子筛层析测得分子量为４０７００,ＳＤＳＰＡＧＥ测得亚基分子量为１９８００;含有１７８％的中性糖。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ和Ｌｅｕ,同时含有４个Ｔｒｐ,当凝集素浓度为０．４８μｇ／ｍＬ时,即可凝集兔红细胞;对人Ａ、Ｂ和Ｏ型血细胞都能发生凝集,故无血型专一性;其凝集兔红细胞的凝集活性,不能被常见糖类抑制,但可被甲状腺球蛋白、胃粘蛋白和卵粘蛋白所抑制;其凝集活性强烈地依赖于Ｃａ２＋的存在,但Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋对其凝集活性全无促进作用;该凝集素是一种强促有丝分裂原,对人外围血中淋巴细胞的转化率高达８４３％,细胞分裂比率可达７８％。     

黄精凝集素Ⅱ的纯化及部分性质研究

囊丝黄精（ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｃｙｒｔｏｎｅｍａＨｕａ．）的根状茎,经浸取、用硫酸铵分级沉淀、猪甲状腺球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤,可以分离纯化出黄精凝集素Ⅱ（ＰＣＬⅡ）．纯化的ＰＣＬⅡ在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白染色带;在快速高效液相色谱中亦为单一蛋白峰,经分子筛层析测得分子量为１５．９ｋＤ,最大紫外吸收值在２７８ｎｍ,ＰＣＬⅡ只凝集兔红细胞,当浓度为０．２５μｇ／ｍｌ时,即可发生凝集反应,此凝集兔红细胞的能力可被Ｄ－甘露糖和猪甲状腺球蛋白所抑制．氨基酸组成分析表明ＰＣＬⅡ分子中富含酸性氨基酸,Ｎ末端为丙氨酸．经测定ＰＣＬⅡ分子中含有３个色氨酸和２．４％的中性糖．原子发射光谱分析表明,该凝集素分子中含有Ｍｇ和Ｃａ两种金属元素．     

香灰菌凝集素的纯化及其部分性质

香灰菌菌丝体经磷酸缓冲液抽提、20%-70%饱和浓度的硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose和SephadexG-100柱层析纯化得到香灰菌凝集素(Hypoxylonsp.lectin,简称HSL)。HSL经PAGE检测为单一蛋白条带,SDS-PAGE测得其亚基分子量为15.9kD。过碘酸-Schiff染色法表明HSL为一种糖蛋白,糖基的含量为15.5%,β-消去反应测得其糖和蛋白质的连接键为O-型糖肽键。HSL能凝集多种动物红细胞和人的红细胞,在所测试的红细胞中,对兔红细胞的凝集作用最强。HSL对热较敏感,经50°C处理10min,其凝集活性明显降低,其在碱性环境中较稳定,而在酸性环境中较不稳定。HSL的凝集活性受Al3+、Fe3+、Ca2+和Zn2+等阳离子的影响。对鼠红细胞的凝集作用可被半乳糖和乳糖所抑制。     

桑寄生凝集素的纯化及部分性质研究

利用DEAE一纤维素柱盐离子浓度梯度洗脱,再经猪胃粘蛋白-Sepharose 4 B亲和柱可以从中药桑寄生中分离纯化出桑寄生凝集素。经pH8.9,Tris-EDTAN_2a-borate的PACE和SDS-PAGE测定均呈现单一蛋白带,测得其分子量为67 500,中性糖含量为14.6％,DNS法测得N-末端氨基酸为缬氨酸。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含酸性氨基酸,而碱性氨基酸含量较少,不含精氨酸。当凝集素浓度为15.6μg/mL时,即可凝集兔红细胞,而对人的A、B、O型血细胞,凝集素浓度高达1000μg/mL,也不发生凝集反应。Gal、GalNAc、山梨糖、岩藻糖和松三糖对凝集兔红细胞的能力有抑制作用。桑寄生凝集素是一种促有丝分裂原,对猪血淋巴细胞的转化率达78％,细胞分裂比率为11.2％。     

狗脊蕨凝集素的分离纯化与部分性质

狗脊蕨叶组织经磷酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose(fast flow)离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析,获得具有凝集活性的狗脊蕨凝集素.用PAGE和SDS-PAGE检测均显示1条蛋白带,提示狗脊蕨凝集素分子只有一个亚基.Sephadex G-100层析和SDS-PAGE测得其相对分子质量在20 kD左右.该凝集素对红细胞有种属专一性,其凝集活性可被木糖、卵粘蛋白所抑制.狗脊蕨凝集素对热相当稳定,以100℃温度加热10 min仍保存部分凝集活性.凝集活性不依赖于金属离子Mg2 、Ca2 、Mn2 .它的中性糖含量为3.1%,Phe含量较高,His含量较低,不含Tyr和Pro.     

面包树果实凝集素的提取纯化及理化性质分析

建立面包树果实凝集素(frutalin,FTL)的提取纯化方案,并对FTL纯品进行部分理化性质分析。本试验以新鲜的面包树果实籽为材料,经Tris-HCl缓冲液浸提、过滤、硫酸铵沉淀和阳离子交换层析后超滤浓缩得FTL纯品,最后用纯品开展了糖抑制,热稳定性,pH稳定性和金属离子耐受性等试验。提取优化得到的最佳条件为:料液比1∶2(g:m L),浸提时间2 h,浸提温度50℃,硫酸铵饱和度70%,沉淀时间4 h。经阳离子交换层析后FTL回收率为22%。研究结果表明,FTL是一种热稳定性凝集素,在温度不超过60℃时,其凝血活性不受影响,并且不依赖于金属离子来发挥其凝血活性。本研究建立了一个简单高效的FTL分离纯化方案,并对FTL纯品做了部分理化性质研究,为FTL可能的生物医学应用提供研究基础。     

斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究

以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶（ACPase,EC.3.1.3.2）,进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱（UV）测     

Antifungal Activity of Volatile Compounds Produced by an Edible Mushroom Hypsizygus marmoreus against Phytopathogenic Fungi

Volatile compounds with antifungal activity produced by edible mushrooms have potential as biological control agents to combat fungal diseases and reduce fungicide use in agriculture. Here we investigated the antifungal activity of volatile compounds produced by the edible mushroom Hypsizygus marmoreus (TUFC 11906) against eight phytopathogenic fungi. The results showed that volatile compounds from the mycelia and culture filtrates (CFs) of H. marmoreus had antifungal activity against some phytopathogenic fungi. Among them, the mycelial growth and conidial germination of Alternaria brassicicola were significantly inhibited by 60 and 100%, respectively. Moreover, the volatile compounds from CFs inhibited the lesion formation of A. brassicicola on detached cabbage leaves by 94%. The volatile compounds had higher antifungal activity against A. brassicicola than other fungi. With the removal of the volatile compounds from conidia of A. brassicicola, the conidia began to germinate, which indicates fungistatic activity of the compounds. The volatile compounds were isolated from the CFs of H. marmoreus, and the major volatile compound with antifungal activity was estimated to be 2‐methylpropanoic acid 2,2‐dimethyl‐1‐(2‐hydroxy‐1‐methylethyl)propyl ester. As the volatile compound produced by H. marmoreus is a product of an edible mushroom and has fungistatic activity against some phytopathogenic fungi, especially A. brassicicola, it may be possible to use the compounds as a novel safe agent for protecting crops in the field and during storage.     

Cystatins from bovine brain: Purification,some properties,and action on substance P degrading activity

Two cystatins were purified from tissue extract of bovine brain by alkaline treatment, acetone fractionation, gel chromatography on Sephadex G-75, and affinity chromatography on S-carboxymethyl-papain-Sepharose. One of the inhibitors had a relatively high molecular mass, 25 kDa (HMM-cystatin) with pI 4.7, and the other, 11 kDa (LMM-cystatin) with pI 5.23. Both inhibitors showed considerable stability at pH 2 and 80°C. The cystatins inhibited papain, ficin, and cathepsins B and H, but not trypsin, chymotrypsin, thermolysin, nagarse, and cathepsin D. K_i values for the complexes of papain and the inhibitors were estimated to be 2.8×10^–10 M for HMM-cystatin and 1.3×10^–9 M for LMM-cystatin. Both purified cystatins prevented degradation of substance P by soluble fraction and lysosomal extract obtained from synaptosomes, but did not suppress the cleavage of the peptide by synaptosomal plasma membranes.Abbreviations HMM-cystatin high molecular mass inhibitor - LMM-cystatin low molecular mass inhibitor - SP substance P - SPM synaptosomal plasma membranes - p-CMB 4-chloromercuribenzoic acid - BK bradykinin - Bz-Arg-Nap N-benzoyl-dl-arginine--naphthylamide - Arg-Nap dl-arginine--naphthylamide - P-Pxy-Hb hemoglobin initially coupled with pyridoxal-5-phosphate     

漆酶同工酶基因在斑玉蕈生长发育过程中的表达分析

为了探明漆酶在斑玉蕈生长发育过程中的功能,对斑玉蕈转录测序预测的13个漆酶基因序列进行分析、鉴定和构建分子系统发育树;检测了不同生长发育时期漆酶的活性和漆酶基因表达水平。研究结果显示：13个基因片段中有10个是漆酶基因。不同的漆酶同工酶之间进化关系存在明显差异,大多数漆酶与木腐菌（金针菇Flammulina filiformis和侧耳属Pleurotus）进化关系较近。对斑玉蕈不同生长发育时期的酶活检测结果显示,从斑玉蕈的菌丝恢复期到钉头期,漆酶活性逐渐升高,而在子实体形成后期酶活逐渐降低。对培养40d、60d和80d的菌丝样品以及不同生长发育时期的样品进RT-qPCR检测,结果显示在菌丝营养生长时期,大多数漆酶基因在第40-60天表达量持续增加1-3倍,而在第60-80天时表达量出现降低的情况。而在生殖生长时期,大多数漆酶基因在转色期或者原基期相对表达量达到最大值,并在子实体期出现降低,这与漆酶活性的检测具有一致性。lcc3、lcc7、lcc8和lcc9在斑玉蕈生殖生长过程中相对表达量出现了10-100倍的上调。这说明从菌丝培养到菌丝扭结形成子实体和子实体发育的过程中,不同的漆酶可能发挥着不同的作用,表达量较高的漆酶基因可能对基质降解和子实体形成起主要作用。     

斑玉蕈出菇产量与胞内外碳代谢的相关性分析

本研究收集了19株不同来源的斑玉蕈品种,通过ITS测序构建其系统发育树,随后根据菌株在木屑培养基与葡萄糖培养基的生长速度对菌株进行分类,选取生长速度差异明显的快、中和慢8株斑玉蕈菌株进行出菇实验及胞内外碳代谢指标的测定,探讨斑玉蕈生产性能与胞内外碳代谢的相关性。研究发现收集到的19株菌株均为斑玉蕈,亲缘关系近,遗传分化程度低;选取出的8株斑玉蕈菌株鲜菇产量与菌丝生长速度呈极显著正相关,菌丝生长越快,出菇产量越高。同时,斑玉蕈菌株鲜菇产量与菌丝湿重、还原糖、可溶性蛋白、滤纸酶(FPase)、CMC-Na酶(CMCase)、木聚糖酶和淀粉酶7个胞外碳代谢指标(ECMI)及胞内葡萄糖、己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(Pyk)、柠檬酸合酶(CS)、α-酮戊二酸脱氢酶(KGDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD) 6个胞内碳代谢指标(ICMI)呈显著正相关。说明菌丝生长速度快的斑玉蕈品种,胞外基质分解速度更快,提高可吸收碳源的供应,胞内加强对碳的吸收与同化,为菌丝的增殖提供更多原料与能量。本研究分析了斑玉蕈生产性能与胞内外碳代谢的相关性,为斑玉蕈优良品种的鉴别与选育奠定基础。     

鲍姆氏层孔菌子实体中化合物的分离鉴定及其体外抑制肿瘤的研究

鲍姆氏层孔菌Phellinus baumii子实体中分离得到的化合物,通过波谱分析,分别鉴定为:麦角甾‐7,22‐二烯‐3β‐醇十五烷酸酯(1),星鱼甾醇(2),灵芝醇B(3),麦角甾‐6,22‐二烯‐3β,5α,8α‐三醇(4),灵芝酸DM(5)和Inoscavin A(6)。化合物1、2、3、4、5为首次从Phellinus baumii子实体中获得。对化合物进一步作了体外抗肿瘤实验,结果表明,化合物1、2、4、5、6对肿瘤细胞K562的增殖有不用程度的抑制作用,其抑制率IC50值分别为63.5、10.3、70.6、35.9和3.5μg/m L。化合物5对肿瘤细胞Hep G2也有明显的抑制作用,其抑制率IC50值为50.3μg/m L。     

虎杖内生真菌的分离及产抗菌活性物质的筛选

从植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的根状茎中分离出24株内生真菌,分别对其液体发酵液进行抗菌活性检测,结果筛选出3株内生真菌具有抗菌活性,它们分别属于曲霉属、青霉属和无孢菌类。     

正红菇菌丝体凝集素的分离纯化及生化特性

正红菇菌丝体经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析纯化得到红菇凝集素（Russula vinosa Lectin,RVL）。经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,其亚基相对分子质量为55kDa,Sephadex G-100凝胶过滤测得相对分子质量为55.25kDa,提示RVL分子只有一个亚基。RVL中性糖含量为3.87%,经酸水解测定含15种氨基酸。温度在20–60℃、pH在5–9的范围内,凝集活性保持相对的稳定。RVL的凝血活性受Mn2+、Zn2+、Ca2+的影响。糖抑制实验表明,在供试的11种糖中,D-甘露糖强烈抑制RVL的凝血活性。抑菌实验显示,RVL对供试的细菌没有抑制作用,对稻瘟病菌、绿色木霉、红色链包霉、黑曲霉菌丝生长有显著的抑制作用。     

比较分析草菇与其他真菌直系同源基因的关系

担子菌类的食用菌种类多、价值高、产量大,然而其产业的升级发展需要对食用菌生长发育相关生物学问题进行深入解析。目前多种食用菌完成了全基因组测序,然而作为非模式种其与模式丝状真菌间的直系同源基因目前尚缺乏全基因组水平的系统研究,在一定程度上限制了其分子生物学研究的深入。本研究以草菇为参照物种,将其与几种食用菌和模式丝状真菌进行两两直系同源基因分析,并对多物种间不同类型的直系同源基因进行功能富集。结果显示：一对一直系同源基因较多富集于基因复制、转录、翻译、修饰、加工等保守的基本功能类别;非一对一直系同源基因多属于基因家族,且包含了65%的转录因子,功能上富集在碳水化合物、脂质、氨基酸、次生代谢物及外源物质的代谢通路。无直系同源基因则较多富集在与基因重组、修复、信号转导相关的功能类别、特导性转录因子以及未知的预测基因。结果为食用菌分子生物学的深入研究提供有价值的参考。     

Partial purification and some properties of shikimate dehydrogenase from tomatoes

The partial purification of shikimate dehydrogenase (SDH) from tomato fruit was achieved by precipitation with ammonium sulphate, and chromatography on DEAE-cellulose and hydroxyapatite. The enzyme has a MW of 73000, shows an optimum at pH 9.1 and K_m values of 3.8 × 10^?5 M and 1.0 × 10^?5 M with shikimic acid and NADP as substrates. NADP could not be replaced by NAD. The tomato enzyme is competitively inhibited by protocatechuic acid with a K_i value of 7.7 × 10^?5 M. On the other hand, cinnamic acid derivatives and 2-hydroxybenzoic acid were ineffective. At 50° for 5 min the SDH is inactivated by 85%. The activity was inhibited by pCMB and N-ethylmaleimide, suggesting a requirement for SH groups. The inactivation plot of oxidation by pCMB was biphasic, and NADP decreased the reactivity of sulphydryl groups to the reagent. The activation energy was found to be 14.2kcal/mol. The properties of the SDH are discussed in relation to the enzymes from other sources.