酪氨酸对人离体滋养层细胞孕酮与hCG分泌的影响

本文观察三种剂量(2×10~(-5)mol/L,2×10~(-4)mol/L和2×10~(-3)mol/L)的酪氮酸对离体培养的滋养层细胞孕酮及hCG分泌的影响,并对其抑制效应的机理作了初步探讨。实验结果表明,三种剂量的酪氨酸均可抑制滋养层细胞孕酮分泌(P<0.01),但是,在孕酮分泌受酪氨酸抑制的同时,未见对hCG分泌发生影响(P>0.05),进一步观察了酪氨酸对滋养层细胞3β-羟甾脱氢酶活性的影响,结果表明,酪氨酸能显著抑制3β-羟甾脱氢酶活性,提示酪氨酸对滋养层细胞孕酮生成的抑制作用与抑制3β-羟甾脱氢酶活性有关。     

α-羟酸脱氢酶催化机制及其应用前景

简述α-羟酸脱氢酶家族中的乙醇酸氧化酶、乳酸单加氧酶、乳酸氧化酶、细胞色素氧化酶b2和扁桃酸脱氢酶等几种酶的蛋白质分子结构和催化机理,对该类酶的催化机制进行了比较,揭示α-羟酸脱氢酶蛋白质分子结构与功能之间的关系,为其在食品、医疗检测、重要的医药化工中间体的合成等方面的应用提供理论指导。     

睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达

从土壤中分离睾酮假单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3α-羟类固醇脱氢酶（3α-hsd）基因,将扩增产物用NdeⅠ/BamHⅠ消化,切下目的基因片段克隆到质粒pET-15b中构建重组pET-15b.将重组pET-15b转化入E.coli DH5α中,经酶谱分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3) pLysS中,用硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析并测定酶活性.粗提物中酶活性高达2.45×10⁵ U/L.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析,经一步金属螯合亲和层析纯化后,重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带,回收率达68%.活性和纯度均较高的目的蛋白3α-HSD的获得,为血清总胆汁酸酶循环法测定奠定了基础.     

分化抑制因子3的表达调控机理及其功能

分化抑制因子3（inhibitor of differentiation 3,Id3）属于螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix,HLH）转录因子家族成员之一,该分子参与细胞周期调控过程,在细胞生长与发育、机体的生理及病理过程中发挥重要调控作用。其表达和功能涉及许多复杂的调控机制。     

新疆维吾尔族运动员ACTN3基因R577X多态性研究

目的：研究新疆维吾尔族α-辅肌动蛋白-3（ACTN3）R577X多态性与运动能力相关性。方法：聚合酶链式反应．限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法。结果：①维吾尔族普通人群ACTN3 R577X多态性频率符合H-W遗传平衡标准,有群体代表性;②速度力量型项目运动员RR基因型频率明显高于对照组（P〈O．05）;③耐力型项目运动员XX基因型频率高于对照组,但差异没有显著性（P〉O．05）;④足球运动员RR基因型频率高于对照组（P〈O．05）而低于速度力量组。结论：AcrN3RR基因型与维吾尔族速度力量素质呈显著相关;没有发现XX基因型与耐力型项目存在相关性,RR基因型亦可用于足球运动员选材的辅助因子。     

比色法快速测定乳酸菌谷氨酸脱羧酶活力及其应用

基于Berthelot显色测定ω-氨基酸的反应 ,探讨了比色法快速测定谷氨酸脱羧酶活力的测定条件。结果表明 ,该方法灵敏度较高 ,重现性好 ,成本低 ,快捷 ,可替代氨基酸分析仪分析法。对乳酸菌谷氨酸脱羧酶提取液的适宜反应底物体系为 0.2mol LMacIlvaine ,pH4.7,内含 0.1mmol LPLP (5 磷酸吡哆醛 ) ,10mmol L底物L MSG (L 谷氨酸钠 )。 2 0 0 μL底物溶液和 1～ 1 0 0 μL酶液在 3 0℃反应 ,然后冰浴中加入 2 0 0 μ/L 0.     

采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析

为了研究膜蛋白的跨膜结构,进行拓扑学分析是十分重要的.有许多分析膜蛋白拓扑结构的方法,本文采用烟草蚀斑病毒（TEV）酶特异性切割测试蛋白中跨膜片段的前段或后端所插入的tev识别序列EXXYXQ(S/G),如果TEV酶能够切割,表明该序列位于目标蛋白的细胞 质外.将Tev识别序列ENLYFQG 分别插入到拟南芥整合膜蛋白的的跨膜区域,然后转化进入酿酒酵母中. 消解酶(zymolyase)酶破除酵母的细胞壁后,TEV酶消化球状体,最后通过Western免疫印迹法来分析结果.有关该方法的注意事项在结果中进行了讨论.     

应用ROC曲线分析泪液（1-3）-β-D葡聚糖对真菌性角膜炎的诊断价值

目的 探讨真菌性角膜炎患者泪液（1-3）-β-D葡聚糖的阈值,通过受试者工作特征曲线（ROC）评价其对真菌性角膜炎的诊断价值。方法 分别测定100例真菌性角膜炎患者和100例健康志愿者泪液中（1-3）-β-D葡聚糖水平,应用ROC曲线评估泪液（1-3）-β-D葡聚糖诊断真菌性角膜炎的最佳临界值及其灵敏度、特异性。结果 泪液（1-3）-β-D葡聚糖诊断真菌性角膜炎的ROC曲线下面积为0.992,阈值为23.82 pg/mL,灵敏度为97.0%,特异性为98.0%。结论 泪液（1-3）-β-D葡聚糖对真菌性角膜炎的诊断具有较高的灵敏度和特异性,具有一定临床应用价值。     

α-葡萄糖苷酶基因序列分析及真核表达载体构建

目的：Aspergillus niger（CU-1）菌株α-葡萄糖苷酶基因（agdA）克隆并对其序列进行分析,构建该基因的真核表达载体。方法：设计合成的一对特异性引物,采用PCR以总DNA为模板,扩增得到DNA片段（D1）;采用RT-PCR方法扩增得到DNA片段（D2）。将DNA片段D1和D2转入大肠杆菌中并进行了序列测定,序列进行BLAST比对分析。将α-葡萄糖苷酶基因的cDNA片段与表达载体pGAPZαA连接,构建重组表达载体。结果：基因agdA大小为3 127bp,含有3个外显子和4个内含子。该基因的cDNA序列大小为2 958bp,包含完整的编码框,编码985个氨基酸。agdA基因序列与已发表的α-葡萄糖苷基因序列同源性达99%,其中有6个位置的碱基发生了变化。已成功构建重组表达载体pGAPZαA-agdA。结论：Aspergillus niger（CU-1）菌株α-葡萄糖苷酶基因序列分析及重组表达载体pGAPZαA-agdA的构建为在毕赤酵母中表达Aspergillus niger（CU-1）菌株的α-葡萄糖苷酶奠定基础。     

以BAC为基础的水痘-带状疱疹病毒的感染性克隆技术及其应用

水痘-带状疱疹病毒（VZV）属于疱疹病毒科α亚科,其原发感染为水痘,潜伏再度激活则引起带状疱疹。目前对其基因功能和疫苗的减毒机制尚不十分清楚。细菌人工染色(BAC)是一种新的用于大分子DNA克隆的载体系统,它具有容量大、遗传稳定、操作简单等优点。将VZV全基因组克隆至BAC系统构建成VZV的感染性克隆,并利用现代基因修饰技术可极大促进对该病毒的研究。就近年来以BAC为基础VZV感染性克隆技术的建立和应用做一综述。     

水芹肉桂醇脱氢酶基因的克隆与表达特性分析

以‘八卦洲水芹’及其紫色叶柄突变型水芹‘南选八卦洲紫水芹’为实验材料,利用RT-PCR方法从‘南选八卦洲紫水芹’中克隆得到水芹肉桂醇脱氢酶(CAD)基因,命名为OjCAD。OjCAD基因开放阅读框长为1 074bp,编码357个氨基酸。OjCAD蛋白相对分子质量为39 143.10,理论等电点为6.91,属于MDR家族。系统进化分析显示,水芹OjCAD与同属伞形科的胡萝卜CAD进化关系最近,具有高度保守性。OjCAD编码的蛋白属于疏水蛋白,空间结构主要由7个α-螺旋和17个β-折叠组成。实时定量PCR分析显示,OjCAD基因在紫色和非紫色水芹的叶片和叶柄中相对表达量存在差异,水芹OjCAD基因在叶片中的表达量显著高于叶柄,在‘八卦洲水芹’中的表达量高于‘南选八卦洲紫水芹’。该研究结果为进一步分析水芹木质素生物合成奠定了基础。     

真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用

目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。     

细微短足软珊瑚的化学成分研究

本文对采自广西涠洲岛海域细微短足软珊瑚（Cladiellasubtilis）的化学成分进行研究,经理化常数和波谱数据分析,分别鉴定为（20R,24S）-5-烯-21羧基-麦角甾-3β-醇（1）、柳珊瑚甾醇（2）、鲨肝醇（3）及麦角甾-5-烯-3β-醇（4）。对细微短足软珊瑚（Cladiella subtilis）化学成分的研究尚属首次。     

肺炎支原体肺炎合并喘息患儿血清25（OH）D3水平与肺功能的相关性及其影响因素分析

摘要 目的：探讨肺炎支原体肺炎（MPP）患儿合并喘息的影响因素,分析血清25-羟维生素D3[25(OH)D-3]水平与MPP合并喘息患儿肺功能的关系。方法：选择2017年1月至2020年1月我院收治的90例MPP患儿,根据是否合并喘息将其分为MPP合并喘息组（39例）和MPP未合并喘息组（51例）。检测血清25(OH)D-3水平以及肺功能[最大呼气流速（PEF）、PEF占预计值百分比(PEF% pred)、第一秒用力呼吸容积（FEV₁）、用力肺活量（FVC）、FEV₁/FVC比值、FEV₁占预计值百分比（FEV1%pred）],Pearson相关性分析25(OH)D-3与MPP合并喘息患儿肺功能的关系,单因素及多因素Logistic回归分析影响MPP合并喘息的危险因素。结果：MPP合并喘息组血清25(OH)D-3水平、PEF、PEF% pred、FEV₁/FVC比值、FEV1%pred低于MPP未合并喘息组（P＜0.05）,Pearson相关性分析显示,MPP合并喘息组患儿血清25(OH)D-3水平与PEF、PEF% pred、FEV₁/FVC比值、FEV₁%pred均呈正相关（r=0.519、0.612、0.571、0.593,P＜0.05）。单因素分析显示,MPP合并喘息组年龄低于MPP未合并喘息组（P＜0.05）,病程长于MPP未合并喘息组（P＜0.05）,肺部啰音比例、嗜酸性粒细胞计数、MP-IgM抗体滴度高于MPP未合并喘息组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示低龄、肺部啰音、嗜酸性粒细胞计数增高、MP-IgM抗体滴度增加、25(OH)D-3减少是MPP合并喘息的危险因素（P＜0.05）。结论：MPP合并喘息患儿25(OH)D-3水平较低,低龄、肺部啰音、嗜酸性粒细胞计数增高、MP-IgM抗体滴度增加、25(OH)D-3缺乏为MPP合并喘息的危险因素,25(OH)D-3缺乏与MPP合并喘息患儿肺功能下降有关。     

弗赖森草螺菌RE3-3合成生长素及其促生作用的研究

研究弗赖森草螺菌RE3-3菌株的培养条件对其生长素(IAA)生物合成的影响,并观察菌株合成IAA对芦苇及香蒲幼苗的促生影响。在单因素筛选和菌液初始浓度确定的基础上,对菌株RE3-3合成IAA的培养条件进行优化;以IAA标准物质为对照,对菌株合成IAA促进芦苇及香蒲苗的生长能力进行分析。通过高效液相色谱与质谱分析鉴定其产物为IAA;培养基中含0.07%L-色氨酸及1%葡萄糖,在p H 7.0、温度30℃、培养时间48 h的最佳培养条件下,菌株RE3-3可产生最大量的IAA(74 mg/L);菌株合成IAA作用芦苇及香蒲苗时,其促生效果最显著,植株根长、茎长明显提高。通过改变菌株RE3-3的培养条件,可提高其合成IAA的能力,且菌株RE3-3合成IAA具有显著的促生效果。     

用高效液相色谱法测定开裂甾体化合物

用反相HPLC内标定量方法测定18-甲基-3-甲氧基-8,14-开裂雌甾-1,3,5(10),9(11)-四烯-14,17-二酮微生物不对称还原成具有光学活性17β-羟基化合物的转化率。色谱采用μ-BondapakC₁₄色谱柱;甲醇-水73∶27(V/V)为流动相,流量0.8 ml/min;UV 254 nm检测;雄甾-4-烯-3,17-二酮作内标。     

分枝杆菌HGMS2中类固醇C20-羟基脱氢酶的鉴定

分枝杆菌常被用作甾体药物中间体生产菌种,然而当前人们对其具体的甾醇降解机制仍然不是很清楚。为了获得C20-羟基甾药中间体,文章直接以RS为底物进行了转化,并通过对转化产物进行TLC、HPLC、LS-MS和核磁分析,初步确定分枝杆菌中存在类固醇C20-羟基脱氢酶（1DHC）参与的代谢途径。同时,基于生物信息学和结构生物学,通过序列和结构比对分析,最终从分枝杆菌中鉴定出了一个与类固醇C20-羟基脱氢酶同源性很高的基因。将该基因在大肠杆菌中异源表达,并对其功能活性进行分析,证明该基因所编码的酶和类固醇C20-羟基脱氢酶具有相同的功能活性。文章首次从分枝杆菌中鉴定出一种类固醇C20-羟基脱氢酶,使研究者对分枝杆菌甾醇代谢机制有了更深入的理解,同时也为新型甾药中间体的制备以及分枝杆菌的改造奠定了理论基础。     

赭曲霉转化甾体过程中色素的分析和控制

通过对甾体Ｃ_１１α羟基化菌株赭曲霉发酵液中色素的分离纯化,得到一种砖红色的色素。经紫外－可见分光光度法、红外光谱法和核磁共振谱图分析,证明该色素为苯醌类色素,与初级代谢过程中的芳香族氨基酸有相同的代谢途径,利用芳香族氨基酸的代谢模式,在加有２％沃氏氧化物的发酵体系中添加５ｍｍｏｌ／Ｌ的色氨酸,或５ｍｍｏｌ／Ｌ等体积的苯丙氨酸和酪氨酸混合液,均能明显抑制发酵过程中色素的产生,提高产物的收率。同时通过诱变选育的莽草酸缺陷型菌株发酵后,甾体转化力均有所下降,但发酵液不再产生砖红色色素,进一     

灯盏花 chi 的克隆及其生物信息学分析

查尔酮异构酶（CHI）是调控黄酮生物合成的关键酶,分离和克隆这一酶的功能基因,对利用转基因技术进行灯盏花黄酮生物合成的调控具有重要意义。本研究采用RT-PCR和RACE技术,获得了chi cDNA全序列,GenBank登录号为GU208823.1,序列全长996 bp,开放阅读框为594 bp,编码197个氨基酸,3-Race有一个多聚腺苷酸加尾信号。应用软件预测该基因编码蛋白分子量约为21.6 kD,理论等电点为4.78。该基因编码的蛋白无跨膜结构域,其二级结构的主要构件为α-螺旋和随机卷曲。对其三级结构进行了建模,表明其结构与苜蓿chi的三级结构相似。同时根据灯盏花chi N端序列变化的特征,提出了灯盏乙素的合成可能与chi在细胞亚结构的定位及其与合成代谢相关酶形成复合酶的特异性有关。研究为利用基因工程定向改变灯盏花黄酮代谢产物奠定了基础。