植物材料中尿囊素及尿囊酸的高效液相色谱法测定

尿囊酸性质极不稳定,需要有快速、准确的分离检测方法。本试验用高效液相色谱法分离检测尿囊素和尿囊酸,并认为该法是一种较好的测试方法。     

动物体尿囊酸酶的研究进展

尿囊酸酶是嘌呤代谢途径的重要酶之一,与动物排泄物的产生直接有关.结合当前研究进展,总结了动物体尿囊酸酶的种属特异性、蛋白质及其基因结构和组织表达.并对尿囊酸酶的活性检测方法进行了简要介绍.     

四季豆幼苗尿囊酸酰胺水解酶的纯化和性质研究(简报)

从四季豆幼苗提取、部分纯化尿囊酸酰胺水解酶,分离出两个同功酶：一分子量同功酶（尿圳酸酰胺水解酶Ⅰ）,另一为小分子量同功酶（尿囊酸酰胺水解酶Ⅱ）,并对后者的性质进行研究。     

四季豆幼苗中尿囊酸酰胺水解酶的一些特性

酰脲代谢在许多固氮豆科植物氮素代谢中起重要作用;尿囊酸的酰胺水解酶(EC3.5.3.9)分解尿囊酸成为脲基乙醇酸和CO2、NH3,脲基乙醇酸的酰胺水解酶进一步分解脲基乙醇酸产生乙醛酸和CO2、NH3.该文首次报告测定四季豆尿囊酸降解酶(分解尿囊酸的酶)的方法,酶反应基质需要盐酸苯肼存在.在四季豆干种子、幼苗根、茎和叶,均可测出尿囊酸降解酶活力.从四季豆幼苗分离出两个尿囊酸降解酶.一个分子量大于200 kD,另一个分子量为13.5 kD;小分子量的尿囊酸降解酶(没有脲基乙醇酸酰胺水解酶或脲酶活力)用于性质研究.酶反应产物分析表明,该酶是尿囊酸的酰胺水解酶.该酶反应的最适pH为8.5.Mn2 是该酶的金属辅助因子.Km为76μmol/L,Vmax为16.7 nKat/mg(=1 002 nmol min1mg1).乙醛酸和乙醇酸抑制该酶活力.赖氨酸残基和色氨酸残基是酶活力的必需基团;巯基和酪氨酸残基不是酶活力的必需基团.     

盘基网柄菌细胞发育过程中尿囊酸酶的亚细胞定位

利用胶体金免疫电镜技术,观察了盘基网柄菌细胞分化与凋亡过程中胞内尿囊酸酶的位置变化。结果表明,在细胞聚集期细胞产生的尿囊酸酶主要分布于线粒体及周围细胞质内。到了细胞丘时期,尿囊酸酶只特异地存在于发生内自噬的线粒体内,且仅局限于线粒体因内自噬产生的空泡区域,这些发生线粒体内自噬的细胞将分化成前孢子细胞。随着前孢子细胞分化的进行,尿囊酸酶颗粒在细胞内分布逐渐减少,在靠近质膜处的空泡内还能观察到一些酶颗粒;而另一些细胞内,几乎所有的胞器内都能观察到酶颗粒,一直延续至柄细胞形成。从中可以看到尿囊酸酶在将发育成孢子细胞和柄细胞两种类型细胞内的分布位置明显不同,结果提示了尿囊酸酶蛋白与盘基网柄菌细胞分化和凋亡调控途径有密切关系。     

蚕豆植株中酰脲分布和叶片中酰脲水解活性

蚕豆根、茎和叶含有0.31～0.70 μmol酰脲·g~(-1)FW,并受结瘤和生长发育的影响。摘除正在生长的器官可观察到同腋位叶片酞脲含量暂时升高现象。 叶片中酰脲主要是尿囊酸。尿囊素酶和脲酶活性分别为0.30 μmol尿囊酸·g~(-1)FW·h~(-1)和0.19 μmol NH_3·g~(-1)FW·h~(-1)。尿囊酸含量和尿囊素酶活性日变化相似,只是后者峰值比前者出现早。     

放线菌结瘤植物根与根瘤中有机氮化物的组分及其上运形式

杨梅、沙棘和赤杨三种放线菌结瘤植物根瘤、根部有机氮化物的组分中,都含有占总有机氮化物50％以上的尿囊酸,说明在它们的根瘤中合成了大量的酰脲;同时,三种植物结瘤植株的茎木质部提取物中也含有大量的尿囊酸,表明根瘤将其合成的酰脲向植物地上部位运送。三种植物的根瘤还将其合成的特定的氨基酸及酰胺向地上部位转运,其中杨梅根瘤将固定的氮素以Asn和Gln的形式输出,而根部则以Arg的形式向上转运;沙棘根瘤以Ash,Gln及Ser,赤杨根瘤以Cit的形式合成并转运固定的氮素;后两种植物的无根瘤植株,以NH_4~+为氮源时,在转运的氨基酸组分中Arg的比例明显提高。     

八株弗氏中华根瘤菌的血清学和氮代谢研究

本文对从中国东北地区土壤中分离到的８株弗氏中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍｆｒｅｄｉｔ）进行了血清学和氢代谢研究。交叉凝集试验结果表明其中存在３种血清型,而Ｓｊ５与国内外目前发现的１４种Ｓ．ｆｒｅｄｉｉ接种的大豆依赖共生固氮作用,在其株木质部汁液中,含有大量的酰脲（尿囊酸＋尿囊素）,它是共生固氮氮素贮存和运输的主要形式,与接种Ｂ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ的值株木质部汁液中的氮运输特征基本相同。而施以无机氮源的大豆植株,其木质部汁液中酰脲含量相对较低,但却含有相对多的氮基酸［１］。     

苛求芽孢杆菌尿囊酸酰胺水解酶性质的研究

研究了苛求芽孢杆菌尿囊酸酰胺水解酶的基本性质、稳定性及调节。粗酶作用于尿囊酸的Ｋｍ为７．１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ为５０μｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ^－１·ｍｇ^－１蛋白质。Ｃｏ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｃｄ^２＋可部分代替Ｍｎ^２＋作为金属辅因子,活力分别为对照的１７％,１４％和１１％。Ｆｅ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｚｎ^２＋分别抑制酶活力（％）：     

大荚箭舌豌豆植株中酰脲的分布(简报)

酰脲(尿囊酸和尿囊素)是一种很重要的含氮化合物。它存在于许多有机体中,特别是高等植物,尤其在许多豆科植物中。最近,发现这些物质与许多豆科植物共生固氮有关,且开拓了豆科植物酰脲的研究。 酰脲广泛分布在槭树科和紫草科中。豆科植物的Vigna radiata、Vigna angularis、     

赤豆种子萌发中幼苗酰脲含量及尿囊素酶活力变化动态

赤豆种子萌发过程中,幼苗迅速合成酰脲,在酰脲含量达到最大值前,尿囊酸含量高于尿囊素含量,子叶合成酰脲最迅速;酰脲含量达到最大值后,茎带叶的酰脲含量最高。幼苗累积酰脲在品种间相似。种子萌发过程中,幼苗尿囊素酶活力迅速呈线性增加,且与酰脲含量变化趋势一致。幼苗尿囊素酶较耐热。     

小鼠骨髓间充质干细胞分离方法的比较与探讨

目的 探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。方法 分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7～9周龄雄性C57BL/6小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs形态；运用流式细胞术检测mBMSCs特征性免疫表型；采用多向分化诱导检测mBMSCs成骨分化能力与成脂分化能力。结果 分离获得的原代细胞首次换液后于倒置显微镜下观察：骨片消化爬片法分离的细胞，仅见大量骨碎片和杂细胞，该法所分离细胞不再进行后续检测评估；全骨髓贴壁法分离的细胞，仅可见少量多角形贴壁细胞，夹杂大量杂细胞；骨片消化液上清法分离的细胞也可见较多长梭形、三角形贴壁细胞，但杂细胞较多；骨片消化研钵法分离的细胞，可见较多长梭形、多角形贴壁细胞，杂细胞少。分离细胞经培养传代到第3代(P3代)时，一方面采用流式细胞术分析mBMSCs特征性免疫表型，结果表明骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离的mBMSCs纯度均较高，全骨髓贴壁法不理想；另一方面，进行成骨分化诱导与成脂分化诱导，结果表明与全骨髓贴壁法分离的细胞相比，骨片消化液上清法和骨片消化研钵法所分离...     

微芯片电泳-紫外检测系统分析蛋白质

微芯片电泳是基于微机电加工技术(MEMS)工艺,在芯片上的微管道中完成电泳检测过程的新型技术.依据紫外吸光度分析法,对蛋白质样品进行电泳分离与紫外检测.实验采用自控接口模板对进样及分离电压进行了系统的程序化控制,从而准确地控制整个电泳、检测流程,提高了微芯片电泳的分离效率和检测灵敏度.实验结果表明,夹流进样的方法可以有效分离混合蛋白,可用于蛋白质样品的分离检测.     

大豆蛋白快速检测方法的对比研究

本研究目的为了寻找一种快速检测大豆分离蛋白含量的方法,本试验采用双缩脲法、Folin-酚试剂法、考马斯亮蓝染色法,并研究这些法是否适合检测大豆分离蛋白。最终采用双缩脲法检测大豆分离蛋白中蛋白质的含量。     

基于分子印迹技术的细菌传感检测

分子印迹因其材料结构的稳定性及靶标物识别的特异性而被广泛应用于生化分离分析的相关领域。近年来，将具有选择性捕获、分离和富集靶标物等优势的分子印迹技术与生化传感检测技术有机结合，是目前细菌等微生物高效检测领域备受关注的研究热点。本文就分子印迹技术在细菌分析中的印迹方法、分析检测技术和典型应用等方面的最新进展进行综述。首先介绍了细菌分子印迹原理，对表面印迹的材料以及直接压印、间接印迹和电聚合等制备方法进行了总结和归纳；重点对基于荧光、电化学、石英晶体微天平（QCM）等检测模式的细菌印迹传感监测在细菌分析检测及其与微流控芯片技术耦合的应用和进展进行了综述；最后，提出了存在的挑战及发展的趋势。     

新型冠状病毒荧光定量PCR的Ct值与病毒分离的结果分析

为探究利用SARS-CoV-2的ORF1ab基因和N基因作为靶标进行荧光定量检测的Ct值与SARS-CoV-2病毒分离阳性率之间的关系。本研究对广州入境的新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本进行荧光定量PCR检测和用Vero细胞进行病毒分离,统计病毒分离率与荧光定量PCR检测Ct值之间的关系,再通过logistics回归模型用Ct值来预测病毒分离率;同时对收集到的临床样本进行三代测序及进化树的构建。结果显示,在160例新型冠状病毒肺炎输入病例临床样本中,分离到74株新型冠状病毒,分离阳性率为46.25%,分离到包括20株Alpha、9株Beta、2株Delta等VOC毒株和2株Epsilon、1株Eta等VOI毒株,其他变异株42株;病例样本荧光定量PCR检测ORF1ab基因Ct值为16.12～39.00,N基因的Ct值为17.82～39.41;病毒分离率与样本荧光定量PCR检测的ORF1ab基因和N基因的Ct值均呈负相关,在Ct值>31时,分离率仅9.10%(6/66),而当Ct值<23.1时,病毒分离阳性率可超过95%,分离到新冠病毒的病例样本荧光定量PCR检测的ORF1a...     

多重示踪技术在植物学研究中的应用

简要阐述了多重示踪技术在植物学研究中的应用，主要内容有多重示踪剂的制备和分离，检测植物对金属离子的吸收和在体内的分布状况，以及在植物体细胞胚发生中对金属离子吸收的动态变化。     

基于GC-MS法的毛发中苯丙胺类药物定性定量检测研究

药物滥用已经成为人们重点关注的一个公共卫生与社会问题。在药物滥用监测中，毛发检测具有非常重要的意义。文章旨在设计一种快速、准确、灵敏的定性定量分析方法来检测毛发中的苯丙胺类药物，采用气相-质谱联用法开展实验，并通过前处理简便、分离提取率高的步骤，成功建立起了检测人体毛发中苯丙胺类药物的方法。文章为毛发检测在药物滥用监测中的应用提供了重要的参考，并且有望在临床诊断与法医学领域实现广泛应用。     

酵母亚细胞结构分离效率评估菌株的构建 *

背景: 真核细胞依赖其亚细胞结构高效地完成复杂的生化反应。尽管目前有一些亚细胞结构分离技术,但却缺乏评估这些分离技术的简单、有效方法。目的: 构建可以用来检测亚细胞结构分离效率的酿酒酵母菌株。方法: 通过传统的分子生物学与细胞生物学方法以酿酒酵母为背景构建了亚细胞结构分离效率评估菌株,并进行可行性检测。首先,将酵母各细胞器、自噬体及质膜的标记蛋白进行分组,用不同的蛋白标签分别标记每组蛋白。然后,以标记蛋白-GFP/RFP作为对照组通过免疫荧光法检测蛋白标签对标记蛋白的亚细胞定位是否有影响。最后,通过非连续性密度梯度离心验证该检测菌株能否用来检测亚细胞结构的分离效率。结果: 成功构建了酵母亚细胞结构分离效率评估菌株,该菌株标记了大多数酵母细胞亚细胞结构。挂标签的标记蛋白仍然定位在各自标记蛋白对应的亚细胞结构。非连续性密度梯度离心后,酵母各个亚细胞结构的标记蛋白均可以被检测到。结论: 该酵母亚细胞结构分离效率评估菌株是检测各亚细胞结构分离结果的方便工具,对今后酿酒酵母细胞生物学的研究有潜在的应用价值。     

16S rRNA PCR鉴定嗜酸乳杆菌鸡源分离株

用自行设计的嗜酸乳杆菌16S rRNA的特异性引物和建立的PCR方法对初步鉴定为嗜酸乳杆菌的鸡源分离株进行检测。PCR检测结果表明分离株和嗜酸乳杆菌参考株扩增出大小一致的目的片段,从分子水平对鸡源分离菌进行了鉴定。