蝮蛇毒介导小鼠急性心肌损伤及心肌组织TNF-α表达的研究

目的探讨蝮蛇毒介导小鼠心肌组织中TNF-α蛋白表达变化与不同蝮蛇毒剂量、中毒时间的关系。方法确定LD50蝮蛇毒注射剂量。将96只小鼠随机分为空白对照组、蛇毒低剂量(0.5mg/kg)组、蛇毒高剂量(1.0mg/kg)组,并按中毒时间设4水平组,即3、6、24、48h组,采集小鼠心肌标本,免疫组化检测心肌组织中TNF-α蛋白的表达情况。结果蛇毒低剂量组及蛇毒高剂量组小鼠心肌TNF-α蛋白表达明显高于空白对照组(均P0.05);而蛇毒高剂量组明显高于低剂量组(P0.05);6h组明显高于3h组(P0.05);24h组高于6h组(P0.05);48h组高于24h组(P0.05)。随着蝮蛇毒剂量的增加、中毒时间的延长,心肌TNF-α蛋白的表达越高。结论蝮蛇毒导致小鼠急性心肌损伤,TNF-α蛋白表达增高,且随着蝮蛇毒剂量的增加、中毒时间的延长,心肌TNF-α蛋白的表达越高,呈一定的时间、剂量效应趋势,提示TNF-α蛋白过度表达可能是蝮蛇毒导致小鼠急性心肌损伤的机制之一。     

蝮蛇毒致小鼠肾损伤模型的建立

目的探索一种建立蝮蛇毒致肾损伤动物模型的方法。方法将清洁级12周龄雄性昆明小鼠72只,随机分为9组,每组8只,A、B、C组为不同时间的对照组（A-3h,B-3d,C-5d）;D、E、F组为蝮蛇毒1mg／kg肌注组（D-3h,E-3d,F-5d）;G、H、I组为蝮蛇毒2mg／kg肌注组（G-3h,H-3d,I-5d）。按照分组要求计算每组小鼠中每只小鼠需肌注的蝮蛇毒的总量．配制2种不同浓度的蝮蛇毒液．D、E、F、G、H、I组小鼠分别肌注不同浓度的蝮蛇毒液0．15ml,A、B、C组小鼠右臀部注射生理盐水0．15ml以进行对照。结果肌注蝮蛇毒后的小鼠均出现中毒症状,但各组小鼠均无死亡。E、F、H、I组小鼠的肾功能与正常对照组比较有明显差异（P〈0．05）。D、E、F、G、H、I组小鼠均有如下病理学改变：肾被膜下出血．肾皮质充血．肾小球充血。肾小囊扩大．肾小管周围毛细血管充血．肾小管肿胀。小管细胞变性等。结论肌注蝮蛇毒是一种建立蛇毒致小鼠肾损伤动物模型的较好方法。     

髓过氧化物酶与大剂量顺铂所致小鼠肝功能变化关系的探讨

目的利用大剂量顺铂（Cisplatin,DDP）诱发小鼠急性肾功能衰竭的动物模型,了解大剂量DDP在引起肾损伤的同时对小鼠肝的毒性作用,探讨髓过氧化物酶（Peroxidase,MPO）与DDP所致小鼠肝功能变化的关系。方法 C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,依体重随机分为DDP用药组和生理盐水（NS）对照组。15 mg/kg DDP单次腹腔内注射,等量NS对照。分别取对照组小鼠和DDP用药后6、12、24和48 h小鼠各10只,称重后乙醚麻醉,内眦静脉取血检测肝、肾功能;剖腹取肝、称重、计算肝系数,并取少量肝组织行HE染色、形态学观察;检测血浆和肝组织匀浆中MPO活性,统计学分析。结果大剂量DDP用药后48 h,小鼠出现急性肾功能衰竭。DDP用药后6 h血清谷丙转氨酶（ALT）含量达（91.0±11.3）IU/L,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,随后血清ALT含量持续维持在高水平。DDP用药后各组小鼠肝系数明显升高,光镜下见肝细胞广泛变性水肿,肝小叶中可见点状坏死及炎细胞浸润。DDP用药后6 h,小鼠肝组织匀浆MPO含量显著升高,达（1.54±0.45）U/g,与对照组（0.58±0.28）U/g差异有统计学意义（P〈0.01）,随后MPO含量降至正常水平;DDP用药后小鼠外周血MPO含量缓慢增高,用药后48 h达（12.78±2.78）U/L,与对照组（8.06±1.89）U/L比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论大剂量DDP在诱发小鼠急性肾功能衰竭的同时还可引起小鼠急性肝细胞的破坏,其发生可能与肝组织内白细胞的激活及MPO的释放有关。     

蛇毒清合剂治疗海蛇咬伤临床观察

目的观察蛇毒清合剂对海蛇咬伤的疗效。方法将44例海蛇咬伤患者分为治疗组22例,对照组22例,两组患者均给予常规治疗,治疗组加服蛇毒清合剂,并比较两组患者咬伤48h后的血清酶学三项（CK、LDH、AST）,比较两组患者治疗7天后的疗效、治疗结束时疗程及呼吸衰竭发生率、急性肾损伤发生率。结果两组患者临床疗效比较,治疗组优于对照组（P〈0．05）,酶学三项和疗程的差异均有统计学意义（P〈O．05）}其呼吸衰竭发生率、急性肾损伤发生率虽有差异,但无统计学意义（P〉0．05）。结论蛇毒清合剂对海蛇咬伤有显著疗效。     

墨旱莲对4种蝮蛇毒引起的炎症和出血的影响

目的探讨墨旱莲提取液对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒所致的炎症和出血的影响。方法应用短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒所致大鼠足跖肿胀的致炎模型,观察墨旱莲提取液对蛇毒所致大鼠足跖肿胀的影响。墨旱莲提取液分别与不同蛇毒混合,给小鼠腹部皮下注射,观察其对蛇毒引起的小鼠皮下出血的影响。结果墨旱莲提取液15g／kg连续2次灌胃给药,对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒或尖吻蝮蛇毒所致大鼠足跖肿胀的急性炎症造模和短尾蝮蛇毒棉球肉芽肿的慢性炎症造模(20g／kg)均有明显的抑制作用,对这些蛇毒引起的小鼠皮下出血也能明显抑制。结论墨旱莲提取液对短尾蝮蛇毒、蛇岛蝮蛇毒、白眉蝮蛇毒及尖吻蝮蛇毒引起的炎症和出血均有明显的抑制作用。     

NF-κ B激活在兔急性心肌梗死再灌注后无复流中的意义

目的：观察心肌核因子-κB（NF-κB）在急性心肌梗死（AMI）再灌注后无复流的活化情况,探讨NF-κB促进无复流发生发展的作用机制。方法：24只新西兰大白兔随机分为假手术组（冠状动脉只穿线不结扎）和缺血再灌注组（结扎冠状动脉2小时,再灌注1小时）,每组12只。采用凝胶阻滞迁移分析方法（EMSA）检测正常区、缺血区和无复流区心肌组织中NF-κB活性;ELISA法测定不同时点血浆中白细胞介素-6（IL-6）、超敏C反应蛋白（CRP）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;光镜、电镜观察心肌组织病理变化。结果：（1）与正常区相比,缺血区和无复流区心肌组织中NF-κB活性异常升高（P〈0.01）。（2）与结扎前相比结扎后2h、再灌注后1h血浆IL-6、CRP、TNF-α水平呈进行性升高（P均〈0.05）。（3）NF-κB的活性与无复流面积、血浆IL-6、CRP以及TNF-α水平呈正相关（分别为r=0.844,P〈0.01;r=0.682,P〈0.05;r=0.687,P〈0.05;r=0.893,P〈0.01）。（4）无复流面积与血浆IL-6、CRP以及TNF-α水平呈正相关（分别为r=0.861,P〈0.01;r=0.806,P〈0.01;r=0.877,P〈0.01）。（5）光镜及电镜结果显示无复流区的心肌组织损伤较缺血区更为严重。结论：急性心肌梗死再灌注后无复流现象的发生可能与局部心肌组织中NF-κB的过度活化有关,活化的NF-κB通过促进IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,参与无复流的发生发展过程。     

乌梢蛇血清对白眉蝮等3种蛇毒解毒作用初探

目的 探讨乌梢蛇血清对孟加拉眼镜蛇、白眉蝮、莽山烙铁头3种毒蛇的解毒作用。方法 给18～22g昆明小鼠分别注射盂加拉眼镜蛇毒、白眉蝮蛇毒及莽山烙铁头蛇毒后,随机分组注射不同浓度的乌梢蛇血清,并观察对3种蛇毒的解毒效果。结果 发现（1）乌梢蛇血清对盂加拉眼镜蛇毒有解毒作用．且注射蛇毒与4ml／kg的血清混合液的解毒作用最好,但随着间隔时间的延长,解毒作用逐渐减弱;（2）乌梢蛇血清对白眉蝮蛇毒有解毒作用,且注射量为1ml／kg和2ml／kg时出现了拮抗作用;（3）乌梢蛇血清对莽山烙铁头蛇毒有解毒作用,但莽山烙铁头蛇毒对血清注射量和间隔时间不敏感,在血清注射量为2ml／kg时和注射蛇毒10min后,再注射4ml／kg的血清时出现了拮抗作用。（4）只给小鼠注射不同量的乌梢蛇血清,发现乌梢蛇血清对小鼠无明显的毒副作用。结论 乌梢蛇血清对3种蛇毒均有解毒作用。     

人参多糖对环磷酰胺的增效减毒作用

目的探讨人参多糖（ginseng polysaccharide,GPS）对化疗药物环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）抗肿瘤的增效减毒作用。方法建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,随机分组,设模型对照组（生理盐水）、环磷酰胺组（30 mg/kg）、人参多糖给药组（7.5、15、30 mg/kg剂量组）和联合给药组（GPS 7.5、15、30 mg/kg,CTX 30 mg/kg）;人参多糖尾静脉注射,CTX腹腔给药,连续给药10 d;测定抑瘤率、血液学指标、脾脏系数和胸腺系数,评价人参多糖对环磷酰胺的增效减毒作用。结果 GPS、GPS＋CTX各组肿瘤生长明显低于模型对照组（P〈0.01）,GPS中、高剂量＋CTX联合给药组肿瘤生长明显低于CTX组（P〈0.05,P〈0.01）。GPS高剂量＋CTX组与CTX组相比,体重、脾脏指数和胸腺指数明显升高（P〈0.05）。结论人参多糖对化疗药物环磷酰胺抗小鼠肝癌H22肿瘤具有增效减毒作用。     

不同剂量阿霉素致大鼠局灶节段硬化肾病模型的建立比较

目的探讨不同剂量阿霉素对大鼠局灶节段硬化肾病模型的影响。方法左侧肾切除加尾静脉注射不同剂量阿霉素致大鼠肾脏局灶节段性硬化,观察不同剂量阿霉素对模型大鼠成活率、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮、肾脏病理的影响。结果不同阿霉素注射剂量组大鼠4周、8周成活率随着注射剂量的升高呈逐渐下降趋势,且4周、8周时阿霉素注射剂量4.5～6 mg/kg组模型大鼠成活率均低于50%;8周时成活率与注射剂量呈高度显著性负相关（r=0.9045,P〈0.01）。各阿霉素注射剂量组于1周出现尿蛋白明显升高（P〈0.01）、2周出现血清肌酐明显升高（P〈0.01）、4周出现血清尿素氮明显升高（P〈0.01）,并均呈进行性增高,2周时除3 mg/kg组外,其余各组血清尿素氮较正常组高（P〈0.01,P〈0.05）;8周时各注射剂量组大鼠24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血清尿素氮与阿霉素注射剂量呈高度显著性正相关（r=0.942 9,P〈0.01;r=0.938 4,P〈0.01;r=0.956 8,P〈0.01）。各组大鼠肾脏病理均提示肾小球出现局灶节段硬化表现,且硬化程度随注射剂量的增加而呈加重趋势。结论阿霉素尾静脉注射剂量3 mg/kg模型组大鼠死亡率低,同时大鼠肾脏病理又能表现出符合人类肾小球局灶节段硬化的改变,是较为理想的造模剂量。     

内毒素在大剂量顺铂所致大鼠急性肾损伤过程中的变化及意义

目的利用大剂量顺铂（cisplatin,DDP）所致大鼠急性肾功能衰竭的动物模型,观察外周血内毒素（endotoxin）在大鼠急性肾损伤中的变化及其意义。方法SD大鼠36只,雌雄各半,依体重随机分为DDP用药6h、48h、对照组和生理盐水（NS）用药6h、48h、对照组,每组6只。10mg／kgDDP单次腹腔内注射,等量Ns对照。观察并记录用药后对照组大鼠的毒副反应;用药6、48h各组大鼠无菌条件下心脏穿刺取血、肝素抗凝,检测外周血内毒素含量,同时内眦静脉取血,测定血清尿素氮、肌酐浓度,并进行统计学分析。结果DDP用药后6h,大鼠体重开始明显降低,用药48h后,大鼠腹泻逐渐加重,用药3d后大鼠死亡。DDP用药后6h大鼠血尿素氮、肌酐的含量与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）;DDP用药后48h血尿素氮升至（18．71±9．9）mmol／L,明显高于对照组（7．48±0．6）mmol／L（P〈0．05）,同时血肌酐含量亦升至（49．6±14．1）μmol／L,与对照组（27．17±1．7）μmol／L比较差异具有显著性（P〈0．05）。DDP用药后6h所有大鼠外周血内毒素含量都低于0．0218Eu／rrd最低检出限,明显低于NS对照组大鼠（0．3141±0．1477）Eu／ml（P〈0．01）;DDP用药后48h大鼠外周血内毒素的含量增高均超过0．70Eu／ml最高检出限,明显高于NS对照组大鼠（0．1661±0．1198）Eu／ml（P〈0．01）。结论外周血内毒素含量的变化与大剂量顺铂所致大鼠急性肾损伤早期的发病机制无关,但与大鼠肾功能衰竭有关的发生相关。     

江浙蝮蛇（Agkistrodon halys Pallas）毒的抑菌作用及其抑菌组 …

This paper reports the venom from Agkistrodon halys Pallas have inhibitory activity against fungi and E. coli by tested in a disc diffusion assay. An antibacterial component--LAO from the venom were purified to homogeneous. It had not only antibacterial effect, but L-amino acid oxidase activity. And its enzymatic specific activity was 808 U/mg. The venom had at least 3 antibacterial components (I, II, III) as determined by acid polyacrilamide gel electrophoresis, LAO is the antibaterial components II.     

江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒神经生长因子的分离纯化和特性

神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗ ｔｈ ｆａｃｔｏｒ, Ｎ Ｇ Ｆ）是第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一种神经营养因子 利用 Ｐ Ｃ１２ 细胞生物活力测定为跟踪检测手段,分别经过 Ｃ Ｍ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ Ｌ ６ Ｂ、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 及 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ ｍ ｏｎｏ Ｓ层析,从３０ ｇ 江浙蝮蛇粗毒中分离纯化到２００ μｇ Ｎ Ｇ Ｆ,纯化倍数高达１０５经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 测定,该蛋白分子量为 ２６ ｋ Ｄ,由两个亚基通过二硫键交联组成二体形式等电聚焦显示其等电点为６７,与氨基酸组成分析结果相吻合 江浙蝮蛇神经生长因子的生物活力水平与小鼠２５ Ｓ Ｎ Ｇ Ｆ相当,在１～１００ μｇ／ Ｌ 的浓度范围内维持 Ｐ Ｃ１２ 细胞在无血清条件下的存活     

江浙蝮蛇毒溶血毒素晶体培养及初步晶体学研究

从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶Ａ２在ｐＨ９．５,０．０５ｍｍｏｌ／ＬＣＨＥＳ缓冲液中,用汽相悬滴扩散的方法,获得了适用于高分辨率Ｘ射线结构分析的单晶．经Ｘ２００Ｂ面探测器分析,表明该晶体属于正交晶系,Ｐ２Ｉ２Ｉ２Ｉ空间群,晶胞参数为ａ＝９７．１３,ｂ＝１０３．６９,ｃ＝２３．２７．并收集了一套衍射数据,独立衍射点数１２００１个,数据完整度为８６．２％,Ｒｍｅｒｇｅ为０．０４５９．最高分辨率达２．０,根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含两个分子．     

解毒排毒泄毒消肿法内外合治蝮蛇咬伤的临床研究

目的观察解毒排毒泄毒消肿法内外合治蝮蛇咬伤的临床疗效。方法对2005年4月～2011年12月收治的611例蝮蛇咬伤患者采用中医药解毒排毒、泄毒消肿为主的综合治疗方法治疗,观察分析其临床疗效。结果 611例患者中,治愈553例,显效34例,有效22例,无效（死亡）2例,总有效率99.67%,痊愈率90.51%。结论解毒排毒泄毒消肿法内外合治蝮蛇咬伤具有良好的疗效。     

江浙蝮蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin的研究Ⅰ.分离纯化和初步表征

江浙蝮蛇毒中存在有多种精氨酸酯酶,其中有多种已被纯化,本研究应用离子交换和凝胶过滤等方法,新分离纯化了一种精氨酸酯酶,命名为Agkihpin,分子量约为25．46KDa,等电点约为7．43,含235个氨基酸残基,糖蛋白染色阴性,是单链蛋白,对TAME的最适pH为8．2。     

蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2的空间晶体生长

对血小板聚集抑制剂—蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2结晶研究的基础上,进行了空间结晶买验,与地面对照实验结果比较,空间的微重力环境对该酶的晶体生长有明显的改进作用.     

蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2的空间晶体生长

对血小板聚集抑制剂—蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2结晶研究的基础上,进行了空间结晶买验,与地面对照实验结果比较,空间的微重力环境对该酶的晶体生长有明显的改进作用.     

荧光法测定蛇毒中磷脂酶的活性

利用二醋酸荧光素(FDA)可被磷脂酶水解,而本过程受卵磷脂抑制这一原理.对蛇毒及其它样品中的磷脂酶活性进行测量.初步探讨了该法的实验条件及其机理.研究结果表明,这个新方法可以简便、特异地测量出样品中的磷脂酶活性.我们利用该法测定了广东眼镜蛇粗毒及分离样、浙江蝮蛇粗毒,得到了和前人工作相近的结论;而在牛血清白蛋白中可检出磷脂酶活性,植物血凝素以及伴刀豆球蛋白中则检测不出磷脂酶活性.