几种显示姐妹染色单体差别染色(SCD)的简便方法

近年来,姐妹染色单体差别染色(简称SCD)技术,特别是姐妹染色单体互换(简称SCE)分析技术,已为细胞遗传学研究提供了一种新手段,在染色体的分子结构,DNA复制过程,DNA损伤与修复,细胞周期动力学以及检测多种致癌剂和突变剂等研究领域中得到广泛应用。     

吸烟与姐妹染色单体交换

用荧光加Giemsa(FPG)术区分姐妹染色单体,分析了13名中年男子外周血淋巴细胞的SCE,比较吸烟者和不吸烟者“自发”的和用丝裂霉素(MMC)诱发的SCE频率变化。发现吸烟者的SCE频率(8.33±1.08)显著地高于不吸烟者(4.41±0.72),p<0.001。用MMC诱发后吸烟者各剂量的SCE值也明显地高于不吸烟者(P<0.01),并随着MMC剂量的增加,两者之间的差值增大。由于SCE的形成同DNA损伤后的修复机制有关,SCE频率的不同反映交换产生过程中机体重组修复系统的差异。因此,吸烟者与不吸烟者SCE频率的差异,表明两者在DNA修复机制上存在着差异。吸烟很可能改变了机体DNA损伤后的修复能力。     

2种核酸染色方法的比较

目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。     

DNA染色与免疫组织化学双重染色技术

随着计算机技术的普及和图象定量分析方法的发展 ,病理学已经开始应用计算机图象分析技术来定量研究有关病变形态结构特点 ,探讨其在诊断、分型、分类、预后判断中的应用等问题。我们采用Feulgen Rossenbeck改良DNA染色法[1] 和免疫组织化学EnVision法结合的双重染色方法 ,在石蜡切片中同时显示乳腺癌细胞DNA和癌基因CerbB 2的蛋白表达产物 ,该法对应用病理学图象分析技术研究肿瘤细胞DNA及癌基因蛋白的表达及其两者关系提供了一种简便、准确的方法。1　材料和方法1 1　材料 :取自本科室乳腺癌标本 ,标本经10 %中性福尔马林固定 ,常规…     

两种核酸染料染色效果的比较研究

用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。     

改良染色显示中国对虾病毒核酸DNA

对虾病毒病的诊断 ,只根据患病对虾群体的表现症状 ,是不能确诊的。目前最基本又广为采用的诊断技术是通过组织病理检查来找到病毒包涵体 ,或应用细胞病理技术在电子显微镜下观察到病毒颗粒。在组织切片检查中 ,对虾病毒核酸 DNA的 Schiff's反应已有报道。但对于稳定可能的快速显示对虾病毒 DNA成分的改良染色技术还未见报道。我们采用龚志锦等 (1994 )研究的改进染色液配制方法 ,首次进行中国对虾病毒核酸DNA显示实验 ,得到了较好的 DNA染色结果。1　材料与方法1.1　材料选用　取患病或室内感染的中国对虾 ,分别进行冰冻切片和 3种不…     

应用H.E染色的鼻咽癌细胞涂片进行DNA含量测定和EB病毒基因原位杂交的研究

分析鼻咽癌常规 H.E染色细胞涂片分别作 Feulgen染色检测 DNA含量和原位杂交检测 EB病毒编码 RNAs(EBERs)的效果 ;将常规 HE染色的 9例正常鼻咽细胞涂片和 38例鼻咽癌细胞涂片用 1%酸性酒精褪色 ,然后作 Feulgen染色 ,应用图象分析仪测定涂片细胞 DNA含量 ,并将 38例鼻咽癌细胞病例的阳性涂片进行 EBERs原位杂交检测 ;结果显示正常鼻咽细胞均为 DNA二倍体核型 ,38例癌阳性涂片中呈 DNA二倍体者 6例 ,DNA非二倍体者 32例 (84.2 % ) ,癌细胞核 EBERs阳性者 35例 (92 .1% ) ;结果表明 HE染色的鼻咽癌细胞学涂片经褪色后作 Feulgen染色和原位杂交检测 ,能较满意进行 DNA和 EBERs分析 ,表明常规 H.E染色和褪色处理均不影响 Feulgen染色和 EB病毒原位杂交的质量效果。本检测方法可靠、可行 ,适用于常规染色细胞学样本的回顾性研究和随访研究 ,并可用于鼻咽癌可疑病人的诊断和鉴别诊断     

龙胆紫希夫氏液显示DNA染色新方法

应用龙胆紫配制成Schiff(希夫氏)试剂,在微波辐射下进行Feulgen染色,结果使正常及良、恶性肿瘤组织细胞核内DNA着紫红色,并能应用真彩色图像仪进行DNA的定量分析.其方法操作简便,便于临床病理诊断应用.现介绍如下.标本的采集:活检手术切取的肿瘤组织100余例,经甲醛固定,石蜡包埋.切片,厚5μm.染液的配制:①8.3%盐酸水溶液(HCl8.3ml、蒸馏水 91.7ml);②龙胆紫(上海试剂站)希夫氏试剂的配制同PAS方法,以龙胆紫代替碱性品红;③亚硫酸氢盐溶液(10%偏重亚硫酸钠溶液5ml、1mol/L-HCl5ml、蒸馏水90ml).染色步骤;①切片脱蜡至水—蒸馏水;②8.3%盐酸水溶液水解切片1min(微波仪5档),蒸馏水洗;③     

对DNA与RNA区分染色实验的改进

核酸是主要的遗传物质 ,核酸的主要成分在细胞核中是 DNA,在细胞质与核仁中的是 RNA。由于 DNA与RNA在化学组成与分子结构上存在一定差别 ,因而对不同染料有不同的染色反应 ,可以根据这一原理来定性鉴定细胞中 DNA与 RNA的存在与分布。实验所采用染料为甲基绿 -焦宁 (Netyl- Green-Pyronin)染液 ,其中染液中的甲基绿能使细胞核中的DNA呈现绿色 ,而焦宁则能把细胞质与核仁中的 RNA染成红色。因此可以根据细胞中不同部位呈现颜色的不同来进行定性鉴定。1　材料与方法为了使实验方法快速简易而效果清晰准确 ,我们从染液的配方、材料…     

利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术

目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比,以PI染色法结果作为对照。结果:SW480和A549细胞经Hoechst33342染色后各期的细胞百分比与PI染色法基本一致,无明显差异(P0.05)。结论:405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA结果可靠,可作为紫外检测的替代方法。     

正常人和放射工作人员淋巴细胞在培养条件下的姊妹染色单体交换和染色体畸变

由于5-溴脱氧尿苷(简称BUdR)在DNA 复制过程中,可被作为核苷酸前体参入新合成DNA 链中胸腺嘧啶核苷所占     

姊妹染色单体互换(SCE)标本制备法

近年来发展起来的姊妹染色单体互换(sister chromatid exchange简称SCE)技术,对环境检测,以及对DNA损伤修复、离体培养细胞恶性转化试验的检测等,均有重要意义。关于SCE标本的制备方法,我们借鉴了有关资料,并经过自己的试验和改进,现提供给有关同志参考。     

姐妹染色单体交换(SCE)的检测原理及其分子机理

姐妹染色单体交换(sister-chromatid exchange,SCE)是当前生物学研究的热点之一。SCE检测技术已广泛地应用于环境科学、医学、生物学等研究领域,具有重要的意义。环境胁迫会造成细胞内DNA不同程度的损伤,并可能进一步导致染色体畸变,甚至引发癌变。SCE作为一种灵敏而有效的指标,能够反映DNA损伤程度和遗传不稳定性。本文主要介绍了有关SCE的由来,色差显示原理、分子机理、SCE与染色体畸变的关系以及SCE的诱导因子。文章最后还对今后有关SCE的研究及其应用提出一些新的看法。     

硫堇显示细胞核DNA组织化学染色技术

细胞DNA含量反映细胞生长及分化状态,测定其含量的变化对判断肿瘤的性质及预后具有重要意义。在进行各种肿瘤细胞核DNA含量图像分析时,发现细胞核DNA染色质量的好坏直接影响DNA含量测定结果的准确性。应用中发现传统的Feulgen染色技术存在染色特异性不强,背景易共染,染液配制较复杂,对反应条件要求严格,染色时间较长,切片易褪色等缺点。     

乙酰转移酶-Eco1对染色单体黏连的调节作用

黏结蛋白是一种多亚基的蛋白质复合物,在染色体正确分离和DNA双链断裂修复过程中发挥着重要作用。黏连确立蛋白1(Eco1)是一种乙酰转移酶,可催化多种黏结蛋白亚基的乙酰化。细胞分裂S期姐妹染色单体黏连确立需要Eco1催化的Smc3亚基乙酰化,而G2/M期间DNA双链断裂诱导的黏连形成则需要Scc1乙酰化,两种亚基的乙酰化修饰都拮抗了Wpl1对黏连的抑制作用。Eco1对黏连调节作用的研究为深入理解染色体生物学和基因组完整性保护提供了重要视点。     

赤麂成纤维细胞的细胞动力学和姐妹染色单体交换率的研究

近几年来,国内外开始应用姐妹染色单体分化(SCD)染色技术研究人和哺乳动物细胞的动力学(Bianchi等1976;Craig-Holmes等1976;Crossen等1977:朱炳富等1980),染色体DNA的复制,包括早复制和晚复制(Lau等1980),细胞周期的测定(等1971;田竟生等1978;等1979),和各种诱变致癌剂的测定(Bloom等1975;Allen等1976;Carrano等1978)取得了许多可喜的结果。本文采用BUdR-吖啶橙-紫外线 Giemsa(BUdR-Acridine Orange-UpG)染色显示姐妹染色单体分化染色技术(贺维顺等1980),初步观察了赤麂肺、皮肤和肾成纤维细胞动力学变化和姐妹染色单体交换率。     

BrdU抗体染色技术检测昆虫器官的细胞增殖

BrdU(5-bromo-2'-deoxyuridine)是一种人工合成的核苷酸类似物,常用于标记活体组织的增殖细胞。它的结构类似于胸腺嘧啶,在细胞分裂的S期,可以取代胸腺嘧啶而插入正在复制的细胞DNA中。通过免疫组化手段,用BrdU抗体检测整合在细胞DNA中的BrdU分子,可以反映出细胞周期的活力,即细胞增殖的速率。本文介绍一种优化的BrdU染色流程,用来标记昆虫小器官的细胞增殖速率。通过这种技术,我们重新评估了Dpp信号通路中的转录抑制因子Brinker在翅芽发育过程中调控细胞增殖的作用,发现它并不是以前所认为的在翅囊区是一种生长抑制因子。     

拟南芥不同组织细胞对DAPI染色的差异分析

4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)作为一种DNA特异性荧光染料,在荧光显微观察各种生物细胞中得到了广泛应用。然而,植物不同组织细胞响应DAPI染色目前仍缺乏比较系统的表征。本文利用模式植物拟南芥,探究了其各个组织细胞对DAPI染色的差异。首先我们构建了一个细胞核定位的稳转基因植物UBQ10∶BAG5-eYFP。接下来的试验发现在非固定的BAG5-eYFP植物活细胞中,只有表皮细胞和叶肉细胞能被DAPI染色。相比于叶绿体,线粒体中的DNA对DAPI染色较为敏感,表现出DAPI荧光和线粒体marker CoxIV-RFP很好的共定位。多聚甲醛固定之后,根部分生区、气孔保卫细胞能被DAPI染色。这些结果表明,拟南芥不同组织细胞对DAPI染色呈现出很大的差异。叶片表皮细胞和叶肉细胞对于探究植物活体细胞核的研究将会是一个很好的模型。     

一种新的核仁组成区胶银染色技术

核仁组成区(Nucleolar OrganizerRegions,NORs)是位于细胞核仁内的DNA 环,具有 rRNA 基因,与 rRNA 的转录活性有关、在蛋白质合成中起重要的作用。遗传学家曾利用银染技术显示染色体核仁组成区来研究各种遗传缺陷性疾病。1986年 Ploton 建立丁一科改良的一步法胶银染色技术显示核仁组成区相关蛋白(Nucleoar Organizer Region Associa-ted Protein,AgNORs),虽然现在对这些蛋白染色的性质还不清楚,但该技术提供了一种快速检测核仁结构和活性改变的有效手段,已受到病理学界的高度重视,     

银染色测定粘虫核多角体病毒多角体基因序列

LsMNPV DNA用EcoRV酶切进行基因组克降,用AcMNPV的部分多角体基因顺序DNA片段作探针,菌落原位杂交法结合测序筛选到分别含LsMNPV部分多角体基因的重组质粒pLsEV1和pLsPH5。用银染色PCR线性扩增双脱氧法测序,发现LsMNPv的完整基因即位于这两个片段上。LsMNPV多角体基因长741bp,编码区碱基同源性与AcMNPV和MbMNPV分别为80.0％和97.0％,氨基酸同源性分别为89.8和97.5％。氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,谷氨酰胺和色氨酸含量最低。密码子选用以第三个碱基为嘧啶的密码子频率最高。多角体蛋白N端有一类似信号肽结构的26个氨基酸的疏水区。