马铃薯class I patatin基因家族的一个新亚型

马铃薯ｃｌａｓｓⅠ与ｃｌａｓｓⅡｐａｔａｔｉｎ基因是具有不同组织表达专一性的一个多基因家族。用马铃薯ｃｌａｓｓⅡｐａｔａｔｉｎ启动子为探针,从中国马铃薯栽培品种“东农３０３”基因文库中筛选到一个ｃｌａｓｓⅠｐａｔａｔｉｎ基因。测定其ＤＮＡ顺序１．８ｋｂ;它包括ｐａｔａｔｉｎ基因５＇侧翼区１４０７ｂｐ、结构基因３６３ｂｐ。根据５＇端非翻译区顺序,它属ｃｌａｓｓⅠｐａｔａｔｉｎ基因。该基因的５＇侧翼区     

ELISA检测人降钙素基因相关肽在转基因马铃薯块茎中的专一性表达

通过间接ELISA检测了人CGRP基因在转基因马铃薯中的表达。马铃薯class I patatin基因5'侧翼区驱动下人CGRP的表达表现了明显的块茎专一性,茎段中没有检测到CGRP活性,CGRP的表达量在不同转基因株系中有差异,最高达到约50ng/mg可溶性蛋白。     

Class I patatin基因5′侧翼区驱动的GUS基因在马铃薯块茎中专一性表达

将1.4kb Class I patatin基因的5′侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体pPATIs(含patatin部分信号顺序)和pPATI(不含patatin部分信号顺序)。pPATI通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达。以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯品种Desiree。X-Gluc染色(PATIs不能染色)及PCR结果证实已获得转基因植株。利用离体块茎诱导系统,GUS的表达进一步用荧光进行定量检测,结果显示,PATI-GUS的转基因植株中GUS比活性均以块茎明显高于茎段,达10-20倍。蔗糖浓度的升高,PATI-GUS植株中的GUS比活性无明显变化,与前人报道有不同。此外,光照促进PATI-GUS的表达。     

马铃薯GBSS基因的克隆与DNA顺序分析

构建了中国马铃薯 (Solanum tuberosum)栽培品种“东农 30 3”基因文库 ,用 PCR扩增得到淀粉粒结合淀粉合成酶基因 (GBSS,granule- bound starch synthase)的部分顺序 (GB3) ,以此为探针从基因文库中筛选到 2 0个阳性克隆。测定其中 1个克隆 (GBSS1 7- 1 )的 DNA顺序共 542 8bp;它包括 GBSS基因 5′侧翼区 1 82 3 bp、结构基因 2 964 bp和 3′侧翼区 641 bp。该顺序与已报道的 GBSS顺序同源性很高 ,但 5′侧翼区最上游 730 bp尚未见文献报道 ;并存在较多的茎环结构。     

Class I patatin基因5＇侧翼区驱动的GUS基因在马铃薯块茎中专一性表达

将1.4kbClassIpatatin基因的5＇侧翼区与GUS基因融合,构建了双元表达载体pPATIs(含patatin部分信号顺序)和pPATI(不含patatin部分信号顺序).pPATI通过基因枪介导在块茎切片中获得了瞬间表达.以上建构物通过农杆菌介导转入了马铃薯品种Desiree.X-Gluc染色(PATIs不能染色)及PCR结果证实已获得转基因植株.利用离体块茎诱导系统,GUS的表达进一步用荧光进行定量检测,结果显示,PATI-GUS的转基因植株中GUS比活性均以块茎明显高于茎段,达10-20倍.蔗糖浓度的升高,PATI-GUS植株中的GUS比活性无明显变化,与前人报道有不同.此外,光照促进PATI-GUS的表达.     

鸡8个功能基因5′-侧翼区与内含子的SNP多样性比较

本研究旨在探讨鸡功能基因5′-侧翼区的单核苷酸多态性(SNP)水平。作者以白来航鸡、隐性白洛克鸡、杏花鸡、丝羽乌骨鸡、固始鸡、红色原鸡为材料,扩增了GH、DDBC1、RIKEN、RASGRP3、IGF1、THRSP、VIP及PRL共8个基因的5′-侧翼区DNA序列。扩增序列全长为8,399bp,SNP的总数为161个,平均每52bp出现一个SNP。8个功能基因5′-侧翼区核苷酸多样性的θ均值和π均值分别为0.00620±0.00110和0.00559±0.00100。比较检验表明,5′-侧翼区的SNP多样性显著低于内含子区域。5′-侧翼区是基因表达的一个重要调控区域,在分子进化和系统发生过程中承受着比内含子区域更大的选择压,其较低的SNP多样性是适应性较好的表现。Tajima检验与Fu和Li检验表明,与鸡繁殖性状显著关联的VIP基因和PRL基因很可能是人工选择或自然选择的目的基因。     

用S1核酸酶作图法测定蓖麻蚕18S rRNA基因的5′端位置

测定基因5′端位置是研究基因转录调控的一个重要前提。本文将蓖麻蚕18S rRNA基因DNA的5′端用~(32)P标记,然后与18S rRNA杂交,再用S1核酸酶水解掉非杂交区的DNA和RNA。分析放射自显影的结果,测出18S rRNA基因5′端的位置。在18S rRNA基因的BglⅡ_2位点向EcoRⅠ,方向延伸约220bp处,从这一结果,可知道蓖麻蚕rRNA基因的转录方向是5′EcoRⅠ_2→BglⅡ_23′。     

人降钙素基因相关肽转基因马铃薯的RT-PCR分析

报道经过农杆菌介导将人降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)基因由马铃薯块茎专一表达classIpatatin基因5′侧翼区和CaMV35S启动子驱动构建的马铃薯表达载体导入马铃薯,PCR鉴定获得了转基因植株。RTPCR分析证实classIpatatin基因5′侧翼区驱动的CGRPmRNA在转基因马铃薯中的表达。研究结果在开发转基因马铃薯生物反应器表达医用多肽中具有重要意义。     

口蹄疫病毒VP1基因转化马铃薯及其块茎专一性表达

报道了FMDV VP1基因与马铃薯块茎专一性表达class Ipatatin基因5′区融合,经农杆菌介导导入马铃薯植株,PCR、RT-PCR证实了其整合及转录表达。ELISA结果进一步表明,VP1在转基因马铃薯块茎中具有免疫活性。为探讨在马铃薯块茎中高表达VP1蛋白及进一步开发其作为FMDV口服疫苗生物反应器奠定基础。     

油菜叶绿体16S rRNA基因前导顺序的一级结构

质粒pBN119的3.2kb BamHI片段的PvuⅡ-BglⅡ片段全顺序长为840bp,其中含油菜叶绿体16S rRNA基因5′端的140bp。通过寻找GTTC顺序,发现在395至468位核苷酸之间是tRNA~(Val)基因;在73至118位核苷酸之间是一个蛋白阅读框。和已发表的玉米叶绿体16S rRNA前导顺序进行比较,同样存在三个相应的大肠杆菌RNA聚合酶的结合位点。和大肠杆菌的启动子及相应基因作比较,表明叶绿体基因组具有很明显的原核性,但其tRNA~(Val)基因没有CCA3′顺序。在16S rRNA基因、tRNA~(Val)基因及蛋白阅读框的5′端附近均能找到一个比较稳定的茎环结构。我们推测这些茎环结构可能和位于反问重复顺序上的某些基因的转录调节有关。     

LRP16基因启动子克隆及特征分析

克隆LRP16基因启动子分子,并对启动子特征进行分析,预测启动子区调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5′侧翼区2.7kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增,利用Genomatix程序对5′侧翼区近1000bp进行启动子特征分析,获得了与GenBank序列一致,长度为2.7kb的LRP16基因启动子DNA序列,该序列具有典型的真核生物RNA聚合酶Ⅱ启动子特征及多个核受体结合位点,如α视黄酸受体及RAR相关孤生受体。     

人PNRC基因启动子的初步鉴定

 PNRC (praline-rich nuclear receptor coactivator) 是最近发现的一种新的核受体辅活化子,它是以牛类固醇生成因子-1(SF1)作诱饵,利用酵母双杂系统从人乳腺cDNA表达文库中筛选得到的.为了研究人PNRC基因的表达调控机制,在对人PNRC基因的生物信息分析的基础上,采用5′RACE法确定了PNRC基因的转录起始位点,克隆了人PNRC基因的5′侧翼区,并对该区进行功能分析.分别构建了11种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达质粒,将它们瞬时转染HepG2细胞,检测其荧光素酶活性.结果发现,PNRC的5′侧翼区的-323～+27、-323～+57-123～+57、-123～+27区域的启动子活性显著升高,其中-323～+27区域的启动子活性最高.研究表明,人PNRC基因启动子的最小区域位于PNRC的5′侧翼区的-123～+27区域. .     

牛生长激素基因克隆和核苷酸序列

我们从牛基因文库小分离出编码牛生长激素基因。发现该基因编码区的核苷酸序列和近乎全长的牛生长激素CDNA克隆的核苷酸序列是一致的。该基因序列长约1800碱基对,含有四个插入顺序。具有227核苷酸的第二个插入顺序不含有象在大鼠生长激素基因中发现的那个重复因子。通过比较牛、人和大鼠生长激素基因的5’和3’侧翼区与非转译区发现许多具有高度保守顺序的区域。值得注意的是在所有这三种动物的生长激素基因中都具有一个38核苷酸的同源顺序,其位于离它们的转录起始座位上方大约100碱基对的5’侧翼区中。     

大鼠肝含5~1端氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因的克隆

为研究氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPS Ⅰ)基因表达的调控,我们根据CPS Ⅰ编码1—10氨基酸的mR NA顺序,合成一个30碱基的寡聚核苷酸。以它作为探针从大鼠肝基因库中筛选出一个阳性克隆,λ10。对其中4.5kb插入片断的内切酶谱及部分核苷酸序列测定证明它确含5′上游CPS Ⅰ基因DNA序列。     

马铃薯块茎组织特异性启动子的克隆及序列分析

利用PCR技术从马铃薯陇薯3号基因组DNA中扩增出长度约为1.0 kb的DNA片段,经与T载体连接,测序表明,克隆到的DNA片段大小为969 bp,该序列与GenBank中已公布的patatin启动子序列同源性为97.94％;采用植物顺式调控元件数据库PLACE和PlantCare进行序列分析,结果表明,该片段含有启动子的保守序列TATA-box和CAAT-box,且在CAAT-box上游有8 bp的增强子.此外,还具有马铃薯块茎蛋白patatin基因启动子保守调控序列的蔗糖效应元件(SURE)4个及马铃薯储藏物特异结合调控patatin蛋白表达位点(B-box)2个,而这些特异序列可能是基因特异表达所必须的.     

蓖麻蚕5.8S rRNA基因的结构特点

利用计算机分析已知的蓖麻蚕(Attacus ricini)5.8S rRNA顺序,发现其上有一个PstⅠ位点。因此,将rDNA上PstⅠ位点两侧的DNA片段分别克隆在pWR 13质粒上。用末端终止法测定了蓖麻蚕5.8S rRNA基因全顺序及与之相邻的上、下游部分核苷酸顺序。发现5.8SrRNA基因3′端为pGGGCCGGCT_(OH)。这个结果与Feng,Y.X.等报道的蓖麻蚕5.8S rRNA顺序3′端是pGGGCCGAUUAA_(OH)有两个明显不同:第一,从共同顺序pGGGCCG算起,5.8S rRNA基因的3′端有九个核苷酸,比Feng Y.X.等报道的rRNA顺序3′端少两个核苷酸;第二,两者在3′末端共同顺序以后的两个核苷酸是不一样的。此外,还发现在蓖麻蚕5.8S rRNA基因上游有一个约30个核苷酸的poly(A)区。     

水稻种子醇溶蛋白4a基因的表达受串联复合启动子调控

从水稻中花8号中克隆了醇溶蛋白4a的基因5＇侧翼区并首次报道该基因5＇端-680～-18区段具有胚乳特异性表达调控功能.本研究通过 5’缺失方法对该基因5＇侧翼区的结构和功能进行了进一步分析,结果表明:(1)醇溶蛋白4a基因启动子Ⅰ能够特定地在转基因烟草开花发育 22 d后的种子胚乳中激活下游 GUS融合基因表达,是该基因有功能的启动子;(2)prolamin box Ⅱ对该基因的表达具有增强功能;(3)启动子Ⅰ的转录起始点是位于该基因起始ATG上游63 bp处的C碱基.     

奶牛乳铁蛋白基因5′侧翼区PCR-SSCP多态性分析

采用PCR-SSCP技术,对奶牛乳铁蛋白基因5′侧翼区1122bp序列进行多态性分析.在该区所划分的5个亚片段上,发现Blf 5′-1(227bp),Blf 5′-3(175bp)和Blf 5′-5(293bp)3个DNA片段存在多态.进一步对这3个片段进行测序分析,在Blf 5′-1序列中,发现位于转录起始位点上游-926和-915位分别有G→A及T→G点突变;在Blf 5′-3片段中,-478位存在G的插入;Blf 5′-5位点上,发生-28位的C颠换为A和 33位的G颠换为C两处突变.利用TFSEARCH (ver.1.3)软件对乳铁蛋白基因5′侧翼区潜在调控元件及蛋白质结合位点进行了预测,结果显示5′侧翼区的突变引起了蛋白质结合因子的变化.     

武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染的调查研究

１０４名武汉地区儿童乙肝病毒基因亚型感染调查结果显示：男性亚型Ⅰ感染率高于女性,而女性亚型Ⅱ感染明显高于男性。血清学标志物,俗称两对半,为大三阳时,病毒亚型Ⅰ感染远高于亚型Ⅱ（ｐ＜０．０１）。而小三阳中亚型Ⅱ感染率远高于亚型Ⅰ（ｐ＜０．０５）。说明乙肝病毒亚型易感性可能存在性别差异,不同ＨＢＶ亚型感染与特定血清学模式形成有关。不同乙肝基因亚型的Ｓ基因,Ｃ基因、Ｐ基因、Ｘ基因等碱基序列差异和其相互作用,可能是形成血清两对半模式多样性的物质基础。     

藏鸡诱导型一氧化氮合酶基因低氧适应功能分析

低氧刺激诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric-oxide synthase, iNOS)催化产生NO, 增加血流, 改善组织供氧。文章采用测序和PCR-RFLP技术检测藏鸡及低地鸡iNOS基因编码区、5′侧翼区(2.0 kb片段)序列和3′侧翼序列SNP, 并测定低氧和常氧孵化时鸡胚尿囊绒毛膜组织iNOS基因表达量和酶活力。结果在iNOS基因 5′侧翼区发现一个与低氧适应相关的藏鸡高频率突变SNP位点(-870C→T), 藏鸡该突变的等位基因T频率高于低地鸡种。藏鸡iNOS基因表达量和酶活力在低氧孵化环境中多高于矮小鸡。结果表明藏鸡群体iNOS基因的突变及其低氧表达量的增加是其适应低氧环境的重要基础。