巴斯德研究所证实第二种艾滋病毒并在乙型肝炎疫苗研制方面取得进展

巴斯德研究所(法国巴黎)的Luc Montagnier和他的同事证实,存在着第二种艾滋病毒。据他们报道,该病毒是在西部非洲的人体内发现的,能引起免疫缺陷综合症。现在,他们已在30例患者身上(其中17例出现十足的艾滋病症状,而4例出现与艾滋病相关的综合症)鉴定了对该病毒的抗体。从11例患者的淋巴细胞中得到了逆转录病毒的分离株,并且用DNA 探针进行了分析。所有的新病毒(HIV-2)都已被鉴定,而没有一株是原始的艾滋病毒(HIV-1)。这些结果实质上表明:HIV-2具有感染性并引起艾滋病;但尚未弄清 HIV-2的流行程度是怎样的,也不知道它是否有与 HIV-1一样的致病性。但几乎可以肯定,艾滋病     

几种药物抑制马传染性贫血病毒和人免疫缺陷病毒的实验研究

用马传染性贫血病毒—驴胚肺二倍体细胞(EIAV-DELDC)为实验体系,以细胞中病毒逆转录酶活性及病毒相关抗原的表达为观察指标,检测了叠氮胸苷(AZT)、三氮唑核苷(Ribavirin,病毒唑)、磷羧基甲酸钠(PFA)和苏拉明等4种已知抗人免疫缺陷病毒(HIV-1)药物对马传染性贫血病毒的抑制作用。结果表明,PFA、AZTTP(三磷酸AZT)和苏拉明均能抑制病毒相关抗原的表达,AZT虽无此作用,但能抑制细胞内逆转录酶活性。用~3H-TMP掺入法比较了PFA、AZTTP、苏拉明对体外无细胞系EIAV逆转录酶粗提物和HIV-1基因工程产物逆转录酶活性的抑制作用表明,两种逆转录酶对苏拉明的敏感性相近,而HIV-1逆转录酶对PFA和AZTTP的敏感性较EIAV者高约100倍。又以无细胞系中逆转录酶活性测定法,检测了12种中药提取物的抑制作用,其中小柴胡汤对EIAV和HIV-1逆转录酶活性都有抑制作用,IC_(50)为717μg/ml和700μg/ml(生药浓度)。小柴胡汤对两种病毒感染细胞中抗原的表达和HIV引起细胞病变都有抑制作用,对HIV-1的抑制比EIAV强。这些结果表明,EIAV-DELDC体系可考虑作为抗HIV-1药物筛选模型。     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1，HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸。通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C)。这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点。用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异。该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟。与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点。同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值。     

应用斑点金免疫渗滤试验快速同步检测抗HIV-1,HIV-2 IgG抗体

应用斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltration assay,DIGFA)建立了一种同步快速检测四种抗HIV-1/2IgG抗体的HIV诊断试纸.通过基因工程技术在大肠杆菌中表达了5种HIV抗原蛋白片段(P24,GP41,GP36,GP120V3,GP120C).这5种抗原蛋白首先被固定在硝酸纤维素膜上,然后滴加待测血清,其中的病毒抗体通过免疫反应与抗原结合,再加胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(SPA),待其渗过膜片后,洗涤,即可形成肉眼可见的红色斑点.用已确证的21份HIV阳性血清(其中包括1份HIV-1标准阳性血清和1份HIV-2标准阳性血清)和30份阴性血清进行了试验,结果表明该快速检测方法与ELISA方法无显著差异.该检测方法不需任何仪器,仅凭肉眼即可判定结果,整个检测过程不超过5分钟.与传统的的ELISA法相比,具有方便快速,成本低廉,应用范围广等优点.同时,此HIV快速诊断试纸可以同步检测并区分针对HIV-1和HIV-2感染的不同检测标志物(抗P24、GP41、GP120和GP36抗体),这对提高快速检测的灵敏度和准确性,以及对判断HIV感染者是否临近或已进入AIDS期有着较高的应用价值.     

树免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的动物只有黑猩猩和长臂猿,这严重阻碍了HIV-1的疫苗研究和治疗研究。因此,寻找新的可以感染HIV-1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树鼩对许多重要的医学病毒易感,为了探讨树鼩是否可以感染HIV-1,利用不同辅助受体的5种HIV-1病毒株,体外感染云南野生成年树鼩的淋巴细胞和单核/巨噬细胞;同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT-PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT-PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在,用PCR法未能发现树鼩的这些免疫细胞中有前病毒DNA,用流式细胞术也未能在这些感染HIV-1的树鼩细胞的表面检测到特异抗原;而感染HIV-1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树鼩的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV-1,可能的原因是树鼩的这些免疫细胞的HIV-1受体(CD4)和辅助受体(CCR5或CXCR4)与人的免疫细胞差别较大。     

树qu免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的动物只有黑猩猩和长臂猿，这严重阻碍了HIV-1的疫苗研究和治疗研究。因此，寻找新的可以感染HIV-1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树qu对许多重要的医学病毒易感，为了探讨树qu是否可以感染HIV-1，利用不同辅助受体的5种HIV-1病毒株，体外感染云南野生成年树qu的淋巴细胞和单核/巨噬细胞；同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT-PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT-PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在，用PCR法未能发现树qu的这些免疫细胞中有前病毒DNA，用流式细胞术也未能在这些感染HIV-1的树qu细胞的表面检测到特异抗原；而感染HIV-1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树qu的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV-1，可能的原因是树qu的这些免疫细胞的HIV-1受体(CD4)和辅助受体(CCR5或CXCR4)与人的免疫细胞差别较大。     

HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较

目的由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性。方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析。结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL。两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致。定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P〈0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P〈0.05,直线正相关程度较低。结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIVp27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原。     

美洲商陆抗病毒蛋白抑制HIV-1在CD4~+T细胞中的复制

人们早已知道从美洲商陆中分离到的抗病毒蛋白(PAP)能抑制某些植物RNA病毒、单纯疱疹病毒、灰质病毒和流感病毒的复制.现在才发现它还抑制艾滋病病毒.在Ocogen公司(Seattle, WA)和其它地方的科学家发现,纯化的、均一的PAP可抑制HIV-1在人原发CD4~+细胞中繁衍.     

应用ELISPOT方法筛选确定HIV-1B'/C亚型疫苗六种抗原的H-2d限制的T细胞表位

为了筛选和确定用于检测表达HIV-1 B’/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、polr、evt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位,本研究使用表达上述6种抗原的复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗联合免疫BALB/c小鼠,通过矩阵设计将HIV-1 B(C)亚型6种相应抗原全序列肽库分别混合成肽池,使用肽池对免疫小鼠进行IFN-γELISPOT检测,根据检测结果确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果显示:筛选到七条针对Gag的特异表位肽,其中有5条与文献报道相同,另2条为新表位肽;筛选到3条针对Pol蛋白特异表位肽,其中一条为新表位肽;筛选到2条针对gp160特异表位肽,其中一条为新表位肽;在Nef肽库中筛选到一条新的表位肽;从Tat肽库中筛选到3条表位肽,这三条肽在肽库中是连续的序列,都包含(或部分包含)网上公布的表位序列;在Rev肽库中没有筛选到能够产生阳性反应的特异性表位肽。本研究使用IFN-γELISPOT方法筛选和确定了可用于检测表达HIV-1 B’/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、pol、revt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位。     

美国微生物学会会讯摘要(2005年第4期)

1．关于艾滋病(AIDS)流行的起源,目前仍是未解的秘密。一种观点认为其起源为黑猩猩的一种反转录病毒(SIVcpz),因跨种而致感染(Nature,1999,397：436),然而仅在一只黑猩猩中发现该病毒,与人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)相似,从其他黑猩猩中并未发现同样的病毒。由于1960年Houghton Miffin公司在购买黑猩猩时常用混合的人全血给予腹腔注射以“防止得到人中的疾病”,因此该黑猩猩体内发现的反转录病毒可能来自人血,故Goldberg等认为目前尚不能认为SIVcpz是人HIV的起源。     

Applied公司与巴特雷研制家禽疫苗

Applied bioTechnology(坎布里奇,马里兰)与Battele Memorial Institute(哥伦布,俄亥俄)开始以家禽疱疹病毒为材料合作研制重组DNA(rDNA)疫苗。该项目与Battele公司其它工作一样是几个客户委托的研究项目。其它公司也为之提供资金,并从结果中获利。在此项目中,家禽病毒(与痘苗病毒相似)将通过基因工程改造,使之带有来自其它家禽病原的基因,并起到抵抗不同疾病的活病毒疫苗作用。除家禽疱疹病毒系统外,还将研制rDNA产生的抗原,并进行疫苗估测。利用痘苗病毒有可能研制出同时带有几种抗原基因或混和带有不同抗原基因的各种家禽病毒。来自Applied公司的消息声称,一旦研究出有效疫苗,此项技术将转让给更大的公司,因为在美国没有多少买主能向Applied公司直接购买家禽疫苗。Battele公司将克隆并鉴     

携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗的构建及鉴定

利用细菌人工染色体技术将串联的HIV-1 gp160、gag和protease基因以及表达元件插入1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)内部反向重复序列区,以获得携带HIV-1抗原的单纯疱疹病毒载体疫苗。首先将HIV-1 gp160(B型和C型)、gag和protease基因串联克隆入pc DNA3获得重组质粒pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp,重组质粒转染293FT细胞,Western blotting检测HIV抗原表达。继而将pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp中包括HIV-1抗原基因和表达元件的表达框克隆入p KO5/BN获得重组穿梭质粒p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp,穿梭质粒电转含BAC-HSV的大肠杆菌,筛选重组菌,提取重组DNA并转染Vero细胞,挑取病毒蚀斑纯化重组病毒,Southern blotting鉴定重组病毒DNA,Western blotting检测重组病毒感染细胞中HIV抗原表达,并分析病毒的增殖特性。结果表明,Western blotting在pc DNA/g Bgp和pc DNA/g Cgp转染的293FT细胞中检测到表达的gp160和gag蛋白。p KO5/BN/g Bgp和p KO5/BN/g Cgp分别电转获得重组菌,并从重组DNA转染的Vero细胞中纯化获得重组HSV,Southern blotting检测表明重组HSV基因组发生特异性重组,重组病毒感染细胞中检测到gp120和gp41,且重组HSV保留了在哺乳动物细胞中的复制能力。本研究获得携载HIV-1 gp160、gag和protease基因的重组HSV,并保留了在哺乳动物细胞中的复制能力,可作为HIV-1复制型病毒载体疫苗。     

科技信息与服务

日发现杀死艾滋病毒新物质日本明治乳业公司研究人员最近发现一种能杀死艾滋病毒的新物质。该物质是从人体血液中的血红素和血清白蛋白中提取的,能直接作用于受艾滋病毒感染的细胞,对人体的副作用很小。在试验中,将重为100g的这种物质     

Oncogen公司为艾滋病疫苗提出调查过的新药(IND)申请

Bristol-Myers(纽约)的一个子公司—Oncogen 公司(华盛顿州西雅图)已经宣布了它的计划:准备在1987年4月1日为它的重组 DNA(rDNA)艾滋病疫苗提出调查过的新药(IND)申请。该疫苗(在牛痘病毒上表达得到的艾滋病毒 GP-110和 GP-41表面蛋白)能激活灵长类的中和抗体和细胞免疫作用。细胞免疫也许特别重要,因为被感染的细胞能在体内融合未被感染的细胞,从而使艾滋病毒在没有暴露给其抗体的情况下在血液中转移。细胞免疫也许还能帮助机体对付艾滋病毒中的各种不同的株系。     

B'亚型人类免疫缺陷病毒的基因序列分析

目的研究沈阳市人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)B'亚型毒株抗原表位的变异特征.方法从确诊的HIV-1感染者的全血样本中提取基因组DNA,经套式聚合酶链反应(PCR)扩增、产物纯化和测序分析后,将所得病毒核苷酸序列翻译成蛋白质的氨基酸序列,比较和分析我国人群中较常见的HLA型别限制的CTL表位的突变情况.结果在HIV-1 gag蛋白P24编码区,有4个抗原表位相当保守,且P17部分的抗原表位的变异率高于P24部分.结论 HIV-1 B'亚型毒株P24部分的4个抗原表位适合于抗原表位疫苗的研制.     

Innogenetics公司的诊断目标—艾滋病、心脏病和阿尔茨海默氏病

Innogeneties公司(比利时根持)刚引进了一项检测艾滋病的新检测技术,以便同Western印迹检测法竞争,签订了一份诊断心血管疾病的市场协议;还与山内药品有限公司(日本东京)签订了两项R-D合作协议,内容涉及阿尔茨海默氏病和动脉粥样硬化的诊断和市场。以rDNA抗原为基础的艾滋病试验可以同时区分HIV-1和HIV-2。该试验主要用作确诊试验、紧急试验或用于小实验室中。该试验利用了艾滋病病毒的外壳和核心,可用肉眼读数,比Western印迹试验更好解释。这个名叫INNO-LIAHIV的试验将被提交到今年6月在加拿大蒙特利尔举行的国际艾滋病会议上首次发表。     

人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定

本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。     

生物工程简讯十则

奥林帕司光学仪器公司和美国United Biomedical(UB)公司联合开发了一种检测爱滋病毒抗体的新试剂盒,预计今秋开始出售。爱滋病病毒外膜蛋白上有100多个抗原决定簇,以往用的EIA试剂盒用钝化的病毒作抗原,且易混入培养时所用的细胞中的杂蛋白,因而检测时易出现假阳性。UB公司的负责人之一王昌义(音译)发现病毒外     

用植物病毒制作疫苗

美国Agricultural Genetics 公司与英国John Innes Institute、美国Purdue 大学共同在豇豆花叶病毒(CPMV)中导入了艾滋病毒和口蹄疫病毒等哺乳类病毒基因的一部分。在温室培育豇豆14天就能获得CPMV。确认CPMV 不感染动物,具有安全性。编入了其它种病毒的基因的CPMV 能诱导对其病毒     

Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。