肺炎克雷伯菌五种外膜蛋白研究进展

细菌的外膜蛋白是一种常见的毒力因子,同时也是控制抗菌药物进入细菌体内的重要通道.近年来,随着肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)毒性和耐药性的增强,受感染人群和感染率逐年增长.为了减少感染,多采取诸如制备相关抗耐药菌药物、蛋白疫苗等预防治疗措施.该文主要针对肺炎克雷伯菌五种重要的外膜蛋白Om...     

禽病原性大肠杆菌外膜蛋白的研究进展

大肠埃希氏富是家禽最常见的病原菌之一,可引起家禽胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、卵黄性腹膜炎和全眼球炎等一系列疾病,给养禽业带来重大损失。禽病原性大O杆菌大部分属O1：K1、O2：K1和078：Kwlj以往国内外对禽源性大肠杆菌主要根据O抗原分型［1～3］。最近的研究结果显     

大肠杆菌外膜蛋白的分离及其双向电泳图谱的建立

本文利用温度诱导的两相分离萃取技术选择性分离未经机械破碎的大肠杆菌细胞外膜蛋白,研究TritonX.114的浓度及处理时间对提取外膜蛋白的影响.实验结果表明,Triton X-114的使用浓度和作用时间均显著影响外膜蛋白的提取效率.SDS-PAGE结果表明不同Triton X-114的使用浓度和作用时间只是影响了外膜蛋白的提取效率而对外膜蛋白提取的种类没有影响.实验发现8%的Triton X-114处理3小时为最佳分离条件,分离得到的样品可用于双向电泳分析.通过对比实验发现样品裂解液中包含低浓度的Tris是外膜蛋白双向电泳成功的关键因素,CHAPS与ASB-14或NP-40结合使用可显著提高外膜蛋白的溶解能力,缩短聚焦时间,从而优化了大肠杆茵外膜蛋白双向电泳技术体系,建立了其双向电泳图谱.     

我国部分地区禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

测定了从我国１８个省、市、自治区分离到的２０４个禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株的外膜蛋白型（ＯｕｔｅｒＭｅｍｂｒａｎｅＰｒｏｔｅｉｎＰａｔｅｒｎｓ,ＯＭＰ型）。这些分离株共产生了４个ＯＭＰ型,５６个Ｏ１８分离株可分为３个ＯＭＰ型,５４个Ｏ７８分离株、２８个Ｏ２分离株、２６个Ｏ８８分离株、２２个Ｏ１１分离株和１８个Ｏ２６分离株,分别出现了４、２、１、３和１个ＯＭＰ型。其中,ＯＭＰ１型为６个血清型所共有,ＯＭＰ３型则同时存在于Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２和Ｏ１１分离株中。结果表明,优势血清型中,Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２和Ｏ１１分离株具有多样性的ＯＭＰ型,而Ｏ８８、Ｏ２６分离株的ＯＭＰ型则高度一致,所测６个优势血清型的分离株间存在共同的ＯＭＰ型     

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导小鼠免疫应答的观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinantMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)免疫小鼠 ,观察小鼠免疫后对r MOMP和Cps菌体蛋白的免疫应答。r MOMP皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,对照组仅注射佐剂。免疫前和第 3次免疫后 10d收集血清 ,以常规ELISA法检测抗体效价 ;MTT方法检测脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的特异性增殖反应。免疫组小鼠在免疫 38d后免疫血清中抗r MOMP的抗体效价可达 1∶2× 10 4,抗Cps菌体蛋白的抗体效价为 1∶4× 10 3 ;脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的增殖指数明显高于佐剂对照组 (p <0 .0 1,具有显著性意义。r MOMP在小鼠体内可诱导Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 ,说明具有较好的免疫原性     

衣原体主要外膜蛋白的研究现状

衣原体主要外膜蛋白作为外膜复合物中的主要成分,与衣原体致病密切相关。该蛋白是一种跨膜蛋白,为衣原体引起机体免疫应答的重要免疫原,并为衣原体菌株进化及分类提供相关依据。因此,探讨衣原体主要外膜蛋白的结构与功能将有助于对衣原体致病机制及其诊断和预防等方面的研究。     

重组伴侣蛋白60外膜蛋白免疫诱导抗脑膜炎奈瑟菌的杀菌抗体应答

<正>得自脑膜炎球菌定植个体的血清以及得自脑膜炎球菌性疾病患者的血清都含有针对奈瑟球菌热休克蛋白/伴侣蛋白60(Chp60)蛋白的特异性抗体。在这项研究中,作者用含在生理盐水中的重组Chp60、与氢氧化铝吸附的Chp60、含在脂质体中的Chp60以及含在去污剂微粒中的Chp60免疫小鼠,加或者不加单磷酰类脂A佐剂。结果表明能够诱导高度而且水平类似的(P0.05)的抗体,这种抗体能够识别外膜上的Chp60。FACS分析和免疫荧光试验测定表明Chp60是在脑膜炎球菌表面表达     

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白诱发BALB／C小鼠免疫保护的研究

本文采用超声破碎ＴｒｉｔｏｎＸ—１００和超速离心技术提取了鼠伤寒杆菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ,ＳＴＭ）的外膜蛋白（Ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＯＭＰｓ）,并发现ＯＭＰｓ中脂多糖ＬＰＳ的含量约为５％,ＯＭＰｓ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ显示１０余条蛋白带。对ＯＭＰｓ诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生典型迟发型变态反应ＤＴＨ和ＩＬ—２的水平进行了检测。经腹腔免疫的小鼠用５００ＬＤ５０鼠伤寒杆菌（５０１１５）攻击,１００％可得到保护;用５００ＬＤ５０伤寒杆菌（Ｅ６８６）攻击,３３．３％可得到交叉保护。免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的Ｔ淋巴细胞,经尾静脉注射给非免疫小鼠,可使后者得到８５．７％的被动免疫保护,上述结果说明ＯＭＰｓ能诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠细胞免疫和保护性免疫,并提示成为分子疫苗的可能性。     

酚氧化酶参与德国小蠊对大肠杆菌的免疫应答

【目的】探讨酚氧化酶(phenoloxidase, PO)在德国小蠊Blattella germanica对大肠杆菌Escherichia coli的免疫响应中的作用。【方法】利用同源克隆和RACE方法获得德国小蠊酚氧化酶基因（BgPO）的全长cDNA序列,用MEGA5.1软件构建BgPO与其他昆虫PO的系统进化树,用RT-PCR方法检测BgPO的组织表达模式及大肠杆菌诱导后不同时间的表达量变化,用Hultmark 方法测定抑菌活力,用邻苯二酚法测定酚氧化酶活性。【结果】获得的德国小蠊BgPO基因（GenBank登录号：KJ789157）cDNA全长为2 252 bp,其中开放阅读框大小为2 085 bp,编码695个氨基酸,预测的分子量和等电点分别为79.7 kDa和6.19。Blast分析结果表明德国小蠊BgPO与其他昆虫PO有较高的同源性,其中与白蚁Coptotermes formosanus PO的氨基酸序列一致性高达80%;系统进化树分析显示其与C. formosanus PO的亲缘关系最近。基因表达检测结果表明BgPO主要在血淋巴细胞和表皮中表达。大肠杆菌诱导德国小蠊后,发现BgPO的表达量在诱导24 h后升高,在诱导后36 h达到峰值;其血淋巴的抑菌活力及酚氧化酶的活性在诱导后6-36 h内均随着诱导时间的增加而增加,且菌诱导组与PBS诱导组之间存在显著差异(P<0.05)。【结论】本研究获得的德国小蠊酚氧化酶基因BgPO主要在血淋巴和表皮中表达,并参与了大肠杆菌诱导的免疫应答反应。研究结果为进一步探索酚氧化酶在德国小蠊对病原菌的免疫响应机制奠定基础。     

禽源性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78)分离株外膜蛋白型的研究

对江苏省25个禽源性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78)分离株的外膜蛋白型进行了测定。用改良的N-十二烷酰肌氨酸法提取其外膜蛋白,经SDS-PAGE电泳后,用考马斯亮蓝法进行染色。结果,8个O_1分离株,9个O_2分离株分属2个OMP型,其中的1个为二者所共有;而8个O_(78)分离株的OMP型也与该型相同。表明从江苏省分离到的禽源性大肠杆菌具有多样性的OMP型,而且这3个血清型的分离株中存在着共同的OMP型。     

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析

创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌, 属于弧菌属第5群, 主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内1。根据寄主范围和生化反应类型的不同, 将创伤弧菌分为3 个生物型: 生物Ⅰ型(产吲哚)2、生物Ⅱ型(不产吲哚)3以及1999 年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物Ⅲ型。       

致病性鸡大肠杆菌pilA基因和外膜蛋白C基因的克隆、表达及其免疫原性

根据GenBank公布的致病性鸡大肠杆菌的Ⅰ型菌毛pilA基因和外膜蛋白C基因序列,分别设计了两对引物,并以分离的致病性鸡大肠杆菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出pilA基因和ompC基因,基因产物大小为别为549 bp和1104 bp,与GenBank报道的参考菌株的两个基因序列的同源性为高达98.18%和97.28%.将扩增得到的两个基因分别定向克隆到原核表达载体pET-28a中,得到两个重组质粒pETpilA和pETompC.转化大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21(pETpilA)和BL21(pETompC),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析分别可见表达的20 kD和40.9 kD的特异条带;Western blotting结果表明,两种蛋白可与抗体发生特异性结合,说明其具有良好的免疫原性.将表达的菌毛蛋白和外膜蛋白的菌株分别制成基因工程疫苗,免疫小鼠后,具有很好的保护能力.表明这两株基因工程菌株有望作为鸡致病性大肠杆菌基因工程疫苗的候选生产菌株.     

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白诱导BALB／C小鼠免疫保护的实验研究

本实验采用超声破碎、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理和超速离心技术提取了鼠伤寒沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｈｉｍｕｒｉｕｍ,ＳＴＭ）的外膜蛋白（Ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＯＭＰｓ）,其中脂多糖（ＬＰＳ）的含量约为５％。ＯＭＰｓ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ显示１０余条蛋白带。对ＯＭＰｓ诱发ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠产生典型的迟发型变态反应（ＤＴＨ）进行了检测。经腹腔免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠用５００ＬＤ５０鼠伤寒沙门氏菌（５０１１５）攻击,１００％可得到保护;用５００ＬＤ５０伤寒杆菌（Ｅ６８６）攻击     

肺炎克雷伯菌Hfq蛋白特性及对耐药的影响

Hfq(host factor for RNA phage QB replicase)蛋白是一个全局性调节因子,广泛参与细菌生长、趋化、毒力、耐药及应对外界选择压力等方面的调节,但在肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)中的功能尚不清楚。本研究从临床病例中分离到59株KP,将其hfq基因与11例常见临床感染菌株hfq基因〔从美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)数据库下载〕进行了比较。所有hfq基因经EMBOSS Transeq翻译成氨基酸序列,用MAFFT软件进行多序列比对,并通过NCBI数据库中的保守结构域预测Hfq蛋白结构域。分别采用ESPript3.0、Phyre2分析Hfq蛋白的二、三级结构。59株KP中仅3株hfq基因的5个密码子位点存在差异,而其蛋白质氨基酸序列完全一致。KP与大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、痢疾志贺菌之间,Hfq蛋白的氨基酸序列相似度较高,主要区别在C末端上;与金黄色葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌相比,KP Hfq蛋白在N末端和C末端上差别较大;所有菌株C末端均呈酸性。三级结构预测提示68(66.67%)个氨基酸与模板序列一致, 较为保守的功能结构为54-VYKHAI-59序列。采用CRISPR/Cas9同源重组技术敲除KP的hfq基因,并对其进行药物敏感性测试,结果显示,基因敲除菌株对抗生素的耐药性较野生株有显著下降(P<0.05),差异有统计学意义,提示KP的Hfq蛋白氨基酸序列非常保守,可能参与了KP的耐药调节。     

趋化因子基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导的免疫应答的影响

研究趋化因子基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫应答的影响,以探求防治HIV的新策略。将 pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1α基因或者pVAX1GP120单独免疫Balb／c小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠 的特异性抗体和IFN-γ水平,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖,用乳酸脱氢酶(LDH)试验检测小 鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答。与pVAX1GP120免疫组比较,pVAX1GP120联合RANTES、MIP- 1α基因免疫组小鼠血清的抗HIV-1gp120抗体滴度升高,有显著性差异(p<0．01);与pVAX1GP120免疫组比较, pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1α基因免疫组小鼠血清的IFN-γ升高,有显著性差异(p<0．01); pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1α基因免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)以及特异性CTL活性 均高于pVAX1GP120免疫组,有显著性差异(p<0．01)。RANTES、MIP-1α基因联合HIV-1外膜蛋白基因疫苗免 疫小鼠,可能增强HIV特异性Th1细胞和CTL反应,RANTES、MIP-1α基因对体液免疫有加强作用。因此, RANTES、MIP-1α基因对于HIV-1外膜蛋白基因疫苗具有较好应用前景的免疫佐剂。     

趋化因子基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导的免疫应答的影响

研究趋化因子基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫应答的影响,以探求防治HIV的新策略.将pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1α基因或者pVAX1GP120单独免疫Balb/c小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ水平,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖,用乳酸脱氢酶(LDH)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答.与pVAX1GP120免疫组比较,pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1d基因免疫组小鼠血清的抗HIV-1gp120抗体滴度升高,有显著性差异(p＜0.01);与pVAX1GP120免疫组比较,pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1d基因免疫组小鼠血清的IFN-γ升高,有显著性差异(p＜0.01);pVAX1GP120联合RANTES、MIP-1α基因免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)以及特异性CTL活性均高于pVAX1GP120免疫组,有显著性差异(p＜0.01).RANTES、MIP-1α基因联合HIV-1外膜蛋白基因疫苗免疫小鼠,可能增强HIV特异性Th1细胞和CTL反应,RANTES、MIP-1α基因对体液免疫有加强作用.因此,RANTES、MIP- 1α基因对于HIV-1外膜蛋白基因疫苗具有较好应用前景的免疫佐剂.     

贺氏福氏5型菌外膜蛋白ipa BC基因的高效表达及其免疫保护作用的研究

本文从一次克隆重组质粒pMG488中酶切回收了3．3kb的ipa Bc结构基因,将它在不同的位点插入带有PRPL启动子的载体pBV220中,构建了两种高表达重组质粒pMG501及pMG601。在大肠杆菌DH55a和无毒性福氏5M90TA菌中均获得了b、c多肽的高水平表达,初步的小鼠免疫攻毒试验显示b,c多肽可能有一定的免疫保护作用。     

人呼吸道合胞病毒F蛋白在大肠杆菌中的表达与免疫效果研究

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,hRSV)是婴幼儿和老年人发生严重呼吸道疾病的主要病因,自上世纪50年代hRSV被发现以来,科学家对hRSV疫苗进行了大量的实验探索,但至今没有上市的疫苗。本研究应用pET32a质粒在大肠杆菌BL21中表达并纯化了hRSV F蛋白(RBF),透射电镜下RBF以三聚体的形式存在(长约20 nm的棒状结构),与5C4抗体(识别抗原表位?)亲和常数为1.26×10^-9。混合铝佐剂肌肉注射免疫BALB/c小鼠,不同剂量(2.5μg、5μg和10μg)的RBF蛋白免疫效果无显著差异(P>0.05),均能诱导小鼠产生高滴度的中和抗体(滴度可达2⁷),并且可以显著降低肺脏病毒滴度,减少肺脏的病理损伤(P<0.001)。与福尔马林灭活疫苗(FI-RSV)相比,RBF诱导产生偏向Th1类的细胞和体液免疫应答。RBF在动物实验中显示出良好的保护效果,同时原核表达系统具有产量和成本上的优势,因此可以作为预防人感染hRSV的潜在候选疫苗。