双链RNA结合蛋白与双链RNA结合域

双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)能引发细胞的抗病毒机制,其产生效应是因为作用于含有dsRNA结合域(dsRNA·binding domain,DRBD)的酶类和其他功能蛋白质,这些蛋白质能够特异性地识别并结合dsRNA,从而引起细胞应答.已有的资料表明DRBD不仅与dsRNA结合,还能与DNA或其他形式的RNA分子结合,而且有些蛋白质的DRBD不与任何核酸分子结合,仅起调节作用.另外,同种蛋白质的不同DRBD之间以及不同蛋白质的DRBD之间也能相互作用,从而形成复杂的蛋白质一蛋白质复合体,参与多种细胞代谢途径.因此,DRBD及其含有这些结构域的蛋白质可能具有多种功能.     

生产双链RNA工程菌的研究进展

保障粮食安全需要新型绿色农药。双链RNA (double-stranded RNA,dsRNA)农药通过外源添加特异性靶向病虫害的dsRNA来触发RNA干扰,抑制病原菌或害虫的关键基因表达,从而实现对特定病虫害的有效控制。双链RNA农药是一种环境友好型的农药,具有较强的特异性和高效的基因沉默能力,但目前还存在生产成本高等问题。利用工程菌株生产dsRNA是一种可行的策略,然而目前还没有具有经济效益的dsRNA生产工程菌株出现。本文综述了利用微生物生产dsRNA的研究进展和生产策略,为dsRNA生产提供了参考。     

错配的双链RNA及其稳定性研究

研究了核糖胞嘧啶和脲嘧啶共聚物的酶促合成条件,共聚物Ｐｏｌｙ ＣｘＵ与Ｐｏｌｙ Ｉ在类似生理盐水条件下形成错配的双链ＲＮＡ,然后对ＰｏｌｙＩ：Ｃ和错配的双链ＲＮＡ对核酸酶的敏感性及紫外熔化曲线进行了比较研究,并提出错配碱基配对存在的假设。     

双链RNA病毒的复制机制

本文对双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）病毒复制机制的研究进展进行了综述。根据ｄｓＲＮＡ病毒复制周期,分以下几方面对其复制的有关分子进行分析：转录、转录本释放和“满头”复制模型、（＋）ＲＮＡ转译、病毒包装、（－）ＲＮＡ合成等。此外,还简要分析了宿主基因及其产物在病毒复制中的作用。     

昆虫RNA干扰中双链RNA的转运方式

昆虫RNA干扰主要指外源双链RNA诱发的,通过阻碍特定基因的翻译或转录,引起内源目标信使RNA沉默的机制。由于RNA干扰的特异性,RNA干扰技术主要应用于昆虫功能基因组和害虫防治的研究。本综述主要对双链RNA引起昆虫体内RNA干扰研究中双链RNA转运的3种方法(显微注射法、喂食法及浸泡与转染法)进行介绍和讨论。这3种方法中,显微注射法能将精确数量的双链RNA迅速转运到目标组织,更适合实验室基因功能的研究;喂食法操作简单快速,适合高通量的基因筛选;浸泡与转染法也适合大规模的基因筛选,但更常见于细胞研究中。     

双链RNA在基因沉默中的作用

介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制 .这些机制具有巨大的应用前景 .     

肝炎病毒蛋白对双链RNA依赖性蛋白激酶的调节作用

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）蛋白以及丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ与双链ＲＮＡ依赖性蛋白激酶（ＰＫＲ）之间可以进行特异性结合,使病毒感染的靶细胞对干扰素（ＩＦＮ）的敏感性发生了改变。同时,肝炎病毒基因组及其编码产物与感染靶细胞中ＰＫＲ分子之间的结合,将产生广泛的生物学效应。     

双链RNA和植物对病毒的抗性

双链RNA能诱导转录后的基因沉默,是生物抵御病毒入侵、维持自身基因稳定的一种自我保护机制.把源自病毒的基因构建成反向重复结构转入植物体内,其转录出的RNA会通过分子内序列互补形成双链,将入侵病毒的同源序列降解,使转基因植株获得对病毒的高抗性.RNA干扰型抗病毒转基因植株中,转病毒基因的mRNA不存在或存在量很少,也不会翻译成有功能的病毒蛋白,因此不存在病毒RNA重组、异源包装及协生作用的潜在风险,具有较高的生物安全性.双链RNA抗病毒转基因正在成为一种高效、安全的植物抗病毒策略.     

与BT型细胞质雄性不育水稻相关联的双链RNA

以改进的Kemble′s方法提取BT型水稻细胞质雄性不育系及相应保持系线粒体核酸,在电泳分离后的不育系线粒体核酸中发现一特异双链RNA(dsRNA)分子,进一步实验表明,它是线粒体外的成份。与真菌中普遍发现的dsRNA病毒类颗粒(virus-like particles,VLP)相似,这种颗粒也能以细胞质遗传的方式稳定遗传。在表现为杂种优势的F_1代(不育系×恢复系)也发现有这种颗粒,但在F_1代黄化苗相对成熟的基部,此颗粒相对线粒体有减少的趋势,推测是因为F_1核背景不适合此VLP的生存而逐渐被排斥。电镜观察估测dsRNA分子量为6.0×10~6。这种VLP在BT型水稻细胞质雄性不育系中的普遍存在及其遗传行为表明其与不育可能有关。     

错位双链核糖核酸的热原反应

由于错位dsRNA的毒副作用得到降低,因此是一类很有潜力的抗病毒、抗肿瘤物质。研究中利用家兔实验评价了PolyI:C和PolyI:C12U引起的热原反应。在10mgml、1mgml、005mgml剂量水平PolyI:C12U均未产生发热和其他毒副作用,而PolyI:C实验组均有发热现象,甚至有家兔死亡。     

RNA干扰技术在几项研究领域的应用

作为一项新的反向遗传学技术 ,RNA干扰技术正在越来越多地应用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。在鉴定基因功能研究中 ,由于该技术的操作简便性 ,使得在基因组水平进行大范围的基因功能鉴定成为可能 ;而针对致病相关基因、致病病毒基因组进行RNA干扰 ,可以有效抑制病情恶化 ,有可能成为未来疾病治疗的重要手段 ;同时 ,将RNA干扰技术应用于植物抗病毒研究 ,为工程化植物抗病毒遗传育种提供了一个高效、特异的抗性获得手段。对RNA干扰技术在上述三个研究领域的应用作简要综述 ,并对应用过程中需注意的问题进行了探讨 。     

Transmission of killer activity into laboratory and industrial strains of Saccharomyces cerevisiae by electroinjection

The killer character was electrically introduced into protoplasts of three yeast strains. These were the killer-negative variant of the K1 killer strain Saccharomyces cerevisiae T 158 C (his-); the killer-sensitive laboratory strain S. cerevisiae AH 215 (leu-, his-); and the killer-sensitive industrial strain S. cerevisiae AS 4/H2 (rho-). The killer dsRNA used for electroinjection was isolated from the super-killer strain S. cerevisiae T 158 C. Optimum numbers of transformed cells were obtained after regeneration and selection in appropriate media if the protoplasts were exposed to three exponentially decaying field pulses of 18.2 kV/cm strength and 40 microseconds duration at 4 degrees C. In the case of the killer-negative variant of S. cerevisiae T 158 C the majority of the protoplasts were transformed, whereas in the case of the two other strains the yield of transformed clones was much less. This latter result is expected if the expression of the electroinjected dsRNA was diminished in these two strains. Gel electrophoresis of the dsRNA of the clones of the three strains supported the conclusion that the transformed clones exhibited killer activity. The transformed clones of all three species were stable.     

草鱼呼肠孤病毒（GCRV）部分基因片段cDNA文库的构建

在随机六聚体引物浓度不变条件下 ,分别采用 0 .5、2、5μg草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)单一片段RNA进行反转录cDNA合成及文库构建。结果表明 ,在GCRV RNA模板浓度大于 2 μg时 ,第二链cDNA合成产物可直接通过EB染色的琼脂糖凝胶电泳进行定量及鉴定。选择cDNA与载体连接比率为 5∶1,在高效电转化条件下 ,可获得 10 6 转化子 /μgcDNA的转化效率。阳性克隆子经酶切及PCR鉴定 ,约 4 5%以上的插入片段大于 50 0bp。     

RNA干涉的研究进展

生物体内导入双链RNA后会引起体内同源基因特异性的沉默,这种现象称为RNA干涉,本主要介绍RNA干涉的研究历史,作用机制和应用等方面的情况。     

2′-5′-Oligoadenylate synthetase is activated by a specific RNA sequence motif

2′-5′-Oligoadenylate synthetase plays a central role in the cellular innate antiviral response. Although activation of 2′-5′-oligoadenylate synthetase by double stranded RNA was discovered more than 30 years ago it is still unclear which sequence features are required by an RNA to activate the enzyme. A pool of chemically synthesized short double stranded RNAs of specific sequence was used to probe 2′-5′-oligoadenylate synthetase activation. It was found that activating double stranded RNAs contain the following motif: NNWWNNNNNNNNNWGN. Verification of this sequence motif in a pool of 102 small double stranded RNAs demonstrated a false positive prediction rate of 8% and a false negative prediction rate of 12%. The sequence motif identified provides mechanistic insight into the mechanism of 2′-5′-oligoadenylate synthetase activation by double stranded RNA and allows theoretical predictions whether a given RNA molecule has the capability to activate 2′-5′-oligoadenylate synthetase.     

失配双链核糖核酸抑制柯萨奇B3病毒感染细胞的研究

通过药物抑制病毒致细胞病变效应实验和药物对病毒空斑形成抑制实验,研究低毒性失配双链核糖核酸（Poly I：C12u）和已知的抗病毒药物双链核糖核酸聚肌胞（Poly I：C）在细胞水平对柯萨奇病毒感染的抑制作用比较,证明Poly I：C12U的抗病毒作用。实验结果表明Poly I：C12U和Poly I：C均可有效地抑制病毒空斑的形成,且量效关系已确定。