利用嵌合RNA：DNA寡聚核苷酸进行核酸序列突变

动物中内源基因的单核苷酸突变可以引起多种单基因疾病。传统的基因疗法大多利用外源基因的导入 ,由于转基因的效率和外源基因表达上存在问题 ,这种基因疗法有一定的局限性。本文介绍的利用嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)在ＤＮＡ水平上对突变基因进行修复是一种新的基因疗法。这种基因疗法同样适用于植物 ,并且在植物功能基因组的理论研究中有重要作用。1　嵌合ＲＮＡ :ＤＮＡ寡聚核苷酸 (ＲＤＯ)的分子结构ＲＤＯ有一段五碱基长的ＤＮＡ序列 ,除了突变的位点以外 ,与靶基因互补。五碱基的ＤＮＡ序列两旁各有 1 0个 2’ -Ｏ -甲基…     

人端粒酶RNA基因的克隆与鉴定

以人血基因组ＤＮＡ为模板,合成两段２０个寡聚核苷酸为引物,经过ＰＣＲ扩增,得到４８０ｂｐ的片段,克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体中,经电泳、酶切、ＰＣＲ鉴定后测定序列。序列分析表明氙克隆的人端粒酶ＲＮＡ（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅａｓｅ ＲＮＡ,ｈＴＲ）基因含有４８０ｂｐ,包括约４５０ｂｐ的编码模板区主序列和约３０ｂｐ的上游调控区序列,其中模板区的１１个核苷酸（５’－ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ－３’）合成端粒亚     

寡聚核苷酸用于治疗的前景探讨

寡聚核苷酸用于治疗的前景探讨陆长德（中国科学院上海生物化学研究所２０００３１）具有专一顺序的寡聚核苷酸可用于阻断有害基因的表达,是一种全新的治疗方法。由于它具有很高的特异性,它的降解产物对人体无毒,因此很有吸引力。近年来,寡聚核苷酸用于治疗的研究已进人动物和临床试验阶段,表现出很大的潜力。一、寡聚核苷酸阻断墓因表达的作用机制根据基因表达的中心法则,从贮存在ＤＮＡ中的信息产生有功能的蛋白质,其其中间体是信使RNA。     

肽核酸

肽核酸惠宏襄,王成济,赵小宁,金明（第四军医大学基础部生化教研室化学教研室,西安７１００３２）关键词肽核酸寡聚核苷酸具有与特定的ＤＮＡ和ＲＮＡ分子结合的特性,在医学中有广泛的应用,如作探针、引物、反义核酸等,因磷酸二酯键极易被核酸酶降解,应用受到限制...     

编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆

用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。     

甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物自然缺失突变体缺失区域的定位分析

以甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物（ＢＮＹＶＶ ＮＭ）总ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,分别获得ＲＮＡ２、ＲＮＡ３和ＲＮＡ４自然缺失突变体ｃＤＮＡ克隆。序列分析结果表明,ＲＮＡ２自然缺失突变体在７５ｋＤ通读蛋白编码区Ｃ端缺失３４８个核苷酸（缺失位置ｎｔ１４８８￣ｎｔ１８３５）。ＲＮＡ３在其２５ｋＤ蛋白编码区内缺失３６０个核苷酸（缺失位置ｎｔ７２９￣ｎｔ１０８８）。ＲＮＡ４的自然缺失区域位于３１ｋＤ蛋白     

TGFa反义寡聚核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的作用

报道了２３碱基组成的ＴＧＦａ反义寡聚核苷酸和对照寡聚核苷酸对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ８７细胞增殖及其ＴＧＦａｍＲＮＡ表达的表用,结果表明：ＴＧＦａ反义寡聚核苷酸抑制抑体外培养的ＢＩＵ８７细胞的增殖,ＤＮＡ合成和ＴＧＦａｍＲＮＡ的表达,进一步证明了ＴＧＦａ在ＢＩＵ８７细胞恶性增殖中的重要作用。     

特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELIEX筛选

化学合成含有２０个核苷酸随机序列,长度为７３个核苷酸的单链ＤＮＡ随机 ;ＰＣＲ扩增和双链化后,Ｔ７ ＲＮＡ聚合酶体外转录得到单链ＲＮＡ随机库,以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质,体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的ＲＮＡ分子。经８轮循环筛选,ＲＮＡ群体亲和染料的比例从小于０．０３％上升至２２．４％。     

同时抽提DNA和RNA的简便方法

同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的简便方法刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词ＤＮＡＲＮＡ抽提在研究工作中,常同时需要培养细胞的ＤＮＡ和ＲＮＡ,从同一样品中同时提取ＤＮＡ和ＲＮＡ。目前,已有好几种同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的方法［１～４］。作...     

O^6—甲基鸟嘌呤—DNA—甲基转移酶与肿瘤预见性化疗

以中国人肿瘤株和活检组织为材料,观察了Ｏ^6－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ－甲基转移酶（ＭＧ ＭＴ）酶活性与亚硝脲药物耐药笥之间的关系,证明ＭＧＭＴｍＲＮＡ高表达是产生耐药笥的原因;体外和临床实验证明链脲菌素和苄基鸟嘌呤可以抑制ＭＧＭＴ酶活笥,克服耐药性;体外实验证明反义寡聚核苷酸可以调节ＭＧＭＴ基因表达,逆转录病毒介导的反义ＲＮＡ可以调节ＭＧＭＴ     

甜菜坏死黄脉病毒RNA4 cDNA克隆,序列分析及其编码蛋白基因在大肠…

以甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）内蒙分离物（ＮＭ）ＲＮＡ为模板,通过反转录和ＰＣＲ扩增得到了ＢＮＹＶＶ ＲＮＡ４基因组的ｃＤＮＡ克隆ｐＧＢＦ６。序列分析结果表明,ｐＧＢＦ６含有全长ＲＮＡ４ ｃＤＮＡ插入片段,大小为１４６５个核苷酸,含有一个８４９个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由２８２个氨基酸组成的分子量为３１ｋＤａ的蛋白。与法国Ｆ２分离物ＲＮＡ４相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别     

安捷伦科技与Caliper科技联合推出最新型的RNA6000Pico芯片实验室试剂盒辅助癌症研究

该芯片实验室试剂盒可用于微量采样的ＲＮＡ分析以及极少量ＲＮＡ样品的完整性分析全球领先的跨国高科技公司安捷伦科技 (ＮＹＳＥ :Ａ)和Ｃａｌｉｐｅｒ科技公司 2 0 0 2年 12月宣布推出名为ＲＮＡ 6 0 0 0Ｐｉｃｏ的芯片实验室试剂盒 ,用于总ＲＮＡ和信使ＲＮＡ样品的自动质量控制分析。同ＲＮＡ 6 0 0 0Ｎａｎｏ芯片试剂盒相比 ,ＲＮＡ 6 0 0 0Ｐｉｃｏ灵敏度提高了 2 5倍 ,因而在临床微量采样技术的样品分析中非常有用 ,比如在癌症研究中 ,可用于比较肿瘤组织与相邻组织的基因表达差异。虽然现在的研究手段能够成功地分离单个细胞 ,并从…     

10SaRNA—具有转运与信使双功能的RNA

１０ＳａＲＮＡ——具有转运与信使双功能的ＲＮＡ张文玲丁志山（浙江中医学院分子医学研究所，杭州３１０００９）关键词１０ＳａＲＮＡ双重功能ＲＮＡ在现代化大生产中，有严格的质量管理体系。在生命体中，在分子水平上有类似的质控体系。错译产生的蛋白质或被蛋白酶裂...     

菜豆基因组微卫星DNA的分离与鉴定

从耐高温型菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｌ．）品种“Ｈａｉｂｕｓｈｉ”基因组分离微卫星ＤＮＡ,可以提供与耐热性ＱＴＬ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｔｒａｉｔ ｌｏｃｕｓ）连锁的多态遗传标记。为此,利用ｌａｍｂｄａ ＺＡＰⅡ载体构建了一个包含４００－８００ｂｐ插入片段的菜豆基因组文库。利用地高辛末端标记寡聚核苷酸（ＧＡ）１０和（ＣＡ）１０作为探针筛选该文库,并对部分阳性克隆进行测序分析,     

T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能

根据ａ－鹅膏蕈碱（ａ－ａｍａｎｉｔｉｎ）对真核生物ＲＮＡ聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因（ＣＡＴ）作为报道基因进行体内表达实验,证明Ｔ７噬菌体启动子可为真核生物ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动技术,分别以ＴＡＴＡ框、ＣＡＡＴ 框、ＧＣ框和八核苷酸序列（ｏｃｔａｍｅｒ）为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的Ｔ７启动子可能 与 ＴＦⅡＤ起始转录因子结合,形成 ＤＮＡ－核蛋白质结合物。将 ＴＡＴＡ框和八核苷酸序列分别 接入Ｔ７启动子上游,ＣＡＴ实验显示八核苷酸序列可以增强ＲＮＡ聚合酶Ⅱ对Ｔ７启动子的转录 起始作用。实验结果表明Ｔ７启动子可作为ＲＮＡ聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。     

核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用

采用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组Ⅰ株系Ｆｎｙ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的１２０９～１６２６核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ｌｓ－ＣＭＶＲＮＡ＿２的２００２～２４３３核苷酸片段的ｃＤＮＡ克隆,体外转录,同时掺入￣（３２）Ｐ获得负链ＲＮＡ探针,与纯化的番茄和甜椒上的ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交,结果表明：ＣＭＶ番茄和甜椒中国分离物与Ｆｎｙ－ＣＭＶ的核苷酸有高度同源性,隶属于Ｆｎｙ－ＣＭＶ为代表的亚组Ⅰ株系。并利用Ｋ－ＣＭＶ株系（亚组Ⅰ,源于中国）的ＲＮＡ＿２全长ｃＤＮＡ克隆的两个ＥｃｏＲＩ位点间的核苷酸序列（１６５７～２１２５ｎｔ）作探针,与上述两种ＣＭＶ中国分离物的ＲＮＡ杂交,进一步比较分析了这两个分离物和Ｋ－ＣＭＶ株系的关系。讨论了核酸酶保护法在ＣＭＶ株系鉴定中的作用。     

小量快速RNA,DNA提取研究耐药株中GSTЛ及癌基因的表达

本文采用一种小量快速ＲＮＡ制备法（硫氰酸胍－酚,氯仿／异尤戊醇－液氮）和ＤＮＡ－ＲＮＡ联合提取法（硫氰酸胍－酚,氯仿／异戊醇－液氮法）,提取ＲＮＡ和同一样本中ＤＮＡ与ＲＮＡ,同时采用一种快速液相杂交法,通过标记探针与样品ＤＮＡ或ＲＮＡ经变性－复性杂交,凝胶电泳,凝胶抽干,放射自显影。经用本法研究Ｐ３８８／ＡＤＲ耐药株中的ＧＳＴπ及三种癌基因表达表明：耐药株中的ＧＳＴπ较敏感株增加１．５６倍（ｐ＜０     

人颌下腺cDNA文库的构建

本研究从新鲜的人颌下腺组织中提取总ＲＮＡ,从中分离出带ｐｏｌｙ（Ａ）尾的信使ＲＮＡ［ｐｏｌｙ（Ａ）〕ｍＲＮＡ］,并合成带ＮｏｔＩ位点的双链ｃＤＮＡ后,接上ＥｏｃＲＩ接头定向插入λｇｔ１１表达载体,经体外包装后转染Ｙ１０９０宿主菌,遂构建成人颌下腺ｃＤＮＡ文库。该文库有４．１×１０５个噬菌体,重组率为１００％,可供寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。     

基因治疗新前沿：反基因技术

反基因技术是以脱氧寡聚核苷酸与双链ＤＮＡ分子序餐特异性结合形成三链ＤＮＡ,从而在转录水平上调控基因的一种基因治疗策略。     

特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性.实验结果表明针对CSFV5'端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用,而针对CSFV3'端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用,5′端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSFV复制的抑制作用.这些初步结果也提示,CSFV5'端和3'端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同.