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动物中内源基因的单核苷酸突变可以引起多种单基因疾病。传统的基因疗法大多利用外源基因的导入 ,由于转基因的效率和外源基因表达上存在问题 ,这种基因疗法有一定的局限性。本文介绍的利用嵌合RNA :DNA寡聚核苷酸 (RDO)在DNA水平上对突变基因进行修复是一种新的基因疗法。这种基因疗法同样适用于植物 ,并且在植物功能基因组的理论研究中有重要作用。1 嵌合RNA :DNA寡聚核苷酸 (RDO)的分子结构RDO有一段五碱基长的DNA序列 ,除了突变的位点以外 ,与靶基因互补。五碱基的DNA序列两旁各有 1 0个 2’ -O -甲基… 相似文献
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陆长德 《中国生物工程杂志》1994,14(3):55-58
寡聚核苷酸用于治疗的前景探讨陆长德(中国科学院上海生物化学研究所200031)具有专一顺序的寡聚核苷酸可用于阻断有害基因的表达,是一种全新的治疗方法。由于它具有很高的特异性,它的降解产物对人体无毒,因此很有吸引力。近年来,寡聚核苷酸用于治疗的研究已进人动物和临床试验阶段,表现出很大的潜力。一、寡聚核苷酸阻断墓因表达的作用机制根据基因表达的中心法则,从贮存在DNA中的信息产生有功能的蛋白质,其其中间体是信使RNA。 相似文献
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用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。 相似文献
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报道了23碱基组成的TGFa反义寡聚核苷酸和对照寡聚核苷酸对人膀胱移行细胞癌BIU87细胞增殖及其TGFamRNA表达的表用,结果表明:TGFa反义寡聚核苷酸抑制抑体外培养的BIU87细胞的增殖,DNA合成和TGFamRNA的表达,进一步证明了TGFa在BIU87细胞恶性增殖中的重要作用。 相似文献
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特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELIEX筛选 总被引:1,自引:1,他引:0
化学合成含有20个核苷酸随机序列,长度为73个核苷酸的单链DNA随机 ;PCR扩增和双链化后,T7 RNA聚合酶体外转录得到单链RNA随机库,以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质,体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的RNA分子。经8轮循环筛选,RNA群体亲和染料的比例从小于0.03%上升至22.4%。 相似文献
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同时抽提DNA和RNA的简便方法 总被引:1,自引:0,他引:1
同时抽提DNA和RNA的简便方法刘定干(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词DNARNA抽提在研究工作中,常同时需要培养细胞的DNA和RNA,从同一样品中同时提取DNA和RNA。目前,已有好几种同时抽提DNA和RNA的方法[1~4]。作... 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别 相似文献
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该芯片实验室试剂盒可用于微量采样的RNA分析以及极少量RNA样品的完整性分析全球领先的跨国高科技公司安捷伦科技 (NYSE :A)和Caliper科技公司 2 0 0 2年 12月宣布推出名为RNA 6 0 0 0Pico的芯片实验室试剂盒 ,用于总RNA和信使RNA样品的自动质量控制分析。同RNA 6 0 0 0Nano芯片试剂盒相比 ,RNA 6 0 0 0Pico灵敏度提高了 2 5倍 ,因而在临床微量采样技术的样品分析中非常有用 ,比如在癌症研究中 ,可用于比较肿瘤组织与相邻组织的基因表达差异。虽然现在的研究手段能够成功地分离单个细胞 ,并从… 相似文献
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10SaRNA——具有转运与信使双功能的RNA张文玲丁志山(浙江中医学院分子医学研究所,杭州310009)关键词10SaRNA双重功能RNA在现代化大生产中,有严格的质量管理体系。在生命体中,在分子水平上有类似的质控体系。错译产生的蛋白质或被蛋白酶裂... 相似文献
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菜豆基因组微卫星DNA的分离与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
从耐高温型菜豆(Phaseolus vulgaris L.)品种“Haibushi”基因组分离微卫星DNA,可以提供与耐热性QTL(quantitative trait locus)连锁的多态遗传标记。为此,利用lambda ZAPⅡ载体构建了一个包含400-800bp插入片段的菜豆基因组文库。利用地高辛末端标记寡聚核苷酸(GA)10和(CA)10作为探针筛选该文库,并对部分阳性克隆进行测序分析, 相似文献
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T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能 总被引:1,自引:0,他引:1
根据a-鹅膏蕈碱(a-amanitin)对真核生物RNA聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因(CAT)作为报道基因进行体内表达实验,证明T7噬菌体启动子可为真核生物RNA 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性DNA-蛋白质凝胶泳动技术,分别以TATA框、CAAT 框、GC框和八核苷酸序列(octamer)为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的T7启动子可能 与 TFⅡD起始转录因子结合,形成 DNA-核蛋白质结合物。将 TATA框和八核苷酸序列分别 接入T7启动子上游,CAT实验显示八核苷酸序列可以增强RNA聚合酶Ⅱ对T7启动子的转录 起始作用。实验结果表明T7启动子可作为RNA聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。 相似文献
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核酸酶保护试验在黄瓜花叶病毒株系鉴定中的初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用黄瓜花叶病毒(CMV)亚组Ⅰ株系Fny-CMVRNA_2的1209~1626核苷酸片段和亚组Ⅱ株系Ls-CMVRNA_2的2002~2433核苷酸片段的cDNA克隆,体外转录,同时掺入 ̄(32)P获得负链RNA探针,与纯化的番茄和甜椒上的CMV中国分离物的RNA杂交,结果表明:CMV番茄和甜椒中国分离物与Fny-CMV的核苷酸有高度同源性,隶属于Fny-CMV为代表的亚组Ⅰ株系。并利用K-CMV株系(亚组Ⅰ,源于中国)的RNA_2全长cDNA克隆的两个EcoRI位点间的核苷酸序列(1657~2125nt)作探针,与上述两种CMV中国分离物的RNA杂交,进一步比较分析了这两个分离物和K-CMV株系的关系。讨论了核酸酶保护法在CMV株系鉴定中的作用。 相似文献
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小量快速RNA,DNA提取研究耐药株中GSTЛ及癌基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文采用一种小量快速RNA制备法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异尤戊醇-液氮)和DNA-RNA联合提取法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异戊醇-液氮法),提取RNA和同一样本中DNA与RNA,同时采用一种快速液相杂交法,通过标记探针与样品DNA或RNA经变性-复性杂交,凝胶电泳,凝胶抽干,放射自显影。经用本法研究P388/ADR耐药株中的GSTπ及三种癌基因表达表明:耐药株中的GSTπ较敏感株增加1.56倍(p<0 相似文献
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人颌下腺cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究从新鲜的人颌下腺组织中提取总RNA,从中分离出带poly(A)尾的信使RNA[poly(A)〕mRNA],并合成带NotI位点的双链cDNA后,接上EocRI接头定向插入λgt11表达载体,经体外包装后转染Y1090宿主菌,遂构建成人颌下腺cDNA文库。该文库有4.1×105个噬菌体,重组率为100%,可供寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。 相似文献
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本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性.实验结果表明针对CSFV5'端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用,而针对CSFV3'端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用,5′端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSFV复制的抑制作用.这些初步结果也提示,CSFV5'端和3'端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同. 相似文献