直接用酚和氯仿快速提取质粒

质粒的提取是分子克隆技术中最关键的步骤之一,在对大量样品的抽提和筛选时工作量很大。提取质粒的方法很多,有碱裂解法、煮沸法等「１」,所用试剂较多,耗时较长,这些方法均要用酚和氯仿抽提以去除菌体蛋白,以免影响酶切分析。Ｂｉｊｉ,Ｔ,Ｋｕｒｉｅｎ等（１９９４）提出用乙醇溶菌法快速提取质粒,作者试验多次结果均不理想,经过改进直接用酚和氯仿溶解菌体来快速提取持粒,得到了满意的结果。用该法提取质粒ＤＮＡ,产量     

质粒DNA的酚-氯仿一步抽提法

本文介绍了一种极快速提取质粒DNA的方法。该法是对Serghini等发表的方法的改进,全过程只需用酚-氯仿混合液抽提一次,用时少,操作简便,适用于大规模筛选重组克隆子,也可直接用作转化、酶切及DNA序列测定。     

一种快速提取质粒DNA用于鉴别重组克隆的方法

介绍了一种利用过夜培养的菌液瞬时提取质粒DNA,并用于电泳鉴别含有插入子克隆的方法。事先无需准备许多繁琐的相关试剂,提取质粒的全过程只需3~5min就可完成,非常适合于做重组克隆的快速鉴别。     

利用改进的酚-氯仿法从猪毛囊中提取基因组DNA

为提高从猪毛囊组织中提取基因组DNA的效率, 文章在借鉴从其他组织提取基因组DNA方法的基础上, 对经典的酚-氯仿法的反应体系和步骤进行了改进。利用改进的酚－氯仿抽提法, 从猪的毛囊组织中快速、高效地提取了高质量基因组DNA。利用该方法从1~6根猪毛囊中提取的基因组DNA可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。     

一种从鱼类肌肉组织中提取基因组DNA的简易方法

以泰山螭霖鱼、黄河鲤鱼、东平湖鲫鱼为材料,采用改进的酚-氯仿抽提法和蛋白酶K消化法提取基因组DNA,并对其进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明,本方法提取的鱼类基因组DNA浓度为0．9-3．25μg／μL,D260nm/D280nm值为1．79-1．87,电泳条带整齐明亮,适合微卫星PCR扩增。因此,本方法能够从鱼类肌肉组织中获得较为纯净的基因组DNA,适于进一步的分子生物学研究之用。     

用异丙醇沉淀法快速提取质粒DNA

质粒 (plasmid)是 1种染色体外的稳定遗传因子 ,大小在 1～ 2 0 0 kb之间 ,具有双链闭合环状的 DNA分子 ,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。它可将有用的外源基因通过基因工程的手段送入细胞中进行繁殖和表达 ,是分子生物学实验中常用的工具。制备质粒 DNA的方法有许多 ,但大多需要苯酚、氯仿抽提以除去蛋白 ,而饱和酚的配制及氯仿等有机溶剂的挥发性气味给以学生为主体的教学实验带来了诸多不便。我们经过实验 ,提出了一种快速提取质粒的方法 ,该方法避免了上述不便并可提取足够量的较纯的质粒 ,在限制性内切酶酶切、DNA转接中可以…     

快速小量提取质粒DNA的两种方法

碱裂解法是进行分子克隆实验中质粒DNA制备最为常用的方法。在实际实验操作过程中,对该实验方法进行了改进,改进的碱裂解法解除了所提质粒DNA中RNA污染及RNase的可能影响,快速提取法使阳性克隆的筛选更加迅速,快捷。两种方法的改进使实验更加高效、简单、实用。     

饱和酚和氯仿对银染DNA检测的影响

本文在有无饱和酚、氯仿的情况下,利用银染法对家蚕ＡＦＬＰ分析产物进行检测,结果饱和酚和氯仿能明显地引起凝胶的撕裂。饱和酚、氯仿的涂布试验又显示这两种物质均无结合硅烷（ｂｉｎｄ－ｓｉｌａｎｅ）的结合作用,表明饱和酚、氯仿（含１／２５异戊醇）影响了结合硅烷的正常作用的发挥,从而影响银染ＤＮＡ的检测效果。     

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的-比较Chelex-100法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法-分别用Chelex-100法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论-两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex-100方法简便、省时,较适用于分子生物学研究及临床PCR扩增使用。     

农杆菌质粒DNA提取方法的优化

目的：为了减化操作过程,减少药品对操作人员有直接或间接危害,提高农杆菌质粒DNA的产率和实验结果的稳定性。方法：对常规碱裂解法进行了改动,改进的方法通过加大菌液的收集量,利用LiCl沉淀RNA,简化操作流程和严格反映环境条件,并且在操作过程中去除了酚、氯仿等对人体有害的试剂。结果：提取时间缩短,结果稳定,产率在1．5μg／μL以下。结论：用这种方法提取的质粒可以满足大多数分子生物学常规实验如DNA的酶切、PCR鉴定的要求。     

乳酸菌天然质粒提取方法的优化

将前人报道的乳酸菌质粒提取方法与大肠杆菌质粒提取方法相结合,对常用试剂盒质粒提取方法进行改进,建立了一种快速、安全、高效的乳酸菌质粒提取方法。提取过程中,溶菌酶最佳浓度为20mg/ml,最佳处理时间为30min,同时避免了毒性物质溴化乙锭的使用。多次实验结果表明,采用改进后的方法可明显提高乳酸菌天然质粒的提取效果。且重复性好,为下一步乳酸菌的分子改良奠定了基础。     

大肠杆菌质粒DNA提取方法的优化

目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害。方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的。结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL。结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究。     

三种提取乳酸菌中内源性质粒DNA方法的比较

采用3种不同抽提质粒DNA的方法普查了6株不同乳酸菌的内源性质粒DNA,并对3种不同方法进行比较。在相同条件下,琼脂糖凝胶电泳检测的结果显示:效果最佳者为改进的Anderson-Mckay方法,其次为液氮反复冻融方法,最差者为改进的碱裂解方法。为抽提革兰阳性细菌乳酸菌类的内源性质粒DNA提供了行之有效的方法。     

碱裂解法提取细菌质粒DNA的改良

碱裂解法是目前最为广泛应用的细菌质粒DNA的提取方法。但该法提取DNA所需时间较长,通常需要2h以上。为了快速提取质粒DNA,对常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、RNA酶A及无水乙醇的反应时间由原来的5min,5min,10min,30min,10min分别缩短至5s,1min,5s,10min,5min。这种改良方法极大地缩短了DNA的提取时间,可在30min内完成整个DNA的制备,且制备的DNA可直接应用于进一步的酶切,连接及PCR等各种分子生物学分析。     

一种提高质粒DNA凝胶电泳检测灵敏度的方法

比较了凝胶电泳示检测质粒ＤＮＡ时不同激发波长对ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度的影响,发现短波长激发光可增加ＤＮＡ的探测灵敏度。采用２６０ｎｍ作为激光光时可探测到少至０．７ｎｇ的线性ＤＮＡ。且在很广的ＤＮＡ的质量范围内,ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度 与ＤＮＡ量或正比。以此改进方法检测电离辐射诱导的ＤＮＡ单、双链断裂岢得到与其它研究结果相一致的Ｇ（ＳＳＢ）和Ｇ（ＤＳＢ）值。     

侧孢芽孢杆菌质粒提取方法的探究

以能够降解有机磷农药的两株侧孢芽孢杆菌BL-21和BL-22为研究对象,分别采用碱裂解法、试剂盒提取法和SDS法对侧孢芽孢杆菌BL-21和BL-22的质粒进行提取,并通过凝胶电泳和紫外分光光度法对提取结果进行分析,试验结果证明,适合侧孢芽孢杆菌BL-21和BL-22的质粒提取方法是SDS裂解法,该方法提取的质粒大小为10kb,且该方法提取的结果稳定,质粒的产量和质量均符合分子生物学实验的要求。     

一种快速、有效、经济的提取酵母质粒的方法

目的：建立一种经济有效、快速简便、稳定的提取酵母质粒的方法。方法：用葡糖苷酸酶消化酵母细胞壁以获取原生质体,然后采用碱裂解法裂解原生质体以获得质粒。结果：与采用商品化离心柱法试剂盒所提取的质粒相比,用该法获取的酵母质粒在PCR分析及转化效果方面没有差异。结论：建立了一种经济有效、快速简便、稳定的提取酵母质粒的方法。