苦参素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的探讨苦参素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响及可能机制。方法45只雄性SD大鼠随机分为3组:A假手术组,B单侧输尿管结扎(UUO)组,C治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/Kg/d腹腔注射。B组和C组于术后第7,14,21,28分别处死5只大鼠,A组于第28天处死大鼠。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组化法检测转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1 TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin-αSMA),Ⅰ型胶原(collagenⅠColⅠ)的表达。结果与UUO组相比,治疗组梗阻侧肾脏TGF-β1,-αSMA,ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。结论苦参素可通过下调TGF-β1,减少肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

依那普利在大鼠单侧输尿管梗阻再通模型中的抗纤维化作用

目的:探讨依那普利对大鼠单侧输尿管梗阻再通模型肾脏纤维化的影响.方法:18只SD大鼠随机分为两组:假手术组(6只)以及单侧输尿管梗阻模型组(12只).输尿管梗阻3天后,实施梗阻再通手术,再将大鼠随机分为模型组(6只)以及依那普利组(6只),术后,依那普利组给予依那普利灌胃10mg/kg/d,假手术组以及模型组给予等量0.5%CM-CNa溶液灌胃.用药2周后,取术侧肾组织做HE染色,并采用Raford评分系统对肾间质损伤程度进行评分;用Real-timePCR方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原以及CT-GFmRNA的表达;用Westemblot方法检测CTGF蛋白水平的表达.结果:模型组大鼠肾脏损伤程度,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,以及CTGFmRNA和蛋白表达水平均比假手术组明显上升(P<0.01).经依那普利治疗后,与模型组相比,以上指标均显著下降(P<0.01).结论:依那普利能有效阻止大鼠单侧输尿管梗阻再通后肾脏纤维化的进展.依那普利抗纤维化的作用机制可能与抑制CTGF的表达有关.     

甲磺酸伊马替尼对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的保护作用

目的研究甲磺酸伊马替尼（STI571）改善单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法48只小鼠随机分为4组：假手术组,模型组,小剂量治疗组（80mg/kg/d）,大剂量治疗组（160mg/kg/d）。采用左侧输尿管双结扎的方法建立UUO模型,治疗组每天以STI57180、160mg/Kg灌胃。分别于术后第8,11d分别处死各组小鼠6只。光镜下观察肾脏病理改变。用免疫组化技术检测肾组织TGF-β1、PAI-1、α-SMA和PCNA的表达。结果治疗组的肾间质纤维化定量显著低于模型组（P〈0.05）,且不同剂量组之间存在显著差异（P〈0.05）。模型组和治疗组左肾TGF-β1、PAI-1、α-SMA和PCNA的表达均随梗阻时间延长而逐渐增加,治疗组α-SMA和PCNA的表达较模型组明显减低（P〈0.05）。结论甲磺酸伊马替尼可显著减轻UUO小鼠梗阻侧肾脏间质纤维化,下调α-SMA和PCNA的表达,减少肾间质细胞外基质的沉积,对UUO小鼠肾间质纤维化有一定防治作用。     

依帕司他对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用及其机制

目的:观察依帕司他(EPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠间质纤维化的保护作用及其机制。方法:实验设假手术组(Sham)组、UUO、UUO+EPS(50 mg/kg)及UUO+EPS(100 mg/kg)剂量组,每组n=8。左侧输尿管结扎制备UUO大鼠模型。造模后连续灌胃给药3周,sham和UUO组给予等体积的羟甲基纤维素钠。HE和Masson染色观察肾组织病理变化及胶原沉积情况。免疫组化法观察肾组织醛糖还原酶(AR)表达情况,分别采用real-time PCR和(或) Western blot检测肾脏I型胶原(collagen I)、III型胶原(collagen III)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异蛋白-1(FSP-1)、纤连蛋白(FN)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生成因子-β1(TGF-β1)和AR mRNA及蛋白表达。结果:与Sham组相比,UUO组大鼠小管上皮细胞萎缩、空泡样变性,肾间质成纤维细胞及肌成纤维细胞大量增殖并伴大量炎症细胞浸润,胶原沉积明显增加,collagen I、collagen III、TGF-β1和AR mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),同时EMT标志性蛋白α-SMA、FSP-1、FN mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),而E-cadherin mRNA及蛋白表达水平明显降低。与UUO组相比,经EPS治疗3周后,肾间质纤维化程度明显减轻,胶原沉积明显减少,collagen I、collagen III、TGF-β1和AR mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05),另外α-SMA、FSP-1、FN mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05),而E-cadherin mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01或P<0.05),而且100 mg/kg剂量组上述指标的改变均好于低剂量组(P<0.05,P<0.01)。结论:依帕司他对肾间质纤维化具有一定的改善作用,其机制可能与其抑制TGF-β1介导的AR表达、进而抑制大鼠肾小管上皮细胞EMT有关。     

参麦注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的 探讨参麦注射液在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化进程中的可能作用.方法 成年SD大鼠54只,随机分为假手术组、模型组和参麦注射液治疗组.假手术组仅完成开腹过程,不结扎输尿管;模型组和参麦注射液治疗组行开腹左侧输尿管结扎术,术后参麦治疗组每天腹腔注射参麦注射液3 mL/(kg·d),假手术组与模型组则每天腹腔注射等量生理盐水.分别于实验的第7、14、21天各组处死动物6只,取左肾组织进行HE染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化检查,并测定梗阻侧肾组织中SOD和MDA含量.结果 与模型组比较,参麦注射液治疗组肾小管间质病理改变明显减轻,肾间质α-SMA表达减少;肾组织中SOD活性增加,MDA含量下降.结论 参麦注射液可通过减少氧化应激,减少肾间质α-SMA表达而抑制肾间质纤维化进程.     

单侧输尿管结扎再通大鼠模型的建立方法及其评价

目的比较单侧输尿管结扎（UUO）与单侧输尿管结扎再通（RUUO）建立的SD大鼠肾纤维化模型的优劣,从而得到更符合临床慢性肾衰进展特点的动物模型,以供临床药物筛选、疗效评介、科研、教学使用。方法健康SPF级雄性SD大鼠54只,随机分成假手术组、UUO组及UUO再通组各18只,造模成功后检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）,病理检查肾小管间质纤维化指数和免疫组化检查α-肌动蛋白（α-SMA）。结果无论从肾功能方面,还是病理检查方面,UUO再通的大鼠肾纤维化动物模型均优于UUO大鼠模型。结论再通UUO肾纤维化大鼠模型在功能及病理方面及其相关的免疫组化方面优于UUO组,其病理特点更符合慢性肾小管间质纤维化进程的动物模型。     

波形蛋白在实验性肾间质纤维化上皮-间充质转分化中的表达及意义

目的明确肾脏纤维化中波形蛋白表达在上皮-间充质转分化观察中的意义。方法雄性SD大鼠12只,随机分成假手术组和模型组,模型组行单侧输尿管梗阻术。造模后14天处死大鼠,分别采用免疫组织化学染色和Western印迹法对梗阻侧肾组织波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白作定性和定量检测。并通过体外实验用TGF-β1刺激诱导人近端小管上皮细胞株(HK-2)发生上皮-间充质转分化。采用间接免疫荧光法对E-钙粘蛋白和波形蛋白进行染色,采用激光共聚焦显微镜观察细胞形态改变,并用蛋白印迹法定量检测HK-2细胞波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达水平。结果萎缩和扩张的肾小管上皮细胞出现波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达,肾组织中波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达量显著增加;正常的HK-2细胞,细胞形态为不规则圆形,TGF-β1刺激后细胞伸展成长梭形;细胞α平滑肌肌动蛋白表达水平显著增加,波形蛋白表达水平无显著变化。结论体内实验研究上皮-间充质转分化,将波形蛋白作为间充质细胞标志物具有较好的参考价值,而体外研究中,其标志作用尚存在争议。     

Hsp/Hsc70相互作用蛋白CHIP在大鼠肾纤维化组织中的高表达

利用DNA重组技术 ,将编码人Hsp Hsc70相互作用蛋白CHIP(carboxylterminusofHsc 70 interactingprotein ,CHIP)全长、N端TPR及C端U box结构域的DNA片段分别构建于融合表达质粒pGEX 5X 1中 ,转化大肠杆菌 .纯化GST CHIP融合蛋白 ,制备了特异性识别人、小鼠及大鼠组织细胞内CHIP蛋白的多克隆抗体 .利用该抗体 ,对多种组织、细胞的内源性CHIP蛋白进行了检测 .发现在肾组织中 ,CHIP主要表达于皮质、髓质小管上皮细胞的胞浆中 ,且在单侧结扎输尿管所至的大鼠肾纤维化模型 (UUO)组织中 ,CHIP的表达较假手术组有显著增强趋势     

蛋白激酶C亚型在人胃癌组织中的表达及其意义

目的研究PKC亚型α、β1、β2及ε在人胃癌组织的表达,并探讨PKC亚型表达与胃癌组织分化程度、临床分期以及与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化方法观察胃癌组织及其癌旁组织中PKC亚型α、β1、β2及ε的表达。结果PKCα在46例胃癌组织中,80.3%呈阳性表达,其中21.74%呈强阳性表达,与癌旁组织相比,二者差异显著(χ2=4.813,P<0.05);PKCβ1、β2则呈阴性;20例癌旁组织中,PKCε70%呈阳性表达,均为( ),46例胃癌组织中84.8%呈阳性表达,其中26.1%呈强阳性,两者阳性率无显著差异(χ2=1.93,P>0.05),但染色强度差异显著(χ2=5.07,P<0.05)。结论1.胃癌组织和癌旁组织均表达PKCα和,εPKCβ1、β2则呈阴性。2.胃癌组织PKC亚型α、ε的表达较癌旁组织显著增强。3.PKCα、ε的表达与胃癌组织的分化程度、临床分期及有无淋巴结转移均无明显相关性。     

大鼠肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的　观察单侧输尿管结扎 (UUO)大鼠模型中肾脏病理改变 ,肾组织α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)和纤维连接蛋白 (FN)表达的变化 ,证明UUO方法可快速制作理想的肾脏细胞转分化和间质纤维化动物模型。方法　大鼠随机分为假手术组 (SOR)和UUO组。随机选取各组中的 6只大鼠分别于单侧输尿管结扎术后 3天、 7天、 14天、 2 1天和 2 8天处死 ,收集血清与肾组织供生化及病理分析。结果　① 2 4小时尿蛋白定量 ,UUO组与假手术组无统计学差异。UUO术后 7～ 14天 ,大鼠出现明显血尿素氮、肌酐值升高 ;术后 2 1～ 2 8天 ,血尿素氮、肌酐值反而下降 ,但 2 8天时血肌酐值仍然高于假手术组 (P <0 0 5 )。②UUO组肾小管间质损伤评分 (TIS)明显高于假手术组。UUO术后 3天 ,肾脏组织出现了早期纤维化的病理改变。随着梗阻时间延长 ,小管间质纤维化程度和间质细胞增殖、炎细胞浸润逐渐加重 ,皮质变薄十分明显。术后 2 8天 ,Masson染色见皮质区、皮髓交界处纤维化明显 ,但肾小球仍无明显病变。③免疫组化结果显示 ,UUO术后 3天肾间质α SMA阳性细胞数和FN表达增加 ,并随时间递增。UUO术后 7天 ,可见少许α SMA阳性的转分化小管上皮细胞 ;术后14天转分化的小管上皮细胞明显增多。α SMA表达与FN表达成正相关 (r=0 996 ,P <     

兔慢性肾功能衰竭模型的建立与评价

目的建立兔慢性肾功能衰竭模型,为干细胞移植治疗和相关研究奠定基础。方法普通级大耳白兔随机分为正常对照组和单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）组。UUO组于输尿管结扎后2、4、6、8周进行血生化肾功能指标检测,并取肾组织观察肾脏病理学改变,通过SPECT动态观察肾小球滤过率的变化,采用免疫组织化学方法观察肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达情况。结果①UUO组术后第2周,出现明显的血肌酐升高,尿素氮术后第8周开始升高（P〈0.01）。②UUO组术后第4周,肾脏组织出现了早期间质纤维化的病理改变,术后第8周肾小球开始出现硬化,间质纤维化明显,皮质明显变薄。术后第12周,肾小球硬化比例增加,肾小管玻璃样变性,间质纤维化进一步加重（P〈0.05）。③SPECT动态观察肾小球滤过率,UUO组第4周GFR值比正常对照组降低,到第8周时,GFR值进一步下降,结扎侧肾脏功能降低甚至丧失。④免疫组织化学染色显示,TGF-β1在术后第4、8、12周均明显增强,并且各时间点表达均有显著差异（P〈0.05）。结论单侧输尿管结扎法成功制作比较稳定的慢性肾功能不全模型,UUO后第8周符合肾脏间质纤维化模型标准。     

miR-188-5p对肾间质纤维化过程中MMP-13表达的影响

目的:探讨miR-188-5p对肾间质纤维化过程中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)表达的影响。方法:采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MC)纤维化,观察纤维化过程中miR-188-5p和MMP-13的表达变化;通过报告基因实验研究miR-188-5p对MMP-13的调控作用;通过脂质体转染的方法将人工合成的miR-188-5p mimics/inhibitor转入细胞内增加或减少miR-188-5p的表达,进一步观察miR-188-5p对MMP-13表达的影响。结果:TGF-β1诱导肾小球系膜细胞纤维化后miR-188-5p的表达明显升高,而MMP-13表达下调;报告基因实验表明miR-188-5p对MMP-13的表达有明显的调控作用,减少miR-188-5p的表达后MMP-13的表达上调,而增加miR-188-5p的表达后MMP-13的表达下调,呈明显负性调控。结论:在肾间质纤维化过程中,miR-188-5p可能通过抑制MMP-13的表达而发挥促纤维化的作用,本研究为肾间质纤维化的治疗提供了新的靶点。     

PCT及CRP在急性肠梗阻大鼠血清中的表达水平及其临床意义

目的:探讨降钙素原(Procalcitonin,PCT)及C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)在急性肠梗阻大鼠血清中的水平及其临床意义。方法:将83只Wistar大鼠分为对照组(n=13)、假手术组(n=35)和急性肠梗阻组(n=35)。对照组大鼠采集标本后处死,肠梗阻组行开腹手术结扎回肠末端,假手术组仅行开腹手术。检测8 h、24 h、48 h、72 h及96 h血清PCT及CRP水平,观察急性肠梗阻大鼠回肠组织的病理学改变情况。结果:假手术组PCT与CRP水平在术后24 h内显著升高,48 h至96 h逐渐下降;各时间点PCT水平明显高于对照组,而CRP水平在实验结束时已恢复至正常水平。肠梗阻组PCT和CRP水平在各时间点均明显高于对照组,并逐渐增加,到实验结束时达到高峰;肠梗阻组PCT和CRP水平在48 h-96 h均显著高于假手术组,差异具有统计学意义(P0.05)。组织病理学检查显示,对照组大鼠肠壁粘膜结构正常,假手术组可见轻度病理改变,肠梗阻组大鼠回肠组织可见粘膜结构明显破坏,绒毛坏死,严重水肿和炎症细胞浸润。结论:血浆PCT和CRP水平能够反映肠梗阻的状态和肠粘膜受损程度。     

Adoptive transfer of macrophages ameliorates renal fibrosis in mice

We performed adoptive transfer of bone marrow-derived (BM) macrophages following pharmacological depletion of leukocytes in a mouse model of unilateral ureteral obstruction (UUO). Treatment with cyclophosphamide (CPM) caused marked decrease in the numbers of F4/80-positive interstitial macrophages as well as in peripheral blood leukocyte counts, and adoptive transfer of BM macrophages to CPM-treated mice resulted in significant increase in the numbers of interstitial macrophages both at day 5 and at day 14 after UUO. At day 5 after UUO, no significant change was observed in the degree of renal interstitial fibrosis either by treatment with CPM or with CPM+macrophage. However, at day 14 after UUO, treatment with CPM caused significant increase in the degree of interstitial fibrosis, and adoptive macrophage transfer to these mice attenuated this enhancement in renal fibrosis. Our result suggests the role of infiltrating macrophages on facilitating tissue repair at late stage of UUO.