CHFR,PARP-1基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响（英文）

目的:探讨CHFR与聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)基因对B细胞淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响。方法:用5-Aza-d C处理Raji细胞,后通过qRT-PCR检测CHFR的mRNA表达水平,western blot评估CHFR、PARP-1的蛋白表达。经CHFR慢病毒转染Raji细胞后,用qRT-PCR和western blot评估RAJI细胞中的CHFR、PARP-1变化。通过CCK-8法测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:与对照组相比,经5-Aza-d C处理Raji组的CHFR mRNA表达显著上调(P0.01),PARP-1mRNA水平和蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与对照组相比,Sh RNA组CHFR的mRNA表达显着下调(均P0.01),PARP-1mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05)。CCK结果显示CHFR Sh RNA组细胞活力明显低于对照组(P0.05)。流式细胞术结果显示CHFR沉默后细胞凋亡率降低(P0.05)。结论:CHFR可能通过PARP-1调控B淋巴细胞的增殖和凋亡。     

SPARCL1通过MEK/ERK信号通路调节非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

摘要 目的：分析富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1（SPARCL1）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并探讨分裂原活化抑制剂（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路在其中发挥的作用。方法：收集2019年9月~2021年6月期间本院接受手术治疗的84例NSCLC患者癌组织与相应癌旁组织,实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定并比较各组织以及正常肺上皮细胞HBEpiC、NSCLC细胞A549、HCC827、H1299、H292中SPARCL1 信使RNA（mRNA）表达水平,选取A549、HCC827培养并分组,分为对照组、NC siRNA组、SPARCL1 siRNA组、U0126组（MEK/ERK特异性抑制剂）、SPARCL1 siRNA加U0126组,细胞计数法（CCK8）以及平板克隆法测定A549、HCC827细胞增殖,流式细胞仪测定A549、HCC827细胞凋亡,Transwell小室法测定A549、HCC827细胞侵袭能力,蛋白质印迹法（western blot）检测SPARCL1、p-MEK、MEK、p-ERK1/2、ERK1/2蛋白表达。结果：SPARCL1在NSCLC组织中mRNA表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）;与HBEpiC细胞相比,NSCLC细胞A549、HCC827、H1299、H292细胞中SPARCL1 mRNA表达水平降低（P＜0.05）;与对照组相比,SPARCL1 siRNA组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率降低（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达升高（P＜0.05）,U0126组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率升高（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低（P＜0.05）;与SPARCL1 siRNA组相比,SPARCL1 siRNA加U0126组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率升高（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低（P＜0.05）。结论：SPARCL1可能通过调控MEK/ERK通路影响NSCLC A549、HCC827细胞增殖、侵袭与凋亡。     

低氧诱导因子基因沉默对胃癌细胞BGC-823微血管生成和血管内皮生长因子表达的影响

摘要 目的：探讨低氧诱导因子基因沉默对胃癌细胞BGC-823微血管生成和血管内皮生长因子表达的影响。方法：对数生长期的BGC-823细胞株分为三组-实验组、对照组与空白组,分别转染200 ng/mL shRNA-HIF-1α、200 ng/mL shRNA-NC与等体积的磷酸盐缓冲液。采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭,Western blot检测蛋白表达,qRT-PCR检测基因表达。结果：细胞转染后24 h与48 h,实验组的HIF-1α相对表达量、细胞增殖指数、细胞迁移与侵袭指数显著低于空白组和对照组(P＜0.05),细胞凋亡指数显著高于空白组和对照组(P＜0.05)。细胞转染后48 h,与对照组和空白组相比,实验组的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.05)。结论：沉默HIF-1α表达能抑制胃癌细胞BGC-823微血管生成和VEGF表达,从而抑制胃癌细胞增殖、转移与侵袭,促进细胞凋亡。     

Pax3对神经细胞中的转录调控作用的实验研究

摘要 目的：探讨Pax3的过表达对Neuro-2a细胞中转录本的表达影响,初步分析Pax3对Neuro-2a细胞可能的转录调控作用。方法：反复冻融裂解法获取Pax3过表达腺病毒后将神经瘤母细胞系Neuro-2a传代培养,而后将Pax3过表达腺病毒和传代培养后的Neuro-2a细胞加入到同一培养皿中,蛋白质免疫印迹（Western blot）检测过表达Pax3蛋白的Neuro-2a细胞（Pax3过表达组）和对照组（NC组）Neuro-2a细胞的Pax3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测Pax3过表达组和NC组Neuro-2a细胞的Pax3mRNA水平,Trizol法提取Pax3过表达组和NC组Neuro-2a细胞的总RNA,然后进行全转录本测序,最后将选出的有差异性的基因使用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证。结果：与NC组相比,Pax3过表达组的Pax3蛋白和Pax3mRNA表达水平明显升高（P＜0.05）;Pax3过表达组中发现了1045个基因表达上调,1313个基因表达下调。通过qRT-PCR验证发现在Pax3过表达组中Nppb和Chrna5表达水平上升（P＜0.05）,Arhgap5、Rock1、Rif1、Brca2、Prkg2和Stag2表达水平下降（P＜0.05）。结论：Pax3过表达腺病毒感染Neuro-2a细胞后,其蛋白和mRNA表达水平均升高,Rock1、Rif1和Stag2可能作为Pax3的下游靶点参与调控Neuro-2a细胞周期和干细胞特性。     

氧化应激下角质形成细胞中YTHDC1升高促进IL-1β表达

摘要 目的：探讨氧化应激下角质形成细胞内m6A甲基化修饰酶YTHDC1异常对促炎因子的调控机制。方法：通过Western blot和qRT-PCR实验检测氧化应激下角质形成细胞中YTHDC1蛋白和mRNA表达水平。siRNA转染至角质形成细胞以干涉YTHDC1表达,随后继续给予300 μM过氧化氢处理,通过Western blot和qRT-PCR实验检测角质形成细胞中促炎因子IL-1β蛋白和mRNA表达,进一步通过ELISA检测细胞上清中IL-1β分泌,通过CCK8法检测细胞存活水平。结果：1）过氧化氢刺激后人角质形成细胞系HaCaT细胞中YTHDC1表达水平较未处理组明显升高;2）干涉YTHDC1可以显著降低HaCaT细胞中IL-1β表达和上清中分泌;3）干涉YTHDC1后IL-1β mRNA稳定性下降,并且细胞存活率下降。结论：氧化应激下角质形成细胞中m6A甲基化修饰酶YTHDC1表达水平升高,通过提高mRNA稳定性促进IL-1β表达,可能是外界环境应激引起各种免疫性皮肤病的重要机制。     

硒对氧化应激诱导的胎盘滋养层细胞增殖与凋亡的影响

摘要 目的：检测硒（NaSe）对CoCl₂氧化应激诱导人胎盘滋养层细胞(JEG-3) 增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法：体外培养JEG-3 细胞,在加入CoCl₂（500 μM）氧化应激诱导前先加入NaSe(100nM) 预处理24小时,MTT 实验检测硒对氧化应激JEG-3的增殖促进作用; 利用细胞流式术（FCM）检测硒对氧化应激JEG-3细胞凋亡的影响;用Western blot检测硒影响氧化应激JEG-3细胞增殖与凋亡的可能分子生物学机制。结果：MTT 提示硒能够增加氧化应激诱导的JEG-3细胞的增殖活性(P＜0.05) ,降低氧化应激JEG-3细胞凋亡率(P＜0.01) ,同时硒蛋白Gpx1表达上调(P＜0.05) ,脂质过氧化物MDA表达下降（P＜0.05）。结论：硒通过上调硒蛋白Gpx1 表达,降低脂质过氧化物MDA表达,进而降低氧化应激JEG-3细胞凋亡率而发挥其促进增殖活性,提示硒的补充对子痫前期的预防和治疗具有重要的意义。     

miR-1204表达对非小细胞肺癌细胞增殖凋亡、上皮间质转化和MAPKs信号通路的影响

摘要 目的：探究微小RNA-1204（miR-1204）表达对非小细胞肺癌细胞增殖凋亡、上皮间质转化（EMT）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路的影响。方法：将人非小细胞肺癌细胞A549随机分为miR-1204组（转染miR-1204mimic质粒）、NC组（转染空载质粒）和对照组（仅加转染试剂）。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测细胞E-钙黏蛋白（E-cad）、N-钙黏蛋白（N-cad）和波形蛋白（Vim）mRNA的表达水平。采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹（WB）法检测细胞p-P38、P38、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK mRNA和蛋白的表达水平。结果：培养12、24、48 h,miR-1204组细胞增殖抑制率均高于对照组和NC组同期（P＜0.05）,对照组与NC组同期的细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。但三组细胞随着培养时间延长,细胞增殖抑制率均增加,两两时间点组内比较均有差异（P＜0.05）。miR-1204组细胞凋亡率高于对照组和NC组（P＜0.05）。miR-1204组E-cad mRNA的表达水平高于对照组和NC组（P＜0.05）,N-cad、Vim mRNA的表达水平低于对照组和NC组（P＜0.05）。miR-1204组p-P38、p-ERK、p-JNK mRNA和蛋白的表达水平均低于对照组和NC组（P＜0.05）。结论：上调miR-1204的表达可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,促进其凋亡,还可以抑制其EMT,该作用可能是通过抑制MAPKs信号通路实现的。     

MMPs抑制剂对结肠癌细胞凋亡、免疫功能及炎性因子的影响

摘要 目的：探究基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）抑制剂对结肠癌细胞凋亡、免疫功能及炎性因子的影响。方法：取SW480结肠癌细胞,随机分为低表达组（将MMPs抑制剂慢病毒质粒与SW480细胞混合培养）,空白对照组（SW480细胞与慢病毒包装质粒混合培养）。采用流式细胞法、免疫细胞化学法、酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法、实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR）法、Hoechst 33258 荧光染色法检测SW480细胞凋亡,TNF-α、IL-6蛋白阳性表达、免疫球蛋白表达水平、MMP-9 mRNA表达量。结果：空白对照组与低表达组相比较,低表达组SW480细胞内MMP-9 mRNA表达量显著下降(P<0.05),说明转染成功。与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞凋亡数量显著上升(P<0.05)。低表达组细胞的细胞核出现核固缩的概率显著高于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞IL-2表达水平显著升高（P＜0.05）,IL-4、TGF-β1、TIM-1表达水平显著降低（P＜0.05）。SW480细胞内的MMP-9 mRNA与IL-2呈现负相关性（r=-0.723,P=0.007）,MMP-9 mRNA与IL-4、TGF-β1及TIM-1均呈现负相关性（均P＜0.05）。空白对照组SW480细胞中TNF-α、IL-6蛋白阳性数最高,低表达组SW480细胞中TNF-α、IL-6蛋白阳性数最低,与空白对照组相比较,低表达组SW480细胞中TNF-α、IL-6阳性数显著下降(均P<0.05)。结论：MMPs抑制剂可促进SW480细胞凋亡,改善免疫功能,降低炎性介质的表达水平。     

受体酪氨酸激酶Axl对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

摘要 目的：研究受体酪氨酸激酶Axl在胶质母细胞瘤组织和细胞系U-118MG细胞中的表达情况及其对U-118MG细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法：收集2015年3月至2018年5月在本院进行手术切除并经病理分型证实的胶质母细胞瘤组织标本（n=30）,另取脑外伤手术中因作内减压而切除的正常脑组织作为对照（n=28）。采用荧光实时定量 (qRT-PCR)检测正常脑组织和胶质母细胞瘤肿瘤组织中Axl mRNA表达水平;采用Western blot检测人小神经胶质HM细胞、U-118MG细胞以及Axl-shRNA转染后U-118MG细胞中Axl蛋白表达水平;采用CCK-8检测Axl-shRNA转染后U-118MG细胞增殖能力;采用流式细胞术检测Axl-shRNA转染后U-118MG细胞凋亡水平;采用Transwell小室实验检测Axl-shRNA转染后U-118MG细胞的侵袭能力。结果：在胶质母细胞瘤组织中Axl mRNA表达水平显著高于正常脑组织（P<0.05）;U-118MG细胞Axl蛋白表达水平显著高于人小神经胶质细胞系HM细胞,差异有统计学意义（P<0.05）;转染Axl-shRNA后,U-118MG细胞中Axl蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与U-118MG细胞和转染control-shRNA细胞相比, 转染Axl-shRNA的U-118MG细胞增殖能力降低（P<0.05）,凋亡水平升高（P<0.05）,侵袭能力降低（P<0.05）。结论：在胶质母细胞瘤组织和U-118MG细胞中,Axl表达水平显著增高,并且Axl表达水平与U-118MG细胞增殖、凋亡及侵袭密切关联。     

基因在B 细胞淋巴瘤细胞中的表达及意义

目的：探讨基因CHFR在B细胞淋巴瘤Raji 细胞中的表达,以及基因甲基化对Raji 细胞增殖和凋亡中所产生的影 响。方法：体外培养人B细胞淋巴瘤细胞株Raji 细胞,用不同浓度的去甲基化试剂5- 氮杂-2 脱氧胞苷处理Raji 细胞株,通过 RT-PCR 检测CHFR 基因表达水平的变化,通过MS-PCR 检测基因甲基化变化,CCK 法及流式细胞术检测Raji 细胞增殖 及凋亡变化。结果： 基因在Raji 细胞中出现弱表达,经去甲基化试剂处理后基因表达水平增高,随药物浓度增加Raji 细胞的抑制率及凋亡率增高。结论：5-氮杂-2 脱氧胞苷可以恢复基因表达水平,抑制Raji 细胞的增殖,促进凋亡。基 因在细胞增殖起负向调控的作用。     

PARP-1对高糖诱导的心肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:研究PARP-1对高糖诱导的心肌细胞增殖的影响及可能机制。方法:用高糖处理H9C2细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。H9C2细胞转染PARP-1 si RNA和si RNA control,q RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。用高糖处理转染PARP-1 si RNA后的H9C2细胞,CCK-8检测细胞增殖情况,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达。结果:高糖诱导的H9C2细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平明显高于正常培养的H9C2细胞(P0.05)。PARP-1 si RNA能够明显下调H9C2细胞中PARP-1 m RNA和蛋白水平。高糖处理后H9C2细胞存活率明显降低,细胞中MDA水平升高,细胞中SOD水平降低,细胞内的PCNA水平降低,p38MAPK磷酸化水平升高,与正常培养的H9C2细胞相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。用高糖培养下调PARP-1的H9C2细胞,细胞存活率有所升高,细胞中MDA水平降低,细胞中SOD水平也升高,细胞中PCNA水平升高,细胞中p38MAPK磷酸化水平降低,与单纯高糖培养的细胞相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:PARP-1在高糖诱导的心肌细胞中表达上调,可能通过激活p38MAPK信号途径,增加细胞脂质氧化应激抑制心肌细胞增殖。     

RNA干扰Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨抑制Mcl-1基因表达对淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:NC-siRNA、Mcl-1-siRNA转染Raji细胞,以不作任何处理的细胞作为空白对照组,48h后Western blot检测各组细胞中Mcl-1的蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果:转染Mcl-1-siRNA后Mcl-1的蛋白表达显著降低;与对照组及NC-siRNA组比较,Mcl-1-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白显著上调表达,Notch1和Hes1蛋白显著下调表达。结论:RNA干扰抑制Mcl-1基因表达可显著降低Raji细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

前列腺癌患者组织中RPL6的表达及临床意义

目的:探讨前列腺癌患者组织中核糖体蛋白L6(RPL6)表达,分析其对肿瘤恶性程度的评估作用。方法:收集2013年12月-2015年12月在本院接受治疗的前列腺疾病患者117例,根据病理结果分为前列腺炎组63例、前列腺癌组54例;另取同期进行健康体检的健康者80例作为正常对照组。采用Western-blot法检测三组研究对象的前列腺组织RPL6表达,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肿瘤标志物含量,采用RT-PCR法检测前列腺组织增殖基因、侵袭基因mRNA表达,采用Pearson检验分析RPL6表达量与肿瘤恶性程度的相关关系。结果:前列腺癌组患者的前列腺组织RPL6表达量高于前列腺炎组及正常对照组(P0.05);前列腺癌组患者的血清前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺特异性酸性磷酶(PSAP)、尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)、硫氧还蛋白(TRX)含量高于前列腺炎组及正常对照组(P0.05);前列腺癌组患者的前列腺组织增殖基因URG11、PTEN mRNA表达量高于前列腺炎组及正常对照组,PRDM5 mRNA表达量低于前列腺炎组及正常对照组,侵袭基因IgGHG1、TMPRSS2-ER、PIK3C2B mRNA表达量高于前列腺炎组及正常对照组(P0.05)。前列腺癌患者的组织RPL6表达量与肿瘤标志物含量、增殖及侵袭基因活性均呈直接相关关系(P0.05)。结论:高表达的RPL6是前列腺癌早期诊断的可靠指标,且与肿瘤恶性程度直接相关,有望成为前列腺癌辅助诊断及预后评估的重要手段。     

Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究

摘要 目的：探讨Smac基因调控Caspase-3表达对紫杉醇耐药肺腺癌细胞株生物活性及经典凋亡信号通路的作用机制。方法：取构建好的耐药A549细胞,将其分为A549细胞（LC）组、A549细胞+Smac-NC（SN）组、A549细胞+Smac抑制剂（SI）组、A549细胞+Smac激动剂（SM）组、A549细胞+Caspase-3-NC（CN）组、A549细胞+Caspase-3抑制剂（CI）组、A549细胞+Caspase-3激动剂（CM）组、A549细胞+Smac激动剂+Caspase-3激动剂（MM）组;Real-time PCR法检测正常肺上皮细胞及4种肺腺癌细胞系中Smac、Caspase-3表达水平,将阴性对照、Smac、Caspase-3类似物转染至紫杉醇耐药肺腺癌细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测经典凋亡信号通路表达,并分析Smac与Caspase-3的相关性。结果：肺腺癌细胞系中的Smac、Caspase-3 mRNA表达量显著低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B（P＜0.05）,其中A549的Smac、Caspase-3 mRNA值最小（P＜0.05）,因此选取其作为此次实验细胞;LC组与SN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与SN组相比,SI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与SI组相比,SM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;LC组与CN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CN组相比,CI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与CI组相比,CM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;SM组与CM组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CM组相比,MM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;Smac与Caspase-3呈现正相关（r=0.470,P=0.002）,组间具有显著差异。结论：Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株细胞生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控Caspase-3表达有关。     

Egr-1基因沉默对A549细胞放射敏感性的影响

目的:探讨Egr-1基因沉默对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法:选用A549细胞株作为研究对象,将其分成A、B、C三组,即空白对照组(只加入RPMI-1640培养)、阴性对照组(加入LV3-NC-sh RNA)、实验组(加入EGR1-homo-2294-sh RNA),采用慢病毒介导的sh RNA干扰技术使实验组细胞Egr-1基因沉默表达。利用荧光显微镜、自动化荧光定量细胞成像分析系统分析sh RNA转染,利用FQ-PCR分析Egr-1表达,再利用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数的差异。结果:慢病毒介导的sh RNA成功转染阴性对照组、实验组细胞;空白对照组与阴性对照组Egr-1表达无差异(P0.05),实验组与空白对照组、阴性对照组比较Egr-1均受到明显抑制(P0.05);克隆形成实验中细胞放射敏感性参数D0、SF2实验组细胞与空白对照组、阴性对照组比较均存在明显差异(P0.05)。结论:Egr-1基因沉默使A549细胞放射敏感性降低,Egr-1表达可能与肿瘤细胞对放射的敏感性有关。     

BET抑制剂JQ1通过调控GSK3对结肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响

摘要 目的：探讨BET抑制剂JQ1通过调控GSK3对结肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响。方法：将HCT116细胞进行培养,按处理方式的不同分为对照组（NC组）、给药组（JQ1组）、给药+沉默组（JQ1+siRNA-GSK3组）与给药+过表达组（JQ1+OE-GSK3组）。分别通过细胞增殖-毒性检测（CCK-8）实验检测细胞增殖情况;原位末端标记（TUNEL）染色观察细胞凋亡水平;流式细胞术检测细胞凋亡数量;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测相关mRNA含量水平表达变化;蛋白质印迹法（Western Blot）检测增殖与凋亡相关蛋白表达情况。结果：与NC组表现出的高增殖活性相比,给予JQ1后能够明显抑制HCT116细胞的增殖活性（P<0.05）;与JQ1组相比,沉默GSK3后其增殖活性则进一步下降,过表达GSK3后其增殖活性明显上升（P<0.05）。TUNEL染色结果显示,对NC组相比,JQ1组及JQ1+siRNA-GSK3组细胞凋亡水平显著上升;与JQ1组相比,过表达GSK3后其凋亡水平明显降低（P<0.05）。流式细胞术结果显示,NC组细胞凋亡数量最少,而给予JQ1后凋亡细胞数量显著增加,同时沉默GSK3后其细胞凋亡数量进一步上升,过表达GSK3后细胞凋亡数量明显下降（P<0.05）。Western Blot与RT-PCR显示;与NC组相比,给予JQ1及siRNA-GSK3处理后Caspase-3及BAX表达显著增加,GSK3与PCNA表达显著降低（P<0.05）;与JQ1组相比,过表达GSK3后Caspase-3及BAX表达明显降低,GSK3与PCNA表达明显上调（P<0.05）。结论：JQ1能够抑制HCT116细胞的增殖水平并促进其凋亡,从而发挥抗肿瘤作用,这一过程可能与JQ1能够抑制GSK3的表达有关。     

miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖凋亡中的作用。方法:分离幼鼠海马神经元细胞,转染miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(inhibitor control)、miR-34a模拟物(miR-34a mimics)、模拟物对照(mimics control),RT-PCR检测细胞中miR-34a表达水平。MTT检测转染后细胞增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平。结果:转染miR-34a inhibitor可以抑制miR-34a的表达,miR-34a mimics可以促进miR-34a的表达。miR-34a mimics对细胞增殖抑制率明显高于mimics control组(P0.05),miR-34a inhibitor组抑制率明显低于inhibitor control组(P0.05)。miR-34a inhibitor组神经元细胞凋亡率明显低于inhibitor control组(P0.05),miR-34a mimics组神经元细胞凋亡率明显高于mimics control组(P0.01),inhibitor control组和mimics control组神经元细胞凋亡率差异不显著(P0.05)。miR-34a inhibitor组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量低于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a inhibitor组Bcl-2蛋白表达量高于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量高于mimics control,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Bcl-2蛋白表达量低于mimics control,差异显著(P0.05)。结论:miR-34a抑制海马神经元细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达有关。     

血浆M-CSF、MMP9、TIMP-1水平及HPV阳性大鼠宫颈癌增殖能力的关系研究

摘要 目的：探究血浆巨噬细胞集落刺激因子（Macrophage colony stimulating factor, M-CSF）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9, MMP9）及其组织抑制因子1（tissue inhibitor of the metalloproteinases, TIMP1）水平及人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）阳性大鼠宫颈癌增殖能力的关系。方法：20只健康雌性Wistar白化大鼠根据实验目的分为两组：对照组（异种移植时注射SiHa细胞作为对照实验,n=10）和观察组（将转染sh-M-CSF、sh-MMP9和sh-TIMP-1的SiHa细胞注射大鼠的子宫颈,n=10）。通过ELISA测定大鼠血浆M-CSF、MMP9和TIMP-1的水平。通过PCR检测实验大鼠中M-CSF、MMP9和TIMP-1的mRNA表达。使用数字游标卡尺分析大异种移植大鼠肿瘤体积生长。第3、4、5周分别处死并切除大鼠肿瘤进行称重。通过免疫组织化学分析肿瘤组织中增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、pAKT和pSTAT3的蛋白表达。通过免疫组织化学染色和TUNEL染色分别确定Ki67阳性细胞数量及凋亡细胞数量。结果：观察组较对照组M-CSF、MMP9和TIMP-1的水平降低（P<0.05）。观察组较对照组M-CSF、MMP9和TIMP-1的mRNA表达降低（P<0.05）。随着时间的增加,两组大鼠肿瘤体积均增加。1周和2周对照组和观察组大鼠肿瘤体积比较无差异（P>0.05）,第3周、第4周和第5周,观察组较对照组大鼠肿瘤体积降低（P<0.05）。观察组较对照组大鼠体内肿瘤重量减少（P<0.05）。观察组较对照组PCNA、pAKT和pSTAT3的蛋白表达量降低（P<0.05）。观察组较对照组Ki67 阳性细胞数量降低,凋亡细胞升高（P<0.05）。结论：降低血浆M-CSF、MMP2和TIMP1水平可促进HPV阳性大鼠宫颈癌细胞凋亡,有效抑制细胞增殖。