一种提取小鼠表皮总RNA的新方法

目的:建立一种从小鼠表皮组织提取高质量RNA的方法。方法:用热击法分离小鼠表皮,用TRIzol法提取RNA,用紫外分光光度计测定RNA的产率和纯度,用琼脂糖电泳和RT-PCR检测RNA的质量和完整性。结果:采用新方法提取的小鼠表皮总RNA,其D260nm/D280nm值为1.8～2.0,大于1.5,且RNA产率高于100μg/g;琼脂糖电泳出现5S、18S和28S等3条清晰的rRNA条带,而且28SrRNA条带的亮度约为18S的2倍;用新方法制备的总RNA可成功地用于RT-PCR实验。结论:采用热击法分离表皮并结合TRIzol法可提取到高质量、完整性好的小鼠表皮总RNA,并能用于相关的分子生物学实验。     

荒漠甲虫总RNA提取方法的比较与分析

目的:昆虫总RNA由于其自身结构特点,存在与动物植物完全不同的电泳条带,本文通过对比探索光滑鳖甲总RNA提取的最优方案。方法:实验采用5龄光滑鳖甲幼虫,利用TRIzol、CTAB、热酚法、及BioTeKe Kit、TianGen Kit试剂盒提取方法提取光滑鳖甲总RNA。结果:(1)所采用的实验方法提取的光滑鳖甲总RNA均呈现出与植物、哺乳动物血细胞、哺乳动物组织样总RNA不同的条带,28S弱于18S条带亮度;(2)TRIzol法、CTAB法、改进热酚法所得光滑鳖甲总RNA条带清晰、完整,D260/D280值为1.89～1.98,D260/D230值为1.94～2.09,纯度较好;(3)TRIzol法RNA提取得率为304.3～365.4μg/g,BioTeKe Kit RNA提取得率为73.38～128.22μg/g。结论:综合所有参数,所选取的方法中,TRIzol法可获得高质量、高产量的光滑鳖甲总RNA,可用于RT-PCR、文库构建等高要求RNA的提取。     

石斛总RNA提取方法的研究

采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

东亚砂藓(Rhacomitrum canescens)RNA提取方法的比较和改进

方法:以东亚砂藓为材料,用CTAB法、热硼酸盐法和改良的SDS/酸酚法提取东亚砂藓总RNA,并采用3种方法进行沉淀,从提取RNA的纯度、完整性、产量、耗时和RT-PCR效果等分析确定适用于东亚砂藓总RNA提取的方法。结果:研究表明:CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多,热硼酸法和改良的SDS/酸酚法提取RNA 28S rRNA,18S rRNA条带清晰,OD260/OD280都在1.7以上,纯度高,但热硼酸法提取出的RNA有DNA污染,RNA的含量(15.68~35.2μg.g-1)低于SDS/酸酚法提取RNA的含量(46.5~51.9μg.g-1)3种沉淀方法比较认为无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。结论:改良的SDS/酸酚法适合东亚砂藓RNA的提取。     

大青杨叶片总RNA的快速提取方法

目的:寻求快速提取大青杨叶片总RNA的方法。方法:分别用改良CTAB法、改良SDS法、改良TRIzol法及某公司总RNA提取试剂盒提取大青杨叶片总RNA,并用紫外光谱分析、凝胶电泳方法对提取的总RNA进行鉴定。结果:用改良CTAB法和改良TRIzol法能有效地去除蛋白及多糖,提取到的总RNA纯度高,D260nm/D280nm分别为2.05和1.78,RNA的完整程度优于试剂盒法。结论:改良CTAB法为大青杨叶片总RNA的最佳提取方法。     

文心兰RNA不同提取方法比较

目的:为了得到高效的文心兰RNA提取方法和高质量的RNA,为后续文心兰分子生物学研究奠定基础.方法:选取文心兰“黄金2号”(Oncidium Gower Ramsey‘Gold2’)叶片和根组织为材料,对SDS-LiCl法、改良CTAB-NaAC法和改良CTAB-LiCl法和总RNA提取效果进行了比较研究.结果:改良CTAB-LiCl法得到的RNA样品纯度较高,完整性好,经电泳检测条带清晰无明显降解,28S条带的亮度是18S条带亮度的2倍,从叶片和气生根组织中提取RNA的OD260/OD280比值分别为1.797和1.787,提取率分别为33.07μg/g、29.07μg/g.以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带.结论:改良CTAB-LiCl法是一种高效的文心兰RNA提取方法,所得样品RNA适合进一步的分子生物学研究.     

草坪草总RNA几种提取方法的比较

分别采用DEPC水法、TRIzol法、CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法以及异硫氰酸胍法等6种方法提取草坪草总RNA,通过检测对各种方法的提取效果进行比较分析。结果表明,DEPC水法是最经济、操作最简单的一种方法,并且提取的RNA质量较好、可靠性高、易于大量制备,是提取草坪草RNA比较理想的方法之一,建议使用该方法。利用TRIzol法提取到的28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,效果较好,操作简单,符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法也获得较高质量的RNA,但存在不同程度的DNA污染。异硫氰酸胍法提取RNA有明显的蛋白质污染,且RNA部分降解,此种方法不予采用。     

台东苏铁中RNA不同提取方法的比较

苏铁作为古老的裸子植物,对种子植物的起源与演化、遗传多样性与亲缘关系等研究具有重要意义。由于苏铁中含有大量多糖、多酚等次级代谢产物,会以不同形式干扰RNA的提取,而高质量的RNA对分子生物学等研究至关重要。因此,通过异硫氰酸胍法、CTBA法和试剂盒法分别提取台东苏铁的RNA,最终采用改良的异硫氰酸胍法提取台东苏铁总RNA方法效果较好,获得的RNA条带边缘清晰,而且28S RNA条带是18S RNA条带亮度的2倍,A260/A280比值在2.0左右。     

几种提取木本植物中RNA方法的比较和改进

以胡杨、核桃和白梨的叶片和根为试材 ,以常用的Trizol法、改良的植物RNA提取法和热硼酸盐法 ,比较其提取总RNA的量和纯度。结果表明 ,热硼酸盐法效果最好。研磨样品时加入多聚聚乙烯吡咯烷酮 (PVPP) ,可有效地吸附色素类物质 ;纯化过程中沉降RNA时间调整为 1h ,整个提取时间可缩短至 2d。     

一种有效的花瓣总RNA的提取方法

利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9~2.0,A260/A230比值约为2.0;电泳检测到了28S、18S和5S rRNA清晰的条带;通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明分离的总RNA能去除色素干扰,纯度和反转录活性较高符合RNA相关实验的要求,是一种经济、有效的花瓣总RNA的提取方法。     

应用非伤害性取样提取番鸭毛囊组织总RNA

目的:寻求一种从番鸭毛囊组织中高效提取总RNA的方法。方法:探讨了伤害性取样(剪切皮肤毛囊)、非伤害性取样(直接拔取毛囊)2种不同毛囊取样法对总RNA提取质量的影响,并对常用RNA提取方法TRIzol法中研磨和组织匀浆步骤细节稍加改进,琼脂糖电泳检测总RNA质量。结果:2种毛囊取样方法均能提取出高质量的总RNA,其28S、18S和5S条带清晰可见,无DNA污染。结论:非伤害性取样法可作为番鸭毛囊组织总RNA提取的适用取样方法。     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。     

抗风湿新药白芍总甙的工艺研究

从白芍中提得的抗风湿性活性组分——白芍总甙(TGP)为新的临床推广用药,本文对其生产工艺进行了改进,简述了采用的新的方法和程序,使TGP得率由原有的3％提高到大于5％,成本大大降低,有利于该产品的大量生产及其广泛使用。     

芍药花粉活力和柱头可授性的研究

用TTC法测定了芍药花粉的活力和寿命,用联苯胺—过氧化氢法测定了其柱头的可授期。结果表明,栽培芍药单瓣花植株的花粉活力和重瓣花植株的花粉活力在开花初期(1～2d)无明显差别,但重瓣花植株的花粉活力比单瓣花植株的花粉活力下降快;通常情况下,花粉寿命约为7d。栽培品种的柱头有个体差异,单瓣花植株有的开花后2h即可分泌粘液,而重瓣花植株的柱头在开花后,有的一直不分泌粘液,有的在开花后两天才分泌粘液;单瓣花植株的柱头可授性比重瓣花植株的强,一般分别在开花后6d和3d之内具可授性。移栽的野生芍药植株的花粉活力比栽培品种下降的慢,其寿命也较长,一般为15d;柱头的可授性和粘液分泌比栽培植株强。     

传统中药白芍原植物分类鉴定及根形态解剖研究

对我国主产地的白芍(Radix Paeonia alba)原植物10个居群进行调查及标本采集,植物鉴定结果为：川白芍原植物粉红花居群为原变种芍药Paeonia lactiflora Pall,白花居群为芍药变种毛果芍药P.lactiflora var.trichocarpa(Bunge)Stern;毫白芍原植物线条居群和蒲棒居群均为芍药;杭白芍原植物红花、白花、粉红花居群均为毛果芍药;陕西韩城、江苏东海、山东荷泽白芍均为芍药,各居群在花色及形态上有明显而稳定的变异。根横切面解剖结构显示,按木质部的排列方式可将白芍原植物10个居群分为两大类：第一类为有呈两个不相连的扇形中央导管群,并且有狭长、具分枝的从形成层到根中央部分连续排列的木质部,基本上是原植物芍药的植物特征,其中毫白芍线条居群兼有毛果芍药和芍药的特征;第二类为具有不明显的根中央扇形导管束,导管束呈环状围绕中央排列,并且有粗短不分枝的靠近形成层处成群的导管,与原植物毛果芍药的特征基本一致,其中杭白芍红花居群与川白芍白花居群根中央导管群呈现较明显的2个分离扇形排列,类似芍药。白芍原植物的种分类定位与花色无密切关联,但由于性状的稳定,可以考虑作为变种或变型定位。     

何首乌总RNA提取方法的比较及改进

目的：探讨不同提取方法对提取何首乌总RNA的质量影响,寻找适于何首乌成熟叶组织RNA的提取方法。方法：以何首乌成熟叶组织为材料,采用SDS／酸酚法、常规CTAB法及改良的TRIzol试剂法分别进行实验,并对所提取RNA的质量进行验证。结果：采用3种方法都能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的TRIzol试剂法能有效抑制次生物质的影响,提取的RNA产量可达70-110μg／g,纯度高于其他2种方法,D260nm／D280nm值为1．85～1．97。结论：改良的TRIzol试剂法操作简便,提取的RNA完整性和纯度较高,可以满足下一步实验的要求。     

白芍中丹皮酚、芍药苷和苯甲酸的反相薄层色谱分析

建立了对白芍中丹皮酚、芍药苷和苯甲酸同时进行反相薄层色谱分析的新方法。以RP－C18F254S高效反相薄层板,选择了合适的溶剂体系：四氢呋喃／水46／54（0.1%的四丁基溴化铵）,展距仅4.5cm,薄层扫描分析三者。结果准确,重现性好。