利用基因芯片技术检测P53基因突变

基因芯片技术是后基因组时代基因功能分析的最重要技术之一。利用基因芯片技术检测P53基因突变,具有快速、准确、高通量和自动化的特点。本文阐述了基因芯片技术的基本原理及其检测P53基因突变的方法。     

大肠癌P21,P53蛋白表达和k—ras基因,P53基因突变研究

用免疫组化技术和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜及大肠腺癌型息肉的Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达和ｋ－ｒａｓ基因、Ｐ５３基因突变进行检测。结果,大肠腺癌Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达比大肠腺瘤增多,但增加不显著（Ｐ〉０．０５）,二组均比癌旁粘膜和正常粘膜Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达阳性率高（Ｐ〈０．０１）,大肠腺癌ｋ－ｒａｓ基因和Ｐ５３基因突变率比大肠腺瘤、癌旁粘膜和正常粘膜组显著增加     

P53基因的生化功能和失活机理

本综述了肿瘤抑制基因Ｐ５３研究的最新进展。Ｐ５３基因产物具有反式激活作用,能与特异ＤＮＡ顺序结合,可能参与负调控细胞生长。Ｐ５３的失活作用有多种途径,是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基础。     

P53基因研究新进展

肿瘤抑制基因在肿瘤发生过程中有重要作用,其中P53基因最引现人注目,P53基因的突变与人类一半以上的肿瘤发生相关,P53基因参与细胞生长的负调控,研究发生P53基因编码的P53蛋白可通过调控Cipl基因表达而调控细胞生长,即P53蛋白可刺激Cipl基因产生分子量为21kD的蛋白,这种蛋白能够有效抑制某些促使细胞通过细胞周期进入有丝分裂的酶活性,从而抑制细胞生长,这就解释了为什么正常的P53基因的缺失可导致细胞的无限生长,此外,P53基因与DNA损伤药物诱导的细胞凋亡有关,与非DNA损伤药物诱导的细胞调亡无关。     

P53基因与肺癌

Ｐ５３基因是一种抗癌基因,它具有抑制肿瘤细胞生长的活性。它的失活与多种肿瘤的发生有关。本介绍了Ｐ５３基因与肺癌发生的关系,并对Ｐ５３基因在肺癌的临床诊断及治疗的应用前景进行了综述。     

基因芯片技术检测拉美夫定相关的HBV变异

美夫定(Lamivudine)是新一代核苷类似物,能够迅速降低慢性乙型肝炎病人的血清HBV DNA水平,但是Lamivudine治疗12个月后,14%～39%的患者都会出现抗药性[1～3],病情会有反复,用药不再有效.已有的研究表明,通过检测患者血液中的病毒突变情况,轮流使用干扰素,Lamivedine,FamcicLovir丙种球蛋白等,可以得到很好的治疗效果[4].本研究中,我们采用拉美夫定耐药位点基因芯片,对44例慢性乙型肝炎病人进行了HBV突变检测,并应用传统的DNA测序的方法进行验证,结果报告如下.     

P53肿瘤抑制基因的研究与进展

Ｐ５３肿瘤抑制基因的研究与进展徐清,汤雪明（上海第二医科大学细胞生物学实验室２０００２５）Ｐ５３基因是目前癌基因和抑癌基因研究中最引人注目的新星。１９８１年Ｗｅｉｎｂｅｒｙ等人首先报道人癌基因分离成功,癌基因的研究成为肿瘤研究的热点“’１１９８６年人...     

P53家族新成员——P73基因

Ｐ5 3基因的突变 ,失活及缺失与 5 0 %的人类肿瘤发生有关 .最近 ,又发现一新“Ｐ5 3样”抑癌基因Ｐ73,定位于1ｐ36 2 1ｐ36 3,由 13个外显子及 12个内含子组成 ,该基因编码的蛋白质在结构和功能上均与 ｐ5 3蛋白相似 .Ｐ73基因转录剪切可产生多种同种型 ｐ73蛋白α ,β,γ及δ .ｐ73α,β低水平表达具广泛性 ;在外周血淋巴细胞、原始角质细胞及不同肿瘤细胞株和白血病中可检测到 ｐ73γ及δ .正常人类组织中 ｐ73低表达 ,很多肿瘤细胞却高表达 ｐ73,研究表明对于癌变细胞最普遍的是 ｐ73的过表达而不是丢失 :ｐ73蛋白过表达发生在胸腺癌…     

基因芯片技术检测拉美夫定相关的HBV变异

In order to study the feasibility of gene chips technology in the detection of HBV mutation associated with lamivudine, we detected the mutation of HBV in peripheral blood of 30 patients treated with lamivudine for at least half a year by gene chips. The result was compared with that from direct sequencing. Both results are highly coincident. The rate reaches 100% while detecting single strain of virus infection, and 85% in multi-strains virus infection. Gene chip technology is quite valuable and practical in future clinic.     

人胃癌细胞系中P53抑癌基因变异的检测及其序列分析

Ｐ５３抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应－－单链构锡多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,对四种人胃癌细胞系ＭＧＣ８０３,ＢＧＣ８２３,ＧＣ７９０１和ＰＡＭＣ－８２中Ｐ５３基因的第５、６、７、８四个外显子进行检测,结果发现,ＰＡＭＣ－８２的第５第第８外显子,ＧＣ７９０１的第６外显子存在突变,ＰＣＲ－直接测序证明,它们分别在１７４位、２     

利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤

ＤＮＡ损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）置于ＳＶ４０基本启动子调控下,构建成对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ。在ＳＶ４０基本启动子上游插入寡核苷酸Ｐ５３ＲＥ,构建成示踪载体ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ。转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,以ＧＦＰ示踪细胞内源性Ｐ５３的转录激活活性。紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理转化细胞使ＤＮＡ损伤,诱导细胞内源性Ｐ５３的表达。用激光扫描共聚焦成像系统（ＬＳＣＩＳ）对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定ＧＦＰ经４８８ｎｍ激发后发出的绿色荧光光密度,验证ＧＦＰ示踪Ｐ５３的特异性。ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＲＥＧ经紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理后,ＧＦＰ的表达增高,处理后１ｈｒ光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非ＤＮＡ损伤处理的３Ｔ３－ＲＥＧ细胞,以及经紫外和Ｈ２Ｏ２处理的对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＳＶＧ,ＧＦＰ的表达无明显增强。实验表明：ＧＦＰ示踪内源性Ｐ５３转录激活活性用于检测ＤＮＡ损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。     

应用基因芯片技术检测非综合征型耳聋基因突变

目的:应用遗传性耳聋基因芯片对散发性聋患者进行分子病因学检测,评估其在遗传性耳聋快速基因诊断中的可靠性。方法:门诊收集散发性聋患者10例,取外周血,提取基因组DNA,用遗传性耳聋基因芯片检测4个中国人中常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2(35delG、176del16bp、235delC及299delAT)、GJB3(C538T)、SLC26A4(IVS7-2AG、A2168G)和线粒体DNA 12S rRNA(A1555G、C1494T)。同时,PCR扩增GJB2、线粒体12S rRNA基因全序列,DNA测序,以验证基因芯片检测结果的准确性。结果:在10名耳聋患者中,基因芯片方法检出1例携带线粒体DNA 12S rRNA C1494T突变;2例GJB2基因235delC纯合突变;2例235delC杂合突变;SLC26A4基因和GJB3基因未检出突变。基因芯片的结果与测序结果完全一致。结论:遗传性耳聋基因芯片技术对中国人常见耳聋相关基因热点突变的检出率高,结果准确、可靠,具有快速、高通量、高准确性、低成本等特点,能够满足临床耳聋基因检测的要求,同时结合产前诊断技术能有效预防耳聋患儿的出生,因而具有广阔的临床应用前景。     

P53基因PCR-SSCP银染检查痰标本诊断肺癌初步探索

目的：为了解痰标本检测肺癌患者Ｐ５３基因突变的可行性及其对临床诊断的意义。材料与方法：采用改良Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法浓缩及保存痰标本,部分涂片找癌细胞,其余标本进行痰细胞ＤＮＡ提取及多聚酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）共检测２２例病人,其中确诊肺癌病人１５例（涂片或活检找到癌细胞）、临床高度怀疑肺癌病人５例（涂片或活检均阴性）、２例非肿瘤病人（１例为结节病,另１为左中叶肺炎）,同     

P53基因在肿瘤治疗中的应用

近年来研究表明,P53基因是一个抑癌基因。同时,P53还是一个重要的转录因子,它在细胞周期调控,抑制细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡等方面起着至关重要的作用。P53的结构功能和性质有了较全面的认识,但其作用机理仍不清楚。本文主要就P53在肿瘤治疗中的作用机理的现状作一简要概述。     

脑胶质瘤中P53基因突变及其与染色体17p杂合性丢失的比较

为进一步阐明P53基因突变和染色体17p杂合性丢失(LOH)的关系及两者与脑胶质瘤发生发展的相关性。应用PCR－SSCP、DNA序列测定及RFLP分析方法对55例脑胶质瘤中的P53基因突变及染色体17p的杂合性丢失进行了检测。发现P53基因在高级别星型细胞肿瘤(III－IV级)、低级别星型细胞肿瘤(I－II级)和非星型细胞肿瘤中的突变频率分别为：53％(9/17)、7％(1/15)和9％(2/23)。而55例肿瘤组织对应的淋巴细胞中未见P53突变。22％的胶质瘤丢失1个17p等位基因,这部分肿瘤中P53基因的突变频率为50％(6/12),而在43例持有2个17p等位基因的肿瘤中,P53基因的突变频率降为14％,两组相比差异显著(P<0?025)。结果提示P53基因突变是星型细胞肿瘤演变过程中的一个常见遗传事件,可能标志着肿瘤的恶性进展;散发性脑胶质瘤中的P53突变是体细胞型的突变;另外,丢失1个17p等位基因的肿瘤中有50％缺少P53基因突变,提示染色体17p上可能存在另一个参与了部分肿瘤恶性演变的肿瘤抑制基因。 Abstract：To further illustrate the roles of P53 gene and loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 17p in the development of malignant gliomas,mutations in the P53 gene were analyzed in 55 gliomas of various malignant grades and histological types by the polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) technique and were confirmed by sequencing.Loss of heterozygosity (LOH) for chromosome 17p was also assessed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis in same tumors.The mutations did not follow a random distribution among various different subtypes,but occurred in 9 of 17 high-grade astrocytomas (53％),in 1 of 15 low-grade astrocytomas (7％) and in 2of 23 (9％) non-astrocytic tumors.Most of the mutations were missense ones and 42％ (5/12) occurred at the sites of CpG dinucleotide.P53 mutations were not detected in any of the 55 leukocyte DNA samples from patients with brain tumors.These studies demonstrated that P53 inactivation is a common genetic event in astrocytoma progression that may signal the transition from benign to malignant tumor stages.P53 gene mutations in sporadic human brain tumors are somatic in origin (i.e.,nonprenatally determined).The majority of glomas (43/55) analyzed here retained both 17p alleles.The frequency of P53 mutations was 14％ in this group of tumors and increased to 50％ (6/12) in tumors with one 17p allele (P<0.025).Allelic loss for chromosome 17p occurred in 6 of 12 gliomas independently of mutations in the P53 gene.Absence of P53 mutations in 50％ of the tumors with one allele suggests that a tumor suppressor gene other than P53 may be located on chromosome 17p and involved in progression to malignancy of some gliomas.     

骨肉瘤中P53及P21WAF1表达的生物学意义

应用免疫组化SP法观察34例骨肉瘤中P53及P21WAF1的表达情况,探讨P53及P21WAF1表达与骨肉瘸临床病理学特征之间的关系,分析P53和P21WAF1在骨肉瘤中的作用及其相关性。结果可见,在34例骨肉瘤中,18例表达P53,阳性表达率52.94%;12例表达P21WAF1,阳性表达率35.29%。P53阳性表达与性别、肿瘤分化及是否转移复发有关(P<0.05),P21WAF1与肿瘤分化有关(P<0.01)。P53在中、低分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在高分化骨肉瘤中阳性表达率较低(70%、28.57%);P21WAF1在高分化骨肉瘤中阳性表达率较高,而在中、低分化骨肉瘤阳性表达率较低(85.71%、0%)。P53及P21WAF1表达呈负相关性(r=-0.537,P=0.001)。在骨肉瘤组织中P53表达上调及P21WAF1表达下调与骨肉瘤的恶性进展有关。     

基因芯片技术

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上,借助核酸分子杂交配对的特性对ＤＮＡ样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于基因表达谱的分析、突变检测、多态性分析、基因测序和基因组文库作图等研究工作,同时有人类疾病的检测、预防等方面也具有广阔的潜在应用价值,在未来的生命科学领域中必须发挥重要的作用。