研发动态

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下"荧光猪崽" 我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪日前成功产下11头小猪,其中2头具有绿色荧光遗传特征.这次试验的成功标志着中国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟.     

一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略

同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于"双荧光"的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,"双荧光"策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的"双荧光"可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景。     

横断山区旌节花科、安息香科、忍冬科新分类群

西藏:察隅,青藏队82-10784。云南:丽江,植物所横断山队81-2512;维西,青藏队82-6668;贡山,青藏队82-9791;中甸,中甸队62-1531。四川:渡口,青藏队83-11395;木里,青藏队83-13301;盐源,青藏队83-12067。生云南松、云杉林、落叶阔叶林、常绿阔叶林及山坡灌丛中,海拔1900—3200米。 分布:西藏东南部、云南西北部、四川西南部、贵州(安龙、册亨)。     

长腿盲蛛在直播

<正>Q:盲蛛,我爱你。我想知道你的外号——"长腿爸爸"是怎么来的?A:因为我的腿长,所队在英文中被俗称为daddy longlegs,翻译成中文就是"长腿爸爸"。如果你想叫我"长腿叔叔""长腿哥哥""长腿弟弟"……也行。Q:请问你的腿到底有多长?A:其实,我的足距(两脚之间的距离)一般只有10厘米左右。因为我的身体比较小,体长通常不超过5毫米,所队显得腿很长。根据人类掌握的数据,目前已知的盲蛛足距世界纪录是34厘米。(?)你真是太谦虚了,我要是有那么长的腿,一     

我参加了1976年的禄丰野外发掘

<正>1976年是个多事之秋,三大伟人相继去世、唐山发生7.8级特大地震。前一年根据当时的"斗批改"形势提出科研室要"掺砂子",我们这些从部队转业被分配在技术室作为工人编制的人员进了研究室。我原是技术室的负责人之一,到了人类室仍被安排到室领导小组。进禄丰队当队长完全是一种巧合。1975年由徐庆华、陆庆五、彭春等同志组成的发掘队在禄丰石灰坝发现了一具古猿下颌,在中国古人类学界掀起了一次不小的波澜。由于在1975年的野外     

利用转座质粒plasposon构建荧光标记的脱色希瓦氏菌S12

采用分子生物学手段将具有转座功能的自杀性质粒pTnMod-okm与荧光蛋白基因eyfp构建重组质粒pTE-okm。pTE-okm通过结合转移进入脱色希瓦氏菌S12中,质粒上的转座子元件转座到S12的染色体上,而质粒本身的窄宿主复制位点使其在S12中不能得到有效的复制而"自杀"。荧光显微镜下筛选表达荧光蛋白的脱色希瓦氏菌克隆,通过对其提取质粒确定pTE-okm已经在脱色希瓦氏菌中自杀。筛选得到生长速度未发生延迟、脱色能力不受影响的荧光标记菌株S12-40。标记的脱色希瓦氏菌在无抗生素压力的情况下培养,传代20次(8h/次)后在荧光显微镜下依然查看到荧光蛋白的表达。该菌株的构建为研究其生态学行为奠定了基础。     

动物也能玩转工具

许多人认为,能否制造并使用工具是人与动物的主要区别!要是知道人和动物可以如此区区分,有一群动物一定会笑岔了气。它们不仅个个是使用工具的高手,还根据出身分成两个阵营——由灵长类动物组成的"类人队"和囊括海陆空能手的"综合队",准备好好切磋一下技艺。     

转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究

旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持。根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测。结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%。建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持。     

VBNC细菌荧光观察技术问题分析及对策

以SYTO-9和PI两种荧光染料对细菌进行核染,以市售的黑色钢笔墨水替代伊拉克黑,利用手动压片方式对标本进行固定,自建一种"活的非可培养状态"(VBNC)细菌荧光显微镜观察技术。通过总结分析该项技术方法在应用过程中所出现的问题,如存在背景荧光、菌体聚集、荧光图像模糊、滤膜吸附能力差、菌体形态不鲜明、菌体荧光减淡等,并提出相应的解决策略,旨在给予相关研究者以帮助和启迪。     

非调制式荧光仪PEA测定叶绿素荧光参数的研究

为了利用非调制式荧光仪获得调制式荧光仪测定的叶绿素荧光动力学参数,采用植物效率(PEA)仪进行了叶绿素荧光参数测定程式的4要素(光化光强度及其照射时间、饱和激发光强度及其照射时间)以及节约测定时间和仪器内存的测定技术研究。结果表明,暗适应10min后,在设定180μmol·m-2·s-1光化光照射360s时间内,以连续2次1950μmol·m-2·s-1饱和激发光照射3s的测定程式,在7种植物的叶绿素荧光参数的测定中获得了较为满意的测定结果,而且与Strasser等测定程式相比,1次测定需时从600s缩短为360s、耗用仪器内存从76.9"减少为2.56"。     

实时荧光PCR技术定量检测转Bt基因水稻的研究

以转Bt基因的"克螟稻"为研究材料,通过使用特异的引物和荧光标记探针,以已知转基因成份含量的水稻样品为模板建立标准曲线,对转基因水稻的NOS和Bt外源基因进行了荧光定量检测分析.初步建立了转基因水稻定量检测的技术方法.     

草场上没有了羊群

<正>这里的羊已全部被淘汰,只因为牛羊争水,每天都有几只羊被顶死拜访才代的翌日,我们来到了采日玛乡的麦果尔大队,村干部告诉我们,这个大队的8个队中有5个队严重缺水,麦果尔3队更是个出了名的缺水队,在他们那片远离河流的贫瘠草场上,牧民们为了适应极端缺水的环境,甚至改变了畜群的类型,把队上所有的羊都淘汰了。     

结核分枝杆菌体外休眠模型的建立

目的:模拟结核分枝杆菌体内缺氧和微营养的生长环境建立其休眠模型。方法:将牛分枝杆菌卡介苗野生株BCG菌株在"微需氧+pH5.0+10%Dubos"的条件下培养,以菌株生长停滞,菌体表面脂质体增厚为休眠标准进行鉴定。取不同时间菌株测定600 nm下的吸光度(A)值绘制生长曲线,同时进行金胺O-尼罗红(Auramin-O,Nile Red)双荧光染色和实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR,qRT-PCR)检测休眠相关基因的表达量,确定菌株进入休眠状态。结果:在休眠条件培养过程中,BCG菌株的生长速度与常规条件培养菌株相比明显减慢(P0.01),并且在休眠条件培养中第10、14和18天细菌生长基本接近停滞状态(P0.01);同时金胺O荧光染色显示绿色荧光减弱,尼罗红红色荧光增强;休眠相关基因hspX、devR表达量逐渐上调,且培养第18天菌株明显高于第0天培养菌株(P0.05)。结论:应用"微需氧+p H5.0+10%Dubos"条件培养,以金胺O-尼罗红染色和devR表达为标准,可以成功建立结核分枝杆菌休眠模型。     

小偃6号背景下黑麦遗传物质的荧光原位杂交分析

利用普通小麦(Triticum aesttvum L.)"小偃6号"与黑麦(Secale cereale L.)品种"德国白粒"杂交,选育出"小偃6号"类型带有黑麦性状的种质材料.应用总基因组原位杂交(GISH)进行检测,在8份材料中探测到黑麦染色质的存在,其中附加系3个,代换系1个,易位系4个;进一步用荧光绿标记探针pScll9.2及荧光红标记探针pAsl的双色荧光原位杂交(FISH)技术,对其中部分品系的染色体组成进行分析鉴定,结果表明:易位系BCll6-1是1RS/1BL小麦/黑麦易位系,BCl52-l是涉及一条lB染色体的1RS/1BL易位系,代换系BC97-2是2R(2D)二体代换系;附加系BCl22-3附加了一条6R黑麦染色体,一条6B染色体的长臂缺失.同时,对连续的总基因组原位杂交和双色荧光原位杂交技术在小麦育种中的应用进行了讨论.     

He-Ne激光和增强UV-B辐射对小麦幼苗叶绿素荧光特性的影响

选用"ML7113"小麦幼苗为材料,分别采用He-Ne激光(5mW·mm-2)和增强UV-B(10.8 kJ/m-2·d-1)辐射以及两者的复合辐照进行处理,利用PAM-2100便携式叶绿素荧光仪测定小麦幼苗在不同处理天数(5、6、7、8)下叶绿素荧光特性的变化。结果表明:增强UV-B辐射后,随着处理时间的延长,小麦幼苗的Fo、Fm、Fv/Fm、qP、ФPSⅡ、叶绿素含量的值均逐渐下降,qN值均逐渐升高,从而不断减弱小麦幼苗的叶绿体荧光特性;而低剂量的He-Ne激光辐照后能够在一定程度上修复经UV-B辐射后对小麦幼苗叶绿素荧光所造成的损伤。     

EGFP-LacZ双报告基因真核表达载体的构建及体外表达

构建(β-半乳糖苷酶与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双报告基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达。采用PCR方法从质粒pLenti6/V5-GW/LacZ 中获取LacZ全基因,与pEGFP-C1重组后构建真核表达载体pEGFP-C1-LacZ。该重组质粒经PCR和酶切方法鉴定后,在脂质体介导下转染293FT细胞株及鸡胚成纤维细胞,通过荧光观察和组织化学方法检测Egfp和LacZ基因的表达。结果表明,LacZ基因被克隆到pEGFP-C1,成功构建了双报告基因真核表达载体。该重组质粒转染后的细胞呈现绿色荧光,组织化学方法检测到呈蓝色的细胞,表明两个报告基因均能在细胞内正确表达。     

水稻双受精过程的共聚焦显微镜观察

(郑州大学离子束生物工程省重点实验室,郑州450052)摘要:首次利用核特异荧光染色与整体透明技术并利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)对水稻双受精过程进行了观察。激光扫描共聚焦显微镜具有"组织与细胞CT"的功能,可以对整体组织进行扫描并构建三维结构。经荧光染色及透明处理后,在激光扫描共聚焦显微镜下经488nm激光激发,胚囊内各细胞的细胞核以及核仁发出明亮荧光,细胞核轮廓比较清晰,层次感强,并能清晰观察到胚囊内各细胞的结构特点和空间位置关系。不论是对开花前较小的成熟胚囊材料还是开花后较大的胚囊材料都取得了较好的观察效果。同传统的光学显微镜和荧光显微镜相比,其观察到的图像更清晰、更直观、更具立体感。     

应用改进的通用荧光PCR引物进行多重STR分型

通过设计通用荧光PCR引物并结合DNA测序系统建立了小鼠的多重STR分型方案.实验针对小鼠基因组设计了两对不同的通用引物序列,标记了FAM荧光的通用序列和"加尾"的位点特异性引物共同用于小鼠的多重PCR的STR基因分型.本研究优化了通用引物和特异性引物间的比例,优化了多重STR-PCR的反应条件,并最终利用该技术方案实现了五重STR分型.实验验证了该方案在多重STR分型中的可行性.与传统的荧光检测PCR产物方案相比,应用通用方案完成多重PCR反应大大节省了实验时间与经费.     

安徽来安始新统一剖面及哺乳动物化石

1974年10月,安徽省地质局区域地质调查队二分队和中国科学院古脊椎动物与古人类研究所的一个野外队共同调查了安徽省来安县舜山集-张山集一带的新生代地层,并在王家港南面的一个小山丘上找到了哺乳动物化石。据此并参照当地的地层情况,安徽区域地质调查队二分队将来安北面的下第三系划分为下伏的古新统舜山集组和上覆的始新统张山集组。     

L-periaxin与Ezrin的N端FERM结构域结合依赖其第3段核定位信号序列北大核心CSCD

L-periaxin是外周神经系统特异表达的骨架蛋白之一,占外周神经系统髓鞘总蛋白质的16%,参与髓鞘形成和维护。埃兹蛋白(Ezrin)属于Ezrin-Radxin-Moesin(ERM)蛋白质家族,与细胞黏附、迁移、生存以及肿瘤的发生、发展相关。作者前期研究证实,L-periaxin与Ezrin通过"头对头,尾对尾"的模式相互结合。本文通过双分子荧光互补、免疫共沉淀、GST pull down、荧光共定位、海肾荧光素酶互补、荧光光谱以及分子对接等方法,揭示L-periaxin的核定位信号区(nuclear location signal,NLS)与蛋白质Ezrin的FERM(Ezrin Radixin Moesin)结构域的"头对头"相互结合,依赖Lperiaxin第3段核定位信号序列NLS3与Ezrin的FERM结构域的F3亚结构域。本结果为进一步理解Ezrin在髓鞘化过程中的作用,以及阐明调节L-periaxin蛋白功能的信号通路奠定基础。