快中子辐射处理卡那霉素产生菌

快中子辐射用于抗生素产生菌的诱变育种已有报道。我们在北京辐射中心的协作下,从1976年开始,用400千电子伏高压倍加器产生的14MEV快中子,处理卡那霉素产生菌,获得一些高产菌株。本文报道这方面的试验结果。     

卡那霉素产生菌Kp958-4菌株中与抗菌素产生有关的质粒转化

当把质粒消除株Ko42-7作为受体菌株,把产生卡那霉素产生菌Kp958-4作为供体菌株进行DNA转化时,获得了具有产生卡那霉素和形成孢子能力的转化子Ko-p77。Ko-p77与Kp958-4的抗菌谱和所用六种溶剂系统中的Rf值相似。这表明,S.kanamyceticus菌株间的质粒DNA可以进行转化。     

卡那霉素产生菌26号的获得

在卡那霉素产生菌育种过程中,结合自然选育先后用过激光、快中子、紫外线钴60、氯化锂、亚硝基胍、亚硝酸钠以及中草药半枝莲等。多次实践后,发现紫外线在卡那霉素产生菌育种过程中效果较好。优点是操作简单,菌落外观形态差异明显,易于针对不同的形态进行挑选。1978年底,我们利用紫外线和自然分离间歇处理,获得变异菌株26号大缶生产六十批,平均单位5,218r/ml,提高351     

卡那霉素产生菌抗噬菌体菌株的选育

在微生物工业生产中,经常会出现噬菌体的危害。在抗菌素生产方面,自1947年首先报道链霉素发酵受噬菌休侵染以后,又发现其它抗菌素如金霉素、氯霉素、红霉素、土霉素、万古霉素的发酵也遭受到噬菌体的侵袭。     

庆大霉素产生菌质粒DNA的分离和鉴定

本文首次报道从庆大霉素产生菌——棘孢小单孢菌绛红变种As 4.890中分离得到了质粒,经电泳检测和电镜观察证实,存在共价闭合超盘旋和开环两种分子构型,分子量约为4.4Md(6.8kb),此质粒被命名为pME1。高温消除质粒获得的突变株(4.890-1)与原株(As 4.890)比较,两者在产生庆大霉素及其3个主要组份(c_1、c_2、c_(?))方面未发现差异,但在孢子层和基丝的颜色上有明显的差异。As 4.890孢子层黑色、丰满,基丝橙色,稀少。4.890-1孢子层棕色、稀疏,基丝橙色、丰满。上述结果表明,质粒pME1与庆大霉素的生物合成可能没有关系,但在As 4.890中,与孢子层、基丝的颜色有关的某些基因可能位于此质粒上。     

质粒在红霉素产生菌NRRL 2338中的可能作用

用溴化乙啶或吖啶橙等诱变剂处理红霉素产生菌Str. Erythreus NRRL 2338原株得到了八株无活性变株,运用在固体或液体培养基上共合成的方法,对它们在红霉素生物合成的阻断部位进行了分类,对这些变株所积累的中间物,用薄层层析的方法进行了分析研究,发现有一株变株失去了质粒,不产生气生菌丝及孢子,对红霉素敏感,对这些变株的遗传学及质粒特征的研究表明,质粒可能参与红霉菌的孢于形成及色素产生,并可能与红霉素生物合成的某些阶段有关。     

创新霉素产生菌中质粒的研究——Ⅳ.AJP1质粒的物理图谱

用MAK法提纯创新霉素产生菌——济南游动放线菌中天然质粒AJP1,并对其进行了酶解分析。实验表明,限制性内切酶BamHⅠ、BglⅡ、HindⅢ、KpnⅠ、SstⅠ和HpaⅠ不能降解AJP1,XhoⅠ、PsiⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ、PvuⅠ、SinaⅠ和SalⅠ在AJP1上分别有1、1、1、2、3、5,和7个切点。应用双酶解等方法进行酶切位点的定位,绘制了共有20个酶切位点的AJP1物理图谱。     

链霉素产生菌——灰色链霉菌质粒的分离和电镜观察

本工作首次从具有临床应用价值的抗菌素产生菌——灰色链霉菌中分离得到质粒DNA(SGP1),并经电镜观察证实。用琼脂糖凝胶电泳分析,初步证明灰色链霉菌和天蓝色链霉菌质粒DNA分子大小相似,限制性内切酶Eco R1对灰色链霉菌质粒DNA可能只有一个切口。电镜观察表明灰色链霉菌质粒DNA具有共价闭合超盘旋环状和开放形环状两种构型,根据经验公式计算,灰色链霉菌质粒DNA分子量为1．9x107道尔顿左右。经紫外分光光度计测定灰色链霉菌质粒DNA解链温度(Tm值)为80．8u℃ G—C克分子百分数为76．8％。我们所获得的灰色链霉菌质粒DNA(SGP1)是否即是前文报道的[10]经高温消除,并与链霉素生物合成有关的质粒,则尚待进一步证实。     

链霉素产生菌——灰色链霉菌质粒的分离和电镜观察

链霉素产生菌——灰色链霉菌(Streptomyces griseus)No.45经36℃处理后,获得了气生菌丝生长受抑制的突变体,这些高温突变体全部丧失了合成链霉素的能力。从遗传学上验证表明:灰色链霉菌中分离得到质粒DNA(SGPI),并用电镜进行了观察证实。     

质粒消除对冠菌素产生菌T1828生物学效应的影响

采用十二烷基硫酸钠（SDS）和提高生长温度结合法消除T1828菌株质粒后,筛选到无质粒突变株ZWL-15。以原始亲株T1828和无质粒突变株ZWL-15为出发菌株,考察了两者部分生物学特性。结果表明,菌株ZWL．15生长速率快于T1828,进入对数期和稳定期的时间分别提前1h和4h。在菌株ZWL-15发酵过程中添加0．01％的SDS有利于冠菌素的合成,最适发酵温度比T1828升高5℃,达到35℃,发酵周期提前4h,COR相对值是T1828的两倍左右。ZWL-15传代实验表明该突变株很稳定,且对氨苄青霉素敏感,氨苄青霉素基因初步定位于该菌属质粒上。     

氨基酸产生菌E_(65)中质粒的分离与鉴定

在棒杆菌与短杆菌中,用微量质粒分离方法筛选到一株含多种质粒的乙酰短杆菌(Brevibacterium actylicum)E_(65)菌株,该菌株具有产氨基酸特性。进一步大量制备其质粒DNA,并进行氧化绝密度梯度超离心纯化,以及电泳分析,电镜观察,并对质粒进行分离与鉴定,从而确定了每种质粒的分子量大小。     

志贺菌的质粒图谱分析

目的：分析志贺菌的质粒图谱及其与细菌药物敏感性的相关性。方法：从菌痢患者粪便标本中分离6株福氏志贺菌和4株宋内志贺菌,分别对其质粒图谱及药物敏感性进行分析。结果：不同菌株的质粒图谱具有明显的差异,但福氏志贺菌的5株以及宋内志贺菌的3株具有分子量23Kb的质粒带。各菌株的质粒图谱与其对头孢三嗪,头孢唑啉,环丙沙星,诺氟沙星,氯霉素的耐药特性无明显相关性。结论：获自患者的福氏志贺菌和宋内志贺菌具有不同的质粒图谱以及抗菌药物敏感性,提示在我市引起菌痢的志贺菌具有不同的来源。     

麦迪霉素产生菌生米卡链霉菌1748的质粒Psmyi及其特性的研究

从大环内酯类抗生索麦迪霉素的产生菌生米卡链霉菌1748(Streptomyces,mycarofa-ciens1748)中首次分离到质粒pSMYl DNA,通过琼脂糖凝胶电泳和电镜观察,测定pSMYl的分子量为7．17×10⁶道尔顿。用限制性内切酶EcoRI、PstI、XhoI、SalI和BamHl酶切该质粒DNA,构成了pSMYl的限制性内切酶酶切图谱。EcoRI、Pstl对该质粒均只有一个切点。pSMYI能转化到变青链霉菌1326(S.lividansl326)菌株中能稳定地存在,且具有形成麻点(pock)的特性。     

丁酰苷菌素产生菌Bacillus circulans3342质粒pBCl的分离及其性质

在氨基寡糖类抗生素丁酰苷菌素的产生菌Bacillus circulans 3342中发现了一种质粒DNApBC1,其分子量为9.0×10~6道尔顿。 用限制性内切酶BglⅠ、SmaⅠ和Hind Ⅲ酶切这种质粒DNA,构成了pBC1的限制性内切酶图谱。selⅠ、SmaⅠ和Hind Ⅲ分别将这种质粒DNA切为2、2和5条片段,EcoRI则切为4条片段,而SalⅠ、Bam HI和Pv(?) Ⅱ不能切这种质粒DNA。     

质粒介导的炭疽毒素产生的证据

<正>炭疽杆菌是炭疽的病原菌,而炭疽是一种具有相当经济重要性的高度传染病。家畜诸如牛、绵羊、山羊和马是该病最普通的受害者;而炭疽的人类病例经常是由于暴露于受染动物或动物制品诸如皮革,毛发、肉或骨而发生。大多数的人类炭疽病例实际上是皮肤型的,同时对抗生素类药物的反应良好。但是胃肠型和肺型虽然在所有人类病例中少于5％,却常常是致命的。     

低温菌启动子探针质粒的构建

为了在宿主菌Acinetobacter sp.DWC6中构建低温菌蛋白表达载体,以pBR322质粒为基础,去除质粒上β-内酰胺酶基因的启动子片段,取而代之为来源于质粒pJRD215的卡那霉素抗性基因片段,并在pBR322中插入Acinetobacter菌属特异性ori的DNA片段,构建了能在Acinetobacter sp.DWC6和E.coli中正常复制的启动子探针质粒pBAP1。通过在质粒pBAP1中的β-内酰胺酶基因上游随机导入Acinetobacter sp.DWC6基因组片段,通过检测宿主细胞的氨苄青霉素抗性和β-内酰胺酶活性,来筛选强启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度。     

基因工程菌中重组质粒的稳定性研究进展

基因工程菌(细胞)是现代生物工程中的微型生物反应器,是基因工程的研究主体之一.获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞是基因工程的核心步骤与最终目的.基因工程菌重组质粒稳定性问题是基因工程菌工业化生产与实验研究中的最主要问题,就其在基因工程中的重要性、影响因素及提高稳定性策略方面作简要介绍并展开综述.     

乳酸产生菌的选育

从5种菌株中,通过初筛和复筛筛选出一种变色范围大,产乳酸量高的菌株D(产酸量为69.36g/L),以此菌株作为出发菌,进行紫外诱变育种。从诱变处理后的计数平板上,选取10株hc值大的菌株,通过复筛最终选出了一株平均产乳酸量高的菌株D_6,其产乳酸量平均为71.73 g/L,比出发菌株高出2.37g/L。