聚合酶链反应技术检测沙门菌的研究进展

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术用于沙门菌检测发展迅速,本文就：①沙门菌检测中的引物设计;②沙门菌ＤＮＡ提取方法;③检测沙门菌的ＰＣＲ方法;④ＰＣＲ扩增产物的检测;⑤各种ＰＣＲ方法检测沙门菌的特异性、敏感性及注意事项等方面简述该技术在沙门菌检测中的应用进展。     

快速鉴定诺卡菌的多重聚合酶链反应的建立

为快速准确鉴定诺卡菌,首先设计针对诺卡菌rpoB、secA1、16S rRNA基因的引物,利用单重聚合酶链反应(PCR)和测序验证引物的特异度,建立多重PCR鉴定系统,在同一反应体系和条件下对44株诺卡菌标准株、44株临床分离株和7株对照株进行扩增。结果显示,利用单对引物对其中2株诺卡菌(标准株DSM43003、临床株CDC 51)进行扩增,出现的条带均为与目的片段长度一致的单一条带,经测序并经基本局部比对搜索工具(BLAST)验证扩增片段为目的基因。建立的多重PCR结果显示,44株诺卡菌标准株中有43株(97.7%)、44株临床分离株中有42株(95.5%)rpoB、secA1、16S rRNA这3条片段均显示,7株对照株均未显示条带。结果提示,本研究建立的多重PCR简单、快速、灵敏度高、特异度好,适用于诺卡菌的快速鉴定。     

多重聚合酶链反应与荚膜肿胀试验对肺炎链球菌血清分型的比较研究

为评估多重聚合酶链反应（PCR ）对肺炎链球菌血清分型的可行性,分别采用多重PCR和荚膜肿胀试验对568株肺炎链球菌进行血清分型,并对分型结果进行比较分析。结果显示,568株肺炎链球菌中,213株通过荚膜肿胀试验分出16个血清群,主要有血清群19（23．1％,131／568）、6（5．3％,30／568）、23（1．6％,9／568）、14（1．4％,8／568）、9（1．1％,6／568）、15（1．1％,6／568）等,分型率为37．5％（213／568）;356株通过多重PCR分出21个血清群,主要有血清群19（27．8％,158／568）、23（8．5％,48／568）、6（7．4％,42／568）、14（4．4％,25／568）、3（4．2％,24／568）、15（3．5％,20／568）等,分型率为62．7％（356／568）。荚膜肿胀试验鉴定出血清群4和18,但多重PCR未能鉴定;多重PCR鉴定出血清群5、12、35、16、17和22,但荚膜肿胀试验未能鉴定。多重PCR与荚膜肿胀试验对19F、19A血清型的鉴定无显著差异。结果提示,这2种方法对肺炎链球菌血清分型结果有差别,多重PCR的分型率高于荚膜肿胀试验。对来源复杂的标本进行肺炎链球菌血清分型,2种方法可相互补充,以提高分型率。     

酯酶产生菌的分离与酶学性质研究

从餐馆附近下水道收集到的土壤中分离获得6株酯酶产生菌,其中S2菌株活性最高,从其形态特征、生理生化试验以及16S rRNA序列分析等方面,初步鉴定S2菌株为假单胞属(Pseudomonas sp.)。对该菌株的部分酶学性质进行了研究,发现该菌株所产的酯酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0;且该酯酶在温度为60℃以下和pH 7.0～10.0具有良好的稳定性。     

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属含α－毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆,结果在３６小时后,各种不同毒 的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同,用紫外吸收法测定蛋白质含量,发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降,这表明α－毒伞肽的作用机理确是通过抑制ＲＮＡ聚合酶Ⅱ而导致蛋白质合成减少。     

肠膜明串珠菌对常见致病菌的拮抗试验

肠膜明串珠菌（L。nterords）是在天然或人工的食品与植物环境中与乳酸细菌共生,本试验菌是从蛋白发酵饲料中分离出的1株乳酸细菌,用该菌发酵的饲料饲养助禽幼畜,抗病力强,成活率高,生长发育快。为研究其作用机理,进行了孩菌对常见致病菌的桔抗试验。1材料与方法三．五材料1．1．1试验菌种肠膜明串珠菌、大肠埃希菌。伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、福氏志贺菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌,均为教研室保存。1．1．2培养基SZ固体培养基黄豆芽汁100nd,蔗糖2．sg,营养琼脂4g;SZ液体培养基：黄豆芽汁50rnl,肉膏汤50llil,蔗糖2…     

实时聚合酶链反应方法检测人偏肺病毒的比较研究

人偏肺病毒(the human metapneumovims,hMPV)是2001年首次从荷兰儿童的鼻咽部吸出物中分离出来的,为一种负链RNA病毒,初步被归属于副粘病毒科偏肺病毒属。hMPV和流感病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、冠状病毒、人呼吸道合胞病毒(hRSV)一样可导致儿童、成人及免疫功能受损患者的急性呼吸道感染(ARTI)。在儿童病原体不明的ARTI中,hMPV占1．5％-10％。但是,该病毒在     

厌氧真菌菌系乙酰酯酶的特性研究

利用厌氧培养技术,采用产酶培养基,培养课题组自行构建的一组厌氧真菌菌系,使之产乙酰酯酶。采用硫酸铵分级沉淀、透析袋透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤柱层析,分离纯化所得到乙酰酯酶,研究其酶学性质。酶活力动态分析表明,乙酰酯酶在产酶培养基上,培养至第3天酶活力达到最高。乙酰酯酶最适温度为41℃,最适pH为9．0,Mg^2＋、K^＋、Ca^2＋对酶有一定的激活作用,Fe^3＋对酶有很强的抑制作用。该厌氧真菌菌系所产的乙酰酯酶,对于发酵木质纤维素类物质具有潜在应用价值。     

几种不同鹅膏菌毒素对真核生物RNA聚合酶Ⅱ抑制作用的比较研究

用鹅膏菌属（Amanita）含α-毒伞肽的毒素粗提液培养新鲜绿豆,结果在36小时后,各种不同毒苗的毒素粗提液培养的绿豆生长情况有明显不同,用紫外吸收法测定蛋白质含量,发现毒素粗提液培养的绿豆细胞中蛋白质含量比蒸馏水培养的有明显下降,这表明α-毒伞肽的作用机理的确是通过抑制RNA聚合酶Ⅱ而寻致蛋白质合成减少。     

中型滇丁香抑菌及抗耐药菌株作用的研究

采用平板法 ,对中型滇丁香乙醇浸膏抑菌和抗耐药菌株的活性进行研究 ,发现其对金黄葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌敏感菌株具有抑制或杀菌作用 ;对金黄葡萄球菌、大肠埃希菌的耐药菌株没有抑菌或杀菌的作用 ;以青霉素为对照 ,发现其对大肠埃希菌和白色念珠菌的抑菌作用比青霉素明显。     

碱性脂肪酶产生菌扩展青霉W—1382的诱变育种

以扩展青毒（Ｐｅｎｉｃｉｌｕｍｅｘｐａｎｓｕｍ）Ｓ－１４作为出发菌株,分别比较ＵＶ、Ｃｏ６０－γ射线、ＮＴＧ单因子的诱变效应和以ＮＴＧ、Ｃｏ６０－γ射线、ＵＶ＋ＮＴＧ作为诱变剂及自然分离在内四代的诱变育种。单因子诱变剂最适剂量分别为ＵＶ１５０ｓ,Ｃｏ６０－γ射线４８０００ｒａｄ,ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ８０ｍｉｎ,比较诱变效果表明：ＮＴＧ最佳,Ｃｏ６０－γ射线次之,ＵＶ较差;连续三代诱变各代诱变剂及剂量分别为ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ１００ｍｉｎ,Ｃｏ６０－γ射线２００００ｒａｄ,ＵＶ３０ｓ＋ＮＴＧ１５０μｇ／ｍｌ,４０ｍｉｎ。复合处理比单因子处理效果好。实验中选育成功高产酶变株Ｗ－１３８２,结合自然分离和诱变育种,其酶活力较出发菌株提高了５３．６％。     

微卫星多重PCR基因扫描在三疣梭子蟹个体识别中的应用

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是我国重要的渔业资源,隶属甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、梭子蟹科(Portunidae)、梭子蟹属(Portunus),主要分布于中国、朝鲜、日本等海域[1,2]。近年来,随着沿海各地人工养殖规模的扩展、捕捞强度的加大、人工放流以及生态     

微乳液凝胶及其固定化脂肪酶研究进展

利用微乳液胶凝现象来固定化酶是90年代初建立起来的酶固定化新技术,该技术为胶束酶学在生物合成与转化领域的应用奠定了基础.就微乳液凝胶及其固定化脂肪酶的制备、性质、微观结构及其潜在应用作了带有知识介绍性质的综述.     

IDENTIFICATION OF NEW TARGET SEQUENCES FOR PCR DETECTION OF VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS BY GENOME COMPARISON

A genome comparison method was used to identify specific target sequences for the polymerase chain reaction (PCR) detection of Vibrio parahaemolyticus, and the CDS value of this bacterium was compared with that of 139 other bacterial genomes. It was found that 20 CDS of V. parahaemolyticus were relatively specific according to their E value in BLAST (a new tool for comparing protein and nucleotide sequences), and four of them were selected for the design of PCR primers. There were positive amplification products of these four pairs of primers from nine V. parahaemolyticus strains, whereas there were no amplification products from nine other Vibrionaceae strains and four non -Vibrionaceae strains. An evaluation of detection sensitivities revealed that these four pairs of primers can be used in a PCR assay for the detection of V. parahaemolyticus.

PRACTICAL APPLICATIONS

An automatic BLAST method was developed in this study, by which species-specific sequences can be screened out rapidly. In this way, new and specific genes of Vibrio parahaemolyticus were identified to be used as target sequences for PCR detection. In terms of acceptable specificity and sensitivity, the four pairs of primers were selected by screening, which can be applied in PCR assays and other molecular methods. These kinds of methods might become commercial detection products in the new future. In addition, this method for searching specific DNA sequences can also be used for the mining specific sequences in other genus and species, such as Salmonella , Staphylococcus , etc.     

斑点热群立克次体的PCR／SSCP分型技术研究

本文应用PCR／SSCP技术对斑点热群立克次体国际标准株、国内各参考株及黑龙江立克农作54株、36株进行了分型鉴定。结果显示各株之间SSCP图谱差异明显,国内各参考株的SSCP,图谱与西伯利亚立克次体的图谱完全一致,黑龙江立克次作的图谱与国内各株显著不同。分析表明,我国存在2种斑点热群立克次体,即西伯利亚立克农作种和斑点热群立克次体新种－黑龙江立克次体。同时证明应用PCP／SSCP技术分析斑点热群立克农作型别,具有方法简单、经济省时、结果准确等优点。该分型技术应用于立克次体分型国内外未见报道。     

中型滇丁香挥发油化学成分分析

采用气相色谱/质谱联用,首次对中型滇丁香挥发油成分进行了研究,鉴定出53个化学成分,主要为脂肪族化合物、萜类化合物及芳香族化合物等,为今后对中型滇丁香生理活性研究提供了重要的理论依据.     

RT套式PCR检测血浆HCV RNA及与抗HCV检测的比较

应用微量血清热变性法提取核酸,逆转录套式聚合酶链反应(RT-nest PCR)检测血浆HCV RNA,并与抗HCV ELISA检测结果比较,对HCV RNA阳性标本进行HGV RNA的筛查.结果在32例抗HCV阳性和20例抗HCV阴性血浆中,HCV RNA分别检出18例和2例,总符合率为70%,20例HCV RNA阳性者中有2例合并感染HBV,1例合并感染HGV.证明血浆样本中抗HCV与HCV RNA间存在很大的相关性.     

一次PCR扩增单纯疱疹和巨细胞病毒基因的检测方法

宫内感染是影响优生优育质量的一个重要因素,由病毒引起的宫内感染主要有以下四类病原：ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＴＯＸＯ和风疹病毒（ＲＶ）,其中ＨＳＶ和ＣＭＶ的感染率较高。孕期这两种病原的感染会影响胎儿的正常发育,严重的可导致流产甚至胎儿畸形。目前已有针对这两种病...     

淡色库蚊酯酶等位基因及其在自然种群中的频率分布

酯酶基因扩增所产生的酯酶活性升高是库蚊Culex pipiens对有机磷杀虫剂抗性的主要机理之一。采用分子杂交技术和限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析,已鉴定出多种酯酶等位基因类型。该文通过酯酶基因特异性片段的PCR扩增及扩增片段的酶切片段分析,对淡色库蚊Culex pipiens pallens四种有机磷抗性品系的酯酶等位基因进行分型,并测定分析自然种群中不同酶型的频率分布。研究结果表明：PCR分型方法具有快速、准确的特点。不同的有机磷杀虫剂对酯酶等位基因具有明显的选择作用。双硫磷品系为B₁型;毒死蜱和敌百虫品系为B₂型;马拉硫磷品系为B₁型和B₁/B₂杂合型。不同地区采集的种群表现出不同的酶型频率分布。该文就杀虫剂对酯酶等位基因选择作用及自然种群的酶型频率分布进行了讨论。