五种啮齿类动物核型和血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

本文对5种啮齿类动物(岩松鼠、花鼠、五趾跳鼠、棕背(鼠平)和岢岚绒鼠)的核型及其血清蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了分析。通过分析结果,探讨了它们的核型及血清蛋白在其分类中的意义。     

臭鼩血清蛋白和六种组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

本实验对臭鼩的血清蛋白及心肌、骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏,睾丸6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析研究。臭鼩血清蛋白存在15—17条带,各组织的LDH同工酶均由5条带构成,其中心肌LDH-1、LDH-2和肾脏LDH-1各出现1条亚带。     

结构生物学研究方法的重大突破——电子直接探测相机在冷冻电镜中的应用

近年来,科学家应用冷冻电镜技术(cryo-EM)解析出了低对称性生物大分子的高分辨率(3~5魡)三维结构,并用其密度图直接进行了分子建模。与传统的X-射线和NMR方法相比,冷冻电镜技术具有适用于分子量较大的生物分子、样品不需结晶且用量很少等优势。尤其是电子直接探测相机(electron direct detection device,DDD)在冷冻电镜技术中的应用,使高分辨率的结构研究变得更加简单、应用更为广泛,是一个重大突破。文章介绍DDD相机的原理和技术优势,及其在解决冷冻电镜技术困难中的一些应用,进而展望了DDD相机可能给冷冻电镜技术应用带来的突破性进展。     

内蒙古草原五种啮齿动物肾脏形态学特征比较

啮齿动物的水平衡能力对其适应干旱环境至关重要。为理解啮齿动物对水环境的适应性,本研究以分布于内蒙古草原的长爪沙鼠 (Meriones unguiculatus)、布氏田鼠 (Lasiopodomys brandtii)、小毛足鼠 (Phodopus roborovskii)、坎氏毛足鼠 (Phodopus campbelli) 和黑线仓鼠 (Cricetulus barabensis) 为研究对象,测定了肾脏形态学指标、肾单位密度指标和尿液渗透压等,比较分析了肾脏形态结构与栖息地环境之间的关系。结果发现：5种啮齿动物肾脏髓质厚度随动物分布区域的变化,呈现从典型草原地区、半荒漠地区至荒漠和沙漠地区逐渐增加的趋势,干旱地区动物的尿液渗透压较高。5种动物的皮质肾单位密度无显著差异。近髓肾单位密度统计显示,黑线仓鼠大于小毛足鼠与坎氏毛足鼠,布氏田鼠与长爪沙鼠居中。这些结果表明,啮齿动物的肾脏形态指数和组织学指数可以在一定程度上反映哺乳动物肾脏浓缩尿液的能力,肾脏的结构具有可塑性以应对环境的变化。     

低温电镜技术及其在植物（动物）材料研究中的应用

通过一些实例介绍了高压冷冻,冷冻置换和冷冻超薄切片等低温电镜样品制备技术,并且与传统方法对照,说明低温电镜技术的优越性,其中,发菜（Nostoc flagelliforme)营养细胞的冷冻超薄切片（未经化学固定,脱水）所显示的超微结构更客观地反映了生物样品的自然生理状态。此外,应用高压冷冻和冷冻置换的免疫标记电镜技术,首次对发菜营养细胞中的DNA进行定位,明确了核区的位置及范围。     

孕期母体镉暴露对C57BL/6小鼠肝脏和肾脏的组织特异性氧化损伤作用

目的:探明孕期母体镉暴露对C57BL/6小鼠肝脏和肾脏组织的氧化损伤作用。方法:将45只初始体重相近的孕鼠,于妊娠第7.5 d(E7.5)随机分为3组,饲喂不同浓度的氯化镉溶液(0、20和40 mg/L),分别于E13.5、E16.5和E19.5收集获得各组孕鼠的肝脏和肾脏组织样本,每一妊娠阶段5只孕鼠,检测各组小鼠母体肝脏和肾脏组织抗氧化酶,包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性,脂质过氧化水平(MDA含量),蛋白质羰基化(PCO含量)和DNA-蛋白质交联(DPC)水平等指标的变化情况。结果:CAT活性在肝脏和肾脏组织中随镉浓度增加逐渐升高,随时间延长逐渐降低;GPx活性在肝脏组织中随时间延长而逐渐降低,而在肾脏组织中随时间延长而逐渐升高;SOD活性在E19.5的40 mg/L镉处理组小鼠肝脏组织中显著升高;PCO含量在肝脏和肾脏组织中随镉浓度增加而逐渐升高;DPC在肝脏和肾脏组织中随镉浓度增加和时间延长而逐渐升高;而MDA含量仅在肝脏组织中随镉浓度增加而逐渐升高,随时间延长而逐渐降低。结论:孕期镉暴露对母体肝脏和肾脏产生了明显的氧化损伤,这可能与镉致胎儿生长受限的毒性效应相关;孕期镉暴露诱导的母体肝脏和肾脏的氧化损伤指标的变化具有组织特异性,这可能与镉在母体肝脏和肾脏中的积累量不同有关。     

华南虎,金钱豹,云豹血清蛋白和LDH同工酶的电泳研究

当前有关大型猛兽的血清蛋白和同工酶的分析研究在国内外尚未见报道,我们应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对华南虎(Panthera tigris amoyensis)、金钱豹(Panthera pardus)、云豹(Neofelisnebulosa)3种动物的血清蛋白和LDH同工酶进行了分析比较,为开展对这3种动物研究工作提供生化指标。     

草地退化影响高原鼠兔血清总IgG水平、肠道寄生物感染及肝脏和肾脏指数

高原鼠兔(Ochotona curzoniae)作为青藏高原高寒草地生态系统中的关键物种,其种群数量随着过度放牧导致的草地退化而暴发式增长。阐明此过程中高原鼠兔天然免疫能力及肝脏和肾脏器官指数的变化,对深入揭示青藏高原草地退化引起的高原鼠兔种群暴发机理具有重要意义。本研究在青海海北高寒草地生态系统国家野外科学观测研究站地区,调查了轻度、中度、重度退化草地中高原鼠兔洞口数量,并测定了成体高原鼠兔血清总IgG含量、肠道寄生物感染状况及肝脏和肾脏指数。结果发现：随着草地退化,高原鼠兔洞口数量和血清总IgG水平显著增加;绦虫和线虫的感染率和感染强度以及肝脏和肾脏指数均显著降低。雄性对绦虫的感染率和肝脏指数显著低于雌性;雌性在重度退化草地中对绦虫和线虫的感染率及感染强度显著低于轻度退化草地。以上结果表明,过度放牧介导的草地退化增强了高原鼠兔的天然免疫功能,缓解了毒素对肝脏和肾脏的损伤,进而可能促进其种群暴发式增长。     

三种不同冷冻保护剂对小鼠附睾冷冻效果的比较

目的探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法性成熟并交配过的6~8周龄C57BL/6J雄鼠附睾,分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集,观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果三组冷冻复苏分离后的精子形态完整,具有镰刀头状结构;荧光染色后PROH组精子存活率为(88.17±3.43)%,明显高于DMSO组:(61.17±10.65)%和R18S3组(16.83±6.49)%(P0.05);经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠(DMSO∶PROH∶R18S3=13∶8∶17)。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻,但PROH冷冻效果较好。     

程序化冷冻前后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎的Hba-α蛋白分布和差异表达

目的利用程序化冷冻的方法,探究冷冻前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中Hba-α蛋白的分布和差异表达的变化,为今后开发和利用新型哺乳动物源抗冻蛋白提供理论依据。方法从妊娠d5小鼠体内获取孵化囊胚;从小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎,利用Confocal显微镜和Western Blot技术对程序化冷冻前、后的各组胚胎进行Hba-α蛋白的分布和表达检测。结果孵化囊胚和休眠胚胎在程序化冷冻前、后均有Hba-α蛋白的表达;孵化囊胚经程序化冷冻后Hba-α蛋白的表达与冷冻前相比差异无显著性(P0.05);冷冻前休眠胚胎与程序化冷冻前后的孵化囊胚相比,Hba-α蛋白的表达量显著下调(P0.05);冷冻后休眠胚胎Hba-α蛋白的表达量显著低于其他各组(P0.05)。结论程序化冷冻处理对小鼠休眠胚胎Hba-α蛋白的表达影响明显大于孵化囊胚;Hba-α基因具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。     

热习服对大鼠肾脏促红细胞生成素的影响

目的:探讨热习服对大鼠肾脏促红细胞生成素的影响.方法:雄性SD大鼠21只,按体重配对随机分为对照组、单次高温暴露组(高温组)和热习服组,每组7只,各组在各自的实验条件下进行10天,对照组大鼠第11天留取肾脏组织标本;高温组和热习服组第11天进行相同条件的标准热负荷实验后留取肾脏组织标本.采用用酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定肾脏组织中促红细胞生成素(Epo)含量,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测肾脏促红细胞生成素mRNA的表达,Western blot技术检测肾脏组织中促红细胞生成素蛋白表达水平的变化.结果:高温组与热习服大鼠肾脏促红细胞生成素水平明显高于对照大鼠(p＜0.05).热习服与高温组大鼠肾脏促红细胞生成素水平无明显差别.经RT-PCR检测,与对照组相比,高温组肾组织Epo mRNA表达显著增强(P＜0.05),而热习服组较高温组明显降低(P＜0.05),但仍然明显高于对照组的水平.Western blot实验中对照大鼠、高温组与热习服大鼠肾脏组织均有明显的Epo蛋白表达.与对照组相比,高温组Epo表达显著增强(P＜0.01),而热习服组较高温组明显降低(P＜0.05),但高于对照组的水平.结论:热习服后大鼠肾脏组织中促红细胞生成素含量明显升高,大鼠肾脏组织中促红细胞生成素mRNA与蛋白的表达均明显增强.提示热习服能显著提高肾脏Epo的表达水平,热习服后红细胞代谢变化可能与Epo水平提高有关.     

小鼠冷冻胚胎库

1972年惠廷厄姆(Whittingham)等和威尔马特(Wilmut)分別报告在超低温(-196℃)条件下冷冻保存小鼠早期胚胎获得成功。此后,这项技术又成功地用于保存大鼠、家兔、羊和牛早期胚胎。目前在国外牛早期胚胎冷冻保存已发展到商业规模,在实验室小鼠方面有些国家已经建立了相当规模的冷冻胚胎库。 小鼠是医学和生物学研究中广泛使用的实验动物,长期以来培育出大量近交系和突变系,     

三聚氰胺对SD孕鼠及胎鼠的毒作用

为阐明三聚氰胺对孕鼠和胎鼠毒性作用,将40只SD孕鼠随机分为高剂量组(Ⅰ)、中剂量组(Ⅱ)、低剂量组(Ⅲ)及空白对照组(Ⅳ),共4组,于妊娠第6~19天,分别经口灌服800 mg/kg·d、200 mg/kg·d、20 mg/kg·d和0 mg/kg·d三聚氰胺混悬液。染毒期间,观察孕鼠中毒表现,以及不同妊娠时间体重变化;于妊娠第20天处死母鼠,检测血清尿素氮、肌酐及尿酸,胎鼠及胎盘重量等指标;观察母鼠和胎儿肾脏、胎盘组织病理变化。结果显示,在染毒期,Ⅰ、Ⅱ组母鼠出现精神差等症状;与Ⅳ组相比,Ⅰ、Ⅱ组母鼠、胎鼠和胎盘重量,血液生化指标有显著或极显著差异(P0.05或P0.01),且Ⅰ、Ⅱ组母鼠、胎鼠肾脏以及胎盘有明显病理变化;但3个剂量水平的三聚氰胺对胚胎的存活无影响,也不产生致畸作用。     

冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像技术研究进展

冷冻聚焦离子束-扫描电镜成像(Cryo-FIB-SEM)是一种新兴的成像检测技术,在原位进行冷冻聚焦离子束切割和冷冻扫描电镜成像,为研究天然含水状态下生物样品内部未被破坏的原始结构打开了一扇窗口。近年来,该技术在生命科学领域的应用研究取得了一系列重要进展。该文对其在冷冻体积连续成像、冷冻光电关联成像、冷冻透射扫描成像、冷冻含水切片制备监控及冷冻扫描图像处理等方面的研究进展进行综述,并展望了该技术在大体积生物样品三维原位成像研究领域的前沿性发展趋势,以期推动Cryo-FIB-SEM技术在生物样品三维结构研究中的应用。     

冷冻液温和季节对鼠尾过冷点的影响

为研究动物对寒冷的适应性,将鼠尾置于冷液浸冻,发现在一定条件下鼠尾组织可发生过冷现象。实验表明,鼠尾组织的过冷点和冷冻液温有关,同一季节冷冻液温越低过冷点越高;而不同季节相同冷冻条件下,冬季鼠尾组织的过冷点明显低于春季。 动物肢体组织的过冷特性是动物的抗寒冷特性,它和组织自身的物理化学性质有关。理沦证明,过冷度(△T)和表面张力(O)、摩尔质量(M),冰点(Ti)、密度(p)、摩尔凝固热(△H)及冰胚临界半径(rk)有关,其关系式为△T=26MTi/p△Hrk.     

绿色荧光蛋白转基因小鼠模型的建立及胚胎冷冻保种

目的建立绿色荧光蛋白转基因小鼠模型,并采取胚胎冷冻的方法进行保种。方法通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。经鉴定对有表达的转基因鼠进行胚胎冷冻保种。结果移植注射胚胎385枚给30只假孕小鼠共出生了306只后代鼠,经PCR和southern blot检测得到5只阳性小鼠。F2代转基因鼠胚胎冷冻240枚胚胎。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP的转基因小鼠模型。     

东方田鼠精子体外培养及冷冻复苏的研究

东方田鼠 (MicrotisfortisBuechner)作为一种野生鼠 ,具有天然的抗日本血吸虫感染的特性 ,本文就东方田鼠的精子体外培养、冷冻、复苏做了初步的研究。东方田鼠引自中国科学院长沙农业现代化研究所 ,为东方田鼠长江亚种 ,封闭人工繁殖两年。实验前取青壮年鼠12只 ,于采精前一周单笼饲育。颈椎处死雄鼠后 ,取附睾上体 ,除去脂肪及血迹 ,轻柔揉捏上体 ,用解剖针挑出精子团放入预先培养的 2 0 0 μlHTF溶液中 ,培养 1小时后 ,进行形态观察并计算精子活力。精子冷冻、复苏及精子的体外受精均采用Nakagata法进行。结果显示 ,东方田鼠精子的头…     

扫描电镜乙醇冷冻制断器

1980年上海生理所电镜室仿效日本EIKO厂生产的TF-Ⅰ型冷冻割断装置,用钢精锅试制了以DMSO法为主的冷冻割断器,促进了扫描电镜冷冻技术的普及提高。笔者在田中敬一教授乙醇冷冻剖断法原理的基础上,设计并加工制作了简易乙醇冷冻割断器(见图1a)。     

黄毛鼠内脏器官重量和含水量的测定

对黄毛鼠部分内脏器官的重量,相对重量（脏器指数）及含水量进行了测定。结果表明,心,肝,肺,肾脏的重量与体重存在正相关关系,相对重量与体重存在负相关关系;心,肺,肾脏相对重量存在年龄和性别差异,成年鼠的脾脏含水量高于未成年鼠。     

高原鼠兔血清中N-isopropyl oxamate的RP-HPLC检测方法的建立

目的:探索N-isopropyl oxamate和血清蛋白结合水平,建立高原鼠兔血液中精子型乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性抑制剂N-isopropyl oxamate的高效液相色谱(HPLC)检测方法。方法:取体重150~200 g高原鼠兔20只,随机分为对照组和抑制剂组(n=10)。通过外源性加入不同浓度的N-isopropyl oxamate,检测其与血清蛋白的结合水平。采用将血清先用胰蛋白酶酶解,再加入三氯乙酸的前处理法进行HPLC检测。结果:当空白高原鼠兔血清加入抑制剂标准品达到血清中浓度为0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L、16.7 mmol/L、33.3 mmol/L、100 mmol/L时,抑制剂与血清蛋白的结合率分别为100%、100%、100%、86.84%、54.11%、40.10%、20.18%。在本文建立的方法下,回收率、精密度、稳定性均良好。N-isopropyl oxamate在0.0125~0.25 mmol/L内浓度与峰面积线性关系好。空白血清加入标准品达到终浓度为0.15 mmol/L、0.3 mmol/L和1 mmol/L时,平均回收率分别为98.05%、98.98%、98.12%;精密度相对标准偏差(RSD)分别为1.17%、0.92%、0.83%;稳定性RSD分别为1.38%、1.40%、0.88%。方法的重复性RSD为1.76%,最低定量限为0.0125 mmol/L。结论:N-isopropyl oxamate与高原鼠兔血清具有很强的亲和力,直接用三氯乙酸沉淀蛋白的前处理方法无法准确检测其浓度,而先用胰蛋白酶消化血清,再用三氯乙酸沉淀蛋白的方法可实现血液中HPLC的精确检测。